重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法及其在制备重组手足口病疫苗中的应用技术

本发明专利技术实施例公开了一种重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法及其在制备重组手足口病疫苗中的应用。所述测定方法包括以下步骤：制备样品溶液；样品溶液通过顶空进样器进入气相色谱仪，测定样品溶液中的甲醇含量。实施本发明专利技术，可对重组手足口病疫苗原液的甲醇残留量进行准确测定，为重组手足口病疫苗安全性提供依据，为工艺的稳定性提供真实、可靠、有效的数据。

Determination of methanol residue in the original solution of recombinant HFMD vaccine and its application in the preparation of recombinant HFMD vaccine

【技术实现步骤摘要】
重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法及其在制备重组手足口病疫苗中的应用
本专利技术涉及基因工程重组手足口病疫苗制备技术，尤其涉及一种重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法及其在制备重组手足口病疫苗中的应用。
技术介绍
甲醇作为能源和诱导剂在重组汉逊酵母等表达的手足口病疫苗制备过程中不可或缺，但其微量残留对疫苗制品的安全性带来极大隐患。由于酵母在发酵过程中加入甲醇作为能源和诱导剂，而重组手足口病疫苗接种对象主要为未满周岁幼儿，其对甲醇残留的耐受度更低，即使微量残留亦会引起皮肤红晕等不适。因此对于重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量的检测显得尤为重要。现有技术中，尚缺乏准确测定重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量的方案。
技术实现思路
本专利技术所解决的技术问题是，提供一种重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法，该方法可对重组手足口病疫苗原液的甲醇残留量进行准确测定，为重组手足口病疫苗安全性提供依据，为工艺的稳定性提供真实、可靠、有效的数据。本专利技术进一步所解决的技术问题是，提供一种重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法在重组手足口病疫苗制备过程中的应用，该应用可对重组手足口病疫苗原液的甲醇残留量进行准确测定，为重组手足口病疫苗安全性提供依据，为工艺的稳定性提供真实、可靠、有效的数据。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法，包括以下步骤：制备样品溶液；样品溶液通过顶空进样器进入气相色谱仪，测定样品溶液中的甲醇含量。在一些可能的实施方式中，所述样品溶液包括：溶剂对照样品、系统适用性样品、标准曲线溶液、供试品。在一些可能的实施方式中，所述甲醇含量通过以下步骤测定：检测样本信号；按照外标法以甲醇标准曲线溶液浓度为横坐标，对应的甲醇峰面积为纵坐标拟合直线回归方程，并将样品的甲醇峰面积均值代入方程，计算出样品溶液甲醇含量测定值。在一些可能的实施方式中，所述溶剂对照样品为含100μg/mL聚山梨酯80的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。在一些可能的实施方式中，所述系统适应性样品通过以下步骤制备：取甲醇对照品制备甲醇对照品贮备液，加入含聚山梨酯80的磷酸盐缓冲液定容，得到甲醇对照品溶液；取若干份甲醇对照品溶液，得到若干份系统适应性样品。在一些可能的实施方式中，所述标准曲线溶液通过以下步骤制备：取若干份不同体积的甲醇对照品贮备液，在每份甲醇对照品贮备液中加入含聚山梨酯80的磷酸盐缓冲液至相同体积，配制成若干份不同浓度的甲醇标准曲线溶液。在一些可能的实施方式中，所述甲醇标准曲线溶液的溶度分别为2.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/mL。在一些可能的实施方式中，采用火焰离子化检测器检测样本信号。在一些可能的实施方式中，所述手足口病疫苗为重组肠道病毒71型疫苗。相应地，本专利技术还公开了一种上述重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法在制备手足口病疫苗中的应用。本专利技术的有益效果是：本专利技术的实施例通过制备样品溶液并使得样品溶液通过顶空进样器进入气相色谱仪，测定样品溶液中的甲醇含量。从而准确地测定了重组手足口病疫苗原液中甲醇含量。操作简便，对微量甲醇残留检测准确性高，为重组手足口病疫苗的安全性提供可靠数据，同时也为其他重组蛋白类疫苗甲醇残留量检测提供参考。具体实施方式下面详细描述本专利技术提供的重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法的实施例；本实施例主要包括以下步骤：制备样品溶液；样品溶液通过顶空进样器进入气相色谱仪，测定样品溶液中的甲醇含量。