具有降低的肝向性和增加的肌肉转导的AAV9和AAVrh74之间的肽修饰的杂合重组腺相关病毒血清型制造技术

本发明专利技术涉及重组腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其是包含至少一个拷贝的包含RGD基序的肽的AAV血清型9(AAV9)和AAV血清型74(AAVrh74)衣壳蛋白之间的肽修饰的杂合体，其中与不具有所述肽的重组杂合AAV衣壳蛋白相比，所述重组肽修饰的杂合AAV衣壳蛋白具有进一步降低的肝向性和增加的肌肉转导。本发明专利技术还涉及包装目标基因的衍生的肽修饰的杂合AAV血清型载体颗粒及其在基因治疗中的用途，特别是用于治疗神经肌肉遗传疾病，特别是肌肉遗传疾病。特别是肌肉遗传疾病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有降低的肝向性和增加的肌肉转导的AAV9和AAVrh74之间的肽修饰的杂合重组腺相关病毒血清型


[0001]本专利技术涉及重组腺相关病毒(AAV)衣壳，其是AAV血清型9(AAV9)和AAV血清型rh74(AAVrh74)衣壳蛋白之间的肽修饰的杂合体，与不具有所述肽的杂合AAV衣壳蛋白相比，该衣壳蛋白具有进一步降低的肝向性和增加的肌肉转导。本专利技术还涉及包装目标基因的衍生的肽修饰的杂合AAV血清型载体颗粒，及其在基因治疗中的用途，特别是用于治疗神经肌肉遗传疾病，特别是用于肌肉遗传疾病的用途。

技术介绍

[0002]重组腺相关病毒(rAAV)载体被广泛用于体内基因转移。rAAV载体是由直径20nm的衣壳和4.7kb的单链DNA组成的无包膜载体。基因组携带两个基因rep和cap，其侧接称为反向末端重复序列(ITR)的两个回文末端区域。cap基因编码组成AAV衣壳的三个结构蛋白VP1、VP2和VP3。VP1、VP2和VP3共享作为VP3全部的相同的C端。使用AAV2具有参考，VP1具有735个氨基酸序列(GenBank YP_680426)；VP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.重组腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白，其是包含至少一个拷贝的包含RGD基序的肽的AAV血清型9(AAV9)和AAV血清型74(AAVrh74)衣壳蛋白之间的肽修饰的杂合体，其中与不具有所述肽的杂合AAV衣壳蛋白相比，所述重组肽修饰的杂合AAV衣壳蛋白具有进一步降低的肝向性和增加的肌肉转导。2.根据权利要求1所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其通过将AAV9或AAVrh74衣壳序列中的可变区替换为其他AAV血清型衣壳序列的相应可变区而产生，其中所述AAV9衣壳的可变区对应于位于SEQ ID NO：1的AAV9衣壳中从第331
‑
493位的任一个至第556
‑
736位的任一个的序列，或位于SEQ ID NO：1的AAV9衣壳中第493
‑
556位的序列的至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或60个连续氨基酸的片段，和所述AAVrh74衣壳的可变区对应于位于SEQ ID NO：2的AAVrh74衣壳中从第332
‑
495位的任一个至第558
‑
738位的任一个的序列，或位于SEQ ID NO：2的AAVrh74衣壳中第495
‑
558位的序列的至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或60个连续氨基酸的片段。3.根据权利要求2所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其通过将对应于位于SEQ ID NO：1的AAV9衣壳中第449
‑
609位或位于SEQ ID NO：2的AAVrh74衣壳中第450
‑
611位的可变区替换为其他AAV血清型衣壳序列的相应可变区而产生。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其衍生自包含选自下组的序列的杂合AAV衣壳蛋白：SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4以及与所述序列具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的序列。5.根据权利要求4所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其衍生自包含选自下组的序列的杂合AAV衣壳蛋白：SEQ ID NO：3以及与所述序列具有至少85％、90％、95％、97％、98％或99％同一性的序列。6.根据权利要求5所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其衍生自包含序列SEQ ID NO：3的杂合AAV衣壳蛋白。7.根据权利要求1
‑
6任一项所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其中所述包含RGD基序的肽至多30个氨基酸。8.根据权利要求7所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其中所述肽包含以下任一种或由以下任一种组成：RGDLGLS(SEQ ID NO:8)、LRGDGLS(SEQ ID NO:14)、LGRGDLS(SEQ ID NO:15)、LGLRGDS(SEQ ID NO:16)、LGLSRGD(SEQ ID NO:17)和RGDMSRE(SEQ ID NO:18)。9.根据权利要求8所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其中所述肽包含SEQ ID NO:8或由SEQ ID NO:8组成。10.根据权利要求8或9所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其中所述序列SEQ ID NO：8和14
‑
18在其N
‑
和/或C
‑
末端侧接至多五个氨基酸。11.根据权利要求10所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其中所述序列SEQ ID NO：8和14
‑
18分别在所述肽的N
‑
和C
‑
末端侧接GQSG(SEQ ID NO:9)和AQAA(SEQ ID NO:10)。12.根据权利要求11所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其中所述肽包含SEQ ID NO:13或由SEQ ID NO:13组成。13.根据权利要求1
‑
12任一项所述的重组杂合AAV衣壳蛋白，其包含至多5个拷贝的包含RGD基序的肽。14.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：G，
申请(专利权)人：国家医疗保健研究所埃夫里瓦尔德艾松大学索邦大学肌肉学研究协会，
类型：发明
国别省市：