前列腺癌的生物标记制造技术

本发明专利技术提供以蛋白质为基础的生物标记，也就是蛋白Ｃ抑制剂（ＰＣＩ），用于鉴别病人的前列腺癌状态。特别地，本发明专利技术的生物标记用于分类受测样本为前列腺癌或非前列腺癌。生物标记可通过ＳＥＬＤＩ质谱分析检测。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术提供对于检测前列腺癌来说是重要的生物标记。此生物标 记的识别是通过使用SELDI分析区别前列腺癌患者与健康个体的血清 蛋白图谱。本专利技术提供与生物标记相关的系统和方法，其中，生物标 记用于鉴别前列腺癌的状态。本专利技术也确认所述生物标记为公知的蛋 白C抑制剂(Protein C Inhibitor,简称PCI)。
技术介绍
前列腺癌是男性最常见的癌症类型。在2002年，预计在男性中将 有189，000件的新癌症病例，并有30，200例将死于此疾病。早期检测 出被限定在前列腺的前列腺癌，并通过前列腺癌根治术(手术)具有最 佳的治愈可能。尽管PSA被认为是一种有效的肿瘤标记，并实际上具 器官特异性，但是并不具癌症特异性。PSA浓度在患有前列腺癌与患有 良性前列腺疾病的男性中有相当大的重叠。PSA不能从患有非器官限定 的前列腺癌男性(不会受益于手术)中区分出患有器官限定的前列腺癌 男性(会受益于手术)。因此，PSA对于选择适合前列腺根治术的病人并 不具有功效。当前，前列腺癌的早期检测和诊断是依靠直肠指检(digital rectal examination ，简称DRE)、前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,简称PSA)测量、经直肠超声术(transrectal ultrasonography,简称TRUS)和经直肠针刺活检(transrectal needle bi叩sy，简称TRNB)。目前，血清PSA测量与DRE的组合为检测和诊断 前列腺癌的主要方法。商业上可得到的PSA分析通常以试剂盒出售，此分析在区域性或 地方性的实验室中进行。然而，前列腺特异性抗原(PSA)和前列腺酸性 磷酸酶(prostatic acid phosphatase,简称PAP)具有局限的治疗和诊 断可能性。举例来说，PSA的水平与前列腺癌的存在经常没有很好的关 联，在部分包括良性前歹關泉增生症(benign prostatic hyperplasia, 简称BPH)的非前列腺癌病例呈阳性反应。此外，PSA的测量与前列腺 的体积相关，并且无法指明转移的水平。这些试剂盒在现行早期检测前列腺癌的方案上扮演部分角色。然 而，当阴性直肠指检(DRE)遇到适度地非正常PSA值(4-10 ng/ml)时将 产生问题。仅有20-30%具有这些发现的个体在活检中证明为癌症 (Kantoff 禾口 Talcott， 8(3) Hematol. Oncol. Clinics N Amer 555(1994))。因此，发展提高PSA测试阳性预测值的方案是重要的。 这样的方案包括建立经年龄调整的正常范围、确定游离与全部PSA的 比例、修正前列mmt^喷h-^a计算PSA值变化的速率(Kantoff 和Talcott， 8(3) Hematol. Oncol. Clinics N Amer 555(1994)以及 Brawer， 45 CA-A Cancer J Clinicians 148 (1995))。尽管每种方案 均有一定作用，关于如何处理PSA阳性和DRE阴性的病人仍存在相当 大的不确定性。另外，PSA并不是一种疾病特异性标记，因为在大部分患有BPH 和前列腺炎的病人中可检测到提高的PSA水平(25-86%) (Gao et al.， 1997， Prostate 31: 264-281)，并且在其它非恶性疾病和一些正常男 性中，它是显著局限标记的诊断特异性的因素。举例来说，在BPH中 可观察到血清PSA提升为4到10 ng/ml，甚至在前列腺炎中可观察到 更高的数值，尤其是急性前列腺炎。BPH是男性中极为常见的疾病。