裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用，所述制剂包括噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002；其中，噬菌体PNJ1902的保藏编号为GDMCC NO：61890

【技术实现步骤摘要】
裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用。

技术介绍

[0002]大肠杆菌O157：H7(ATCC:43895)(购买于Testobio，产品编号TS205491)作为一种人畜共患病原菌，可引起人类出血性结肠炎(HC)，有时并发溶血性尿毒综合征(HUS)，严重者并发肾功能衰竭，死亡率较高。大肠杆菌ATCC:43895在猪、牛粪、猪肉和牛肉中的分离率非常高。其主要通过食物传播，对公众健康构成威胁。同时，研究发现，大肠杆菌ATCC:43895自1997年后在世界各地出现耐药菌株。因此，迫切需要新的抗生素替代品来预防和治疗大肠杆菌ATCC:43895疾病。
[0003]作为一种有效杀灭细菌的病毒，噬菌体在治疗细菌感染相关疾病方面的应用价值得到了重新评估。噬菌体作为一种天然抗菌药物，其固有毒性低，可自我复制，与宿主高度特异性结合，可与宿主共同进化，可有效治疗耐药菌引起的感染。与抗生素治疗大肠杆菌感染的小鼠模型相比，噬菌体疗法不仅可以降低体内大肠杆菌的含量，保证小鼠的正常生长，而且不会影响肠道菌群。这为今后治疗耐药菌引起的胃肠道感染提供了新思路。但是，目前来说，细菌对单个噬菌体容易产生抗性使单个噬菌体在应用上受到了很大的限制，即现有单个噬菌体对宿主菌刚开始裂解效果良好，但很快就会有抗性细菌产生，导致单个噬菌体失去对抗性细菌的裂解作用，不能满足生产需要。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于提供裂解性大肠杆菌噬菌体制剂及其制备和应用，噬菌体制剂的宿主菌为大肠杆菌O157：H7(ATCC:43895)，其对大肠杆菌ATCC:43895不同年龄的生物被膜具有有效的清除能力，在小鼠肠道中的应用实例也证实，当其用做于体内抑菌剂时具备良好的效果。
[0005]本专利技术目的之一在于提供一种裂解性大肠杆菌噬菌体制剂，所述制剂包括噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002；其中，噬菌体PNJ1902的保藏编号为GDMCC NO：61890
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B1，噬菌体PSD2001的保藏编号为GDMCC NO：61891
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B1，噬菌体PSD2002的保藏编号为GDMCC NO：61892
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B1。
[0006]在一些实施例中，本申请所述的噬菌体制剂中噬菌体PNJ1902、噬菌体PSD2001和噬菌体PSD2002的效价比例为(1～3)：(1～3)：(1～3)，优选的，噬菌体PNJ1902、噬菌体PSD2001和噬菌体PSD2002的效价比例为1：1：1。
[0007]申请人从江苏省南京市鸡场分离到噬菌体PNJ1902，从山东省菏泽市鸭场中筛选出为噬菌体PSD2001和噬菌体PSD2002，已于2021年8月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼)，所述的PNJ1902的命名为：大肠杆菌O157：H7噬菌体PNJ1902，分类命名为Escherichia coli phage，其保藏编号为GDMCC NO：
61890
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B1；所述的PSD2001的命名为：大肠杆菌O157：H7噬菌体PSD2001，分类命名为Escherichia coli phage，其保藏编号为：GDMCC NO：61891
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B1；所述的PSD2002的命名为：大肠杆菌O157：H7噬菌体PSD2002，分类命名为Escherichia coli phage，其保藏编号为：GDMCC NO：61892
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B1。
[0008]本专利技术中的噬菌体PNJ1902属于长尾科噬菌体(Siphoviridae)。有一个长的、不可收缩的尾鞘，外壳属于规则多面体。头部径长(L)＝60nm，头部横向直径(W)＝55nm，L/W＝1.09，带尾鞘，尾长＝196nm，宽度＝11nm。
[0009]本专利技术中的噬菌体PSD2001属于肌尾科噬菌体(Cercoviridae)。PSD2001具有多面体对称的头部和可伸缩的尾部。头部径长(L)＝118nm，头部宽度(W)＝79nm，L/W＝1.49。收缩尾巴(尾长＝116nm,尾宽＝19nm)。
[0010]本专利技术中的噬菌体PSD2002属于肌尾科噬菌体(Cercoviridae)。PSD2002具有多面体对称的头部和可伸缩的尾部。头部径长(L)＝121nm，头部宽度(W)＝83nm，L/W＝1.46。收缩尾巴(尾长＝121nm,尾宽＝20nm)。
[0011]本专利技术所述的噬菌体制剂中的三种噬菌体对大肠杆菌ATCC:43895均有较强的裂解性。将三种噬菌体混合后，发现噬菌体之间存在协同作用，较之于单个噬菌体具有更高效的抑制作用。
[0012]本专利技术的另一目的是提供了所述噬菌体制剂在制备大肠杆菌抑制剂中的应用。
[0013]本专利技术的另一目的是提供了所述噬菌体制剂在制备大肠杆菌生物被膜清除剂中的应用。
[0014]本专利技术的另一目的是提供了所述噬菌体制剂在制备治疗大肠杆菌造成的疾病的药物中的应用。
[0015]本专利技术所述的大肠杆菌为大肠杆菌ATCC:43895。
[0016]本专利技术另一个目的是提供三种裂解性大肠杆菌噬菌体，分别为噬菌体PNJ1902、噬菌体PSD2001和噬菌体PSD2002；其中，噬菌体PNJ1902的保藏编号为GDMCC NO：61890
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B1，噬菌体PSD2001的保藏编号为GDMCC NO：61891
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B1，噬菌体PSD2002的保藏编号为GDMCC NO：61892
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B1。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0018](1)在本专利技术中，由噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002组成的噬菌体鸡尾酒在LB培养基中对浮游态大肠杆菌ATCC:43895的抑制作用具有协同作用。
[0019](2)在本专利技术中，由噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002组成的噬菌体鸡尾酒在LB培养基中对浮游态大肠杆菌ATCC:43895具有长时间显著抑菌效果。
[0020](3)在本专利技术中，由噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002组成的噬菌体鸡尾酒可以有效清除大肠杆菌ATCC:43895不同年龄的生物被膜。
[0021](4)由噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002组成的噬菌体鸡尾酒可以用于小鼠肠道感染大肠杆菌ATCC:43895的8h后的疾病治疗。
[0022](5)由噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002组成的噬菌体鸡尾酒对感染大肠杆菌ATCC:43895的小鼠具有较高的保护率，且与抗生素治疗相比，该噬菌体鸡尾酒能更快的促进小鼠增重，更快的促进炎性因子恢复到正常水平。
附图说明
[0023]图1是噬菌体PNJ1902、PS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种裂解性大肠杆菌噬菌体制剂，其特征在于，所述制剂包括噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002；其中，噬菌体PNJ1902的保藏编号为GDMCC NO：61890
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B1，噬菌体PSD2001的保藏编号为GDMCC