在一些可能的实施方式中，所述样品溶液包括：溶剂对照样品、系统适用性样品、标准曲线溶液、供试品。在一些可能的实施方式中，所述甲醇含量通过以下步骤测定：检测样本信号；按照外标法以甲醇标准曲线溶液浓度为横坐标，对应的甲醇峰面积为纵坐标拟合直线回归方程，并将样品的甲醇峰面积均值代入方程，计算出样品溶液甲醇含量测定值。在一些可能的实施方式中，所述溶剂对照样品为含100μg/mL聚山梨酯80的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。在一些可能的实施方式中，所述系统适应性样品通过以下步骤制备：取甲醇对照品制备甲醇对照品贮备液，加入含聚山梨酯80的磷酸盐缓冲液定容，得到甲醇对照品溶液；取若干份甲醇对照品溶液，得到若干份系统适应性样品。在一些可能的实施方式中，所述标准曲线溶液通过以下步骤制备：取若干份不同体积的甲醇对照品贮备液，在每份甲醇对照品贮备液中加入含聚山梨酯80的磷酸盐缓冲液至相同体积，配制成若干份不同浓度的甲醇标准曲线溶液。在一些可能的实施方式中，所述甲醇标准曲线溶液的溶度分别为2.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/mL。在一些可能的实施方式中，采用火焰离子化检测器检测样本信号。在一些可能的实施方式中，所述手足口病疫苗为重组肠道病毒71型疫苗。本专利技术实施例公开的一种重组手足口病型疫苗原液中甲醇残留量测定方法在制备手足口病疫苗中的应用，包括有如前述实施例所描述的甲醇残留量测定方法，其余与现有技术相同，不再一一赘述。为了更进一步阐释本实施例为达成预定专利技术目的所采取的的技术手段和效果，对本实施例重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法的具体步骤，通过实例数据详细说明如下。实施例1：仪器设备：(1)气相色谱仪：安捷伦7890B型(2)顶空进样器：安捷伦7697A型(3)分析天平：SartoriusAC-210S，分度值0.1mg(4)氢气发生器厂家和型号：北京东方精华苑科技SGH-300高纯氢发生器(5)分析色谱柱：AgilentTechno1ogiesDB-624毛细管色谱柱，长30m，内径0.32mm，膜厚1.80μm，温度范围-20℃～260℃。(6)顶空瓶：安捷伦，20mL(7)氮气：高纯氮气，纯度≥99.999％。试剂：甲醇对照品：国药集团化学试剂有限公司，货号SCRC40030561，色谱纯(GC)检测步骤：(1)1000μg/mL甲醇对照品贮备液的制备，精密量取甲醇对照品100mg到装有少量纯化水的100ml容量瓶中，并用纯化水定容至刻度线，混合均匀，得到1000μg/ml甲醇对照品贮备液。(2)含100μg/mL聚山梨酯80的0.01mol/L磷酸盐缓冲液的制备，精密称取磷酸氢二钠0.696g，一水磷酸二氢钠0.734g，氯化钠8.766g，聚山梨酯80100mg，加入纯化水定容至1000mL。(3)溶剂对照制备，量取1mL含100μg/mL聚山梨酯80的0.01mol/L磷酸盐缓冲液置于20mL顶空瓶中，制备1份样品。(4)系统适用性样品制备，取1000μg/mL甲醇对照品贮备液0.1mL，加含100μg/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种汉逊酵母表达的重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：/n制备样品溶液；/n样品溶液通过顶空进样器进入气相色谱仪，测定样品溶液中的甲醇含量。/n

【技术特征摘要】
1.一种汉逊酵母表达的重组手足口病疫苗原液中甲醇残留量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
制备样品溶液；
样品溶液通过顶空进样器进入气相色谱仪，测定样品溶液中的甲醇含量。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品溶液包括：溶剂对照样品、系统适用性样品、标准曲线溶液、供试品。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述甲醇含量通过以下步骤测定：
检测样本信号；
按照外标法以甲醇标准曲线溶液浓度为横坐标，对应的甲醇峰面积为纵坐标拟合直线回归方程，并将样品的甲醇峰面积均值代入方程，计算出样品溶液甲醇含量测定值。


4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述溶剂对照样品为含100μg/mL聚山梨酯80的0.01mol/L磷酸盐缓冲液。


5.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述系统适应性样品通过以下步骤制备：
取甲醇对照品制备甲...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟子辉，蒋聪俐，雷国民，柯林源，顾美荣，张改梅，甘建辉，
申请(专利权)人：深圳康泰生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44