进 一步混淆此情况的事实为血清PSA的提升可在没有任何指明为DRE疾 病下被检测，反之亦然。另外，目前PSA已被认为不具前列腺特异性 (Gao et al.如前，重新检阅)。对于晚期前列腺癌的处理更可靠和有益的阶段发展以及预防方法 也是需要的。临床确定前列腺肿瘤的阶段是依靠直肠检查，确定肿瘤 是否在前列腺囊的区域内(局部限定)或超出其区域(局部晚期)，并且 搭配血清PSA测定和经直肠超声引导活检。然而，这些技术中没有一7种在预测疾病的进程上被证明为可靠的。因此，有需要可特异性识别前列腺癌、可从良性增生症中区分出 前列腺癌、可在即使低PSA水平下识别前列腺癌，以及识别疾病进程 的阶段的方法。
技术实现思路
本专利技术通过测量特异性的生物标记提供用于确定前列腺癌状态的 敏感且快速的方法和试剂盒。在病人样本中测量标记，提供诊断者可 能的人类癌症诊断或阴性诊断(例如正常或非疾病)相关联的信息。标记的特征在于它的分子量和已知的蛋白质特性，蛋白C抑制剂("PCI")。通过使用多种分离技术可将标记从样本的其它蛋白质中分辨出，例如 通过层析分离搭配质谱分析、利用固定抗体的蛋白质捕捉或是通过传 统的免疫分析。在优选的具体实施例中，分离的方法包含表面增强激光角军吸/离子化(Surface—Enhanced Laser Desorption/Ionization， 简称"SELDI")质谱分析，其中，质谱分析探针的表面包括结合标记 的吸附剂。本专利技术提供鉴别受测对象前列腺癌状态的方法，其包括(a)测量来 自受测对象样本的PCI生物标记，以及(b)将测量与前列腺癌的状态相 关联化，特别是经由Gleason评分。在特定的方法中，测量的步骤包 括检测样本中生物标记的存在或不存在。在其它方法中，测量的步骤 包括量化样本中标记的含量。在其它的方法中，测定的步骤包括鉴别 样本中生物标记的类型。在特定的具体实施例中，本专利技术可在血清PSA水平提高的男性中 确定患有前列腺癌的病人和患有良性前列腺疾病的病人的区别。绝大 多数此类病患的血清游离和总PSA的比例范围为10-20%(或复合物和 总PSA比例的相当范围)，此为诊断的灰色区域。所揭示的生物标记具 有在此范围内增进癌症检测的可能性。本专利技术也有关于方法，其中测量的步骤包括提供受测对象的血 液或尿液或血液/尿液衍生物的样本；利用阴离子交换树脂分离样本中 的蛋白质，收集含有PCI的馏分，PCI则收集自包含结合此蛋白质生物 标记的捕捉剂的基材表面。血液的衍生物如血清或血浆。在优选的具体实施例中，基材是包括IMAC铜表面的SELDI探针，并且其中蛋白质 标记通过SELDI检测。在其它的具体实施例中，基材为包括结合PCI 的生物特异亲和性试剂的SELDI探针，并且其中蛋白质生物标记通过 SELDI检测。在其它的具体实施例中，基材是包括结合PCI的生物特异 亲和性试剂的微孔板，并且蛋白质生物标记通过免疫分析检测。在特定的具体实施例中，此方法进一步包括基于通过此方法所确 定的状态来处理受测对象的治疗。举例来说，若本专利技术方法的结果为 不确定的或有必要进行状态的确认，医生可安排更多的测试。或者， 若状态指明手术是合适的，医生可为病患进行手术的排期。同样地， 若测试的结果为阳性，例如状态为晚期前列腺癌或状态为急性，则没 有进一步的行动可被保证。此外，若结果显示治疗成功，则无进一步 处理的必要。本专利技术也提供在处理受测对象后再次测定PCI生物标记的方法。 在这些实例中，处理治疗受测对象的方法依据所获得的结本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴别受测对象中的前列腺癌状态的方法，包括：　　　　（ａ）测量来自所述受测对象生物样本中的ＰＣＩ生物标记；以及　　　　（ｂ）将所述测量与前列腺癌的状态进行关联化。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：Z张，DW陈，CN罗森茨魏希，
申请(专利权)人：约翰霍普金斯大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]