四价流感病毒鸡胚培养工艺、四价流感病毒裂解疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术实施例提供了一种四价流感病毒裂解疫苗鸡胚培养工艺、四价流感病毒裂解疫苗制备方法及相关产品。所述培养工艺包括建库、接种、增殖和冷胚步骤，其特征在于，在所述冷胚步骤之前，还包括速冻步骤：在

【技术实现步骤摘要】
四价流感病毒鸡胚培养工艺、四价流感病毒裂解疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及流感疫苗
，尤其涉及一种四价流感病毒裂解疫苗鸡胚培养工艺、四价流感病毒裂解疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]四价流感病毒裂解疫苗基本都是通过鸡胚增殖培养制备。在鸡胚中增殖培养病毒，收获鸡胚尿囊液后，对其进行纯化获得单价原液，混配得到四价流感病毒裂解疫苗。现有技术中，四价流感病毒鸡胚培养工艺主要包括病毒接种、培养、冷胚后，收获尿囊液等步骤。采用现有的四价流感病毒鸡胚培养工艺，可得到基本符合药典要求的四价流感病毒裂解疫苗的单价原液。但是所需时间较长，收获液的血凝滴度和病毒滴度较低、蛋白含量较高，料液不够澄清。

技术实现思路

[0003]本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种四价流感病毒裂解疫苗鸡胚尿囊培养工艺、以大幅缩短生产时间，提高收获液的血凝滴度和病毒滴度；降低蛋白含量、使得料液更加澄清。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术公开了以下技术方案：
[0005]一种四价流感病毒裂解疫苗鸡胚尿囊培养工艺，包括建库、接种、增殖和冷胚步骤，在所述冷胚步骤之前，还包括有：
[0006]速冻步骤：在
‑
20
±
5℃条件下，冷冻0.5
‑
1.5小时。
[0007]作为一些可能的实施方式，所述建库步骤包括：
[0008]将病毒种子经缓冲液稀释至适宜浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚培养，收获尿囊液；其中，所述缓冲液为PH值为8.0、添加了蔗糖的磷酸盐缓冲液，其蔗糖含量以质量计为2％
‑
5％。
[0009]作为一些可能的实施方式，所述建库步骤具体包括：
[0010]主种子批建库：原始种子开启，经所述缓冲液稀释至3.0
‑
7.0lg EID
50
/ml浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚，在33
‑
35℃条件下，对甲型流感病毒培养48
‑
54小时、对乙型流感病毒培养60
‑
66小时，收获尿囊液。
[0011]作为一些可能的实施方式，所述建库步骤还包括：
[0012]工作种子批建库：主种子批经所述缓冲液稀释至3.0
‑
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50
/ml浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚，在33
‑
35℃条件下，对甲型流感病毒培养48
‑
54小时、对乙型流感病毒培养60
‑
66小时，收获尿囊液。
[0013]作为一些可能的实施方式，在所述建库步骤中，每次收获尿囊液之前，均执行一次所述速冻步骤和冷胚步骤。
[0014]作为一些可能的实施方式，所述接种步骤具体包括：
[0015]取工作种子批病毒种子，用缓冲液将工作种子批毒种稀释成5.0
‑
7.0lg EID
50
/ml。
[0016]作为一些可能的实施方式，所述增殖步骤具体包括：
[0017]按照每胚0.2
±
0.05ml接种量，在培养温度34
±
1℃、湿度65
±
10％条件下，培养48
‑
72小时。
[0018]作为一些可能的实施方式，，所述冷胚步骤具体包括：
[0019]2‑
8℃冷胚5
‑
10小时后，收获尿囊液。
[0020]相应地，本专利技术还公开了一种四价流感病毒裂解疫苗的制备方法，采用如上所述的四价流感病毒裂解疫苗鸡胚尿囊培养工艺。
[0021]相应地，本专利技术还公开了一种四价流感病毒疫苗，通过上述方法制备得到。
[0022]本专利技术的有益效果是：
[0023]本专利技术实施例通过在四价流感病毒鸡胚培养工艺的冷胚步骤之前，实施速冻步骤，即在在
‑
20
±
5℃条件下，冷冻0.5
‑
1.5小时，从而大幅缩短了生产时间，提高了收获液的血凝滴度和病毒滴度并降低了杂蛋白含量，使得料液更加澄清。
具体实施方式
