一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法技术

本发明专利技术属于生物化学技术领域，具体涉及一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法，在噬菌体的保存方面，目前已知的有超低温冷冻保存(

【技术实现步骤摘要】
7.5；
[0013]优选的，步骤(2)中上层培养基中含噬菌斑100个且噬菌斑分散分布；
[0014]优选的，步骤(3)中VDS的配方为：NaCl 240g/L，MgCl2·
6H2O 30g/L，MgSO4·
7H2O 35g/L，KCl 7g/L，CaCl2(1mg/L)5mL，pH 7.5；
[0015]优选的，步骤(4)中噬菌体保存液：DMSO的体积比为93:7。
[0016]与现有技术相比，本专利技术方法的有益效果是：
[0017]本专利技术采用7％DMSO保存的噬菌体保存液对Virgibacillus sp.SK39的噬菌体进行保存，经过一年后仍然具有较强感染活性，对菌体活性保存时间长、效果好且保存条件简单，操作方便。
具体实施方式
[0018]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0019]实施例1
[0020]一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法，包括如下步骤：
[0021](1)将嗜盐细菌Virgibacillus sp.SK39接种入50mlCML培养基，在37℃、160rpm下振荡培养12h，得宿主菌悬液；
[0022]所述的CML培养基的配方为：酸水解酪蛋白7.5g/L，酵母粉10g/L，柠檬酸钠3.0g/L，KCl 2.0g/L，MgSO4·
7H2O 20g/L，FeSO4·
7H2O 0.05g/L，NaCl 120g/L，pH 7.5；
[0023](2)将噬菌体原液与宿主菌悬液混合均匀，加入0.5％琼脂粉，得含有噬菌体的上层培养基；其中上层培养基中含噬菌斑100个且噬菌斑分散分布；
[0024](3)在步骤(2)制备的含有噬菌体的上层培养基中加入1000μL VDS，先反复吹打，然后漩涡振荡1min，得噬菌体保存液；
[0025]所述VDS的配方为：NaCl 240g/L，MgCl2·
6H2O 30g/L，MgSO4·
7H2O 35g/L，KCl 7g/L，CaCl2(1mg/L)5mL，pH 7.5；
[0026](4)在930μL步骤(3)制备的噬菌体保存液中加入70μL 7％DMSO，混合均匀，在
‑
20℃下保存。
[0027]对比例1
[0028]一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法，包括如下步骤：
[0029](1)将嗜盐细菌Virgibacillus sp.SK39接种入50mlCML培养基，在37℃、160rpm下振荡培养12h，得宿主菌悬液；
[0030]所述的CML培养基的配方为：酸水解酪蛋白7.5g/L，酵母粉10g/L，柠檬酸钠3.0g/L，KCl 2.0g/L，MgSO4
·
7H2O 20g/L，FeSO4
·
7H2O 0.05g/L，NaCl 120g/L，pH 7.5；
[0031](2)将噬菌体原液与宿主菌悬液混合均匀，加入0.5％琼脂粉，得含有噬菌体的上层培养基；其中上层培养基中含噬菌斑100个且噬菌斑分散分布；
[0032](3)在步骤(2)制备的含有噬菌体的上层培养基中加入1000μL VDS，先反复吹打，然后漩涡振荡1min，得噬菌体保存液；
[0033]所述VDS的配方为：NaCl 240g/L，MgCl2
·
6H2O 30g/L，MgSO4
·
7H2O 35g/L，KCl 7g/L，CaCl2(1mg/L)5mL，pH 7.5；
[0034](4)在1mL步骤(3)制备的噬菌体保存液中加入0.5ml甘油与0.5mL双蒸水混合液，混合均匀，在
‑
20℃下保存。
[0035]对比例2
[0036]一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法，包括如下步骤：
[0037](1)将嗜盐细菌Virgibacillus sp.SK39接种入50mlCML培养基，在37℃、160rpm下振荡培养12h，得宿主菌悬液；
[0038]所述的CML培养基的配方为：酸水解酪蛋白7.5g/L，酵母粉10g/L，柠檬酸钠3.0g/L，KCl 2.0g/L，MgSO4
·
7H2O 20g/L，FeSO4
·
7H2O 0.05g/L，NaCl 120g/L，pH 7.5；
[0039](2)将噬菌体原液与宿主菌悬液混合均匀，加入0.5％琼脂粉，得含有噬菌体的上层培养基；其中上层培养基中含噬菌斑100个且噬菌斑分散分布；
[0040](3)在步骤(2)制备的含有噬菌体的上层培养基中加入1000μL VDS，先反复吹打，然后漩涡振荡1min，得噬菌体保存液；
[0041]所述VDS的配方为：NaCl 240g/L，MgCl2
·
6H2O 30g/L，MgSO4
·
7H2O 35g/L，KCl 7g/L，CaCl2(1mg/L)5mL，pH 7.5；
[0042](4)在20μL步骤(3)制备的噬菌体保存液中加入50μL步骤(1)制备的宿主菌悬液，混合均匀，静置15min，再加入含0.5％琼脂粉的上层CML培养基3ml，混合液摇匀后倒入1.5％琼脂粉的底层平板，待平板凝固后于倒置于37℃过夜培养(约12h)，于第二天观察平板有无噬菌斑出现。每次都用第一次制作出来的平板挑去其形态大小典型并与其它噬菌斑有较大间隔空间的噬菌斑制成保存液采用双层平板法验证其活性，并用封口膜将其封住，分别置于4℃保存。
[0043]按照实施例1和对比例1
‑
2所述的保存方法对噬菌体保存100天，同时对噬菌体的活性进行监测和对比，实施例1中噬菌体的活性基本趋于稳定，变化波动不大；对比例1在前35天内其活性良好，随后其活性开始大幅度的下降，在55天时，噬菌斑活性开始呈现相对稳定的下降趋势，活性下降了75％；对比例2中噬菌斑的数量一直呈下降趋势，在35天到55天下降尤为明显，活性下降了33.3％，之后下降速度缓慢。
[0044]对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。
[0045]此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将嗜盐细菌Virgibacillus sp.SK39接种入CML培养基，在37℃、160rpm下振荡培养12h，得宿主菌悬液；(2)将噬菌体原液与与宿主菌悬液混合均匀，加入0.5％琼脂粉，得含有噬菌体的上层培养基；(3)在步骤(2)制备的含有噬菌体的上层培养基中加入1000μLVDS，先反复吹打，然后漩涡振荡1min，得噬菌体保存液；(4)在步骤(3)制备的噬菌体保存液中加入DMSO，混合均匀，在
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20℃下保存。2.根据权利要求1所述的一种嗜盐细菌噬菌体的DMSO保存方法，其特征在于：所述步骤(1)中CML培养基的配方为：酸水解酪蛋白7.5g/L，酵母粉10g/L，柠檬酸钠3.0g/L，KCl2.0 g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李新，于慧瑛，
申请(专利权)人：运城学院，
类型：发明
国别省市：