[0024]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合具体的实施例对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。
[0025]本专利技术提供的四价流感病毒鸡胚培养工艺的一个实施例，包括建库、接种、增殖和冷胚步骤，在所述冷胚步骤之前，还包括有：
[0026]速冻步骤：在
‑
20
±
5℃条件下，冷冻0.5
‑
1.5小时。
[0027]作为一些可能的实施方式，所述建库步骤包括：
[0028]将病毒种子经缓冲液稀释至适宜浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚培养，收获尿囊液；其中，所述缓冲液为PH值＝8.0、添加了蔗糖的磷酸盐缓冲液，其蔗糖含量以质量计为2％
‑
5％。
[0029]作为一些可能的实施方式，所述建库步骤具体包括：
[0030]主种子批建库：原始种子开启，经所述缓冲液稀释至3.0
‑
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50
/ml浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚，在33
‑
35℃条件下，对甲型流感病毒培养48
‑
54小时、对乙型流感病毒培养60
‑
66小时，收获尿囊液。
[0031]作为一些可能的实施方式，所述建库步骤还包括：
[0032]工作种子批建库：主种子批经所述缓冲液稀释至3.0
‑
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50
/ml浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚，在33
‑
35℃条件下，对甲型流感病毒培养48
‑
54小时、对乙型流感病毒培养60
‑
66小时，收获尿囊液。
[0033]作为一些可能的实施方式，在所述建库步骤中，每次收获尿囊液之前，均执行一次所述速冻步骤和冷胚步骤。
[0034]作为一些可能的实施方式，所述接种步骤具体包括：
[0035]取工作种子批病毒种子，用缓冲液将工作种子批毒种稀释成5.0～7.0lg EID
50
/ml。
[0036]作为一些可能的实施方式，所述增殖步骤具体包括：
[0037]按照每胚0.2
±
0.05ml接种量，在培养温度34
±
1℃、湿度65
±
10％条件下，培养48
‑
72小时。
[0038]作为一些可能的实施方式，所述冷胚步骤具体包括：2
‑
8℃冷胚5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种四价流感病毒鸡胚尿囊培养工艺，包括建库、接种、增殖和冷胚步骤，其特征在于，在所述冷胚步骤之前，还包括有：速冻步骤：在
‑
20
±
5℃条件下，冷冻0.5
‑
1.5小时。2.如权利要求1所述的四价流感病毒鸡胚培养工艺，其特征在于，所述建库步骤包括：将病毒种子经缓冲液稀释至3.0～7.0lg EID
50
/ml浓度后，接种9
‑
11日龄SPF鸡胚培养，收获尿囊液；其中，所述缓冲液为pH值＝8.0、添加了蔗糖的磷酸盐缓冲液，其蔗糖含量以质量计为2％
‑
5％。3.如权利要求2所述的四价流感病毒鸡胚培养工艺，其特征在于，所述建库步骤具体包括：主种子批建库：原始种子开启，经所述缓冲液稀释至3.0
‑
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/ml后，接种9
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11日龄SPF鸡胚，在33
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35℃条件下，对甲型流感病毒培养48
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54小时、对乙型流感病毒培养60
‑
66小时后，收获尿囊液。4.如权利要求3所述的四价流感病毒鸡胚培养工艺，其特征在于，所述建库步骤还包括：工作种子批建库：主种子批经所述缓冲液稀释至3.0
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：罗丹，蒋正东，刘鹏，朱志强，胡文超，喻浠明，
申请(专利权)人：深圳康泰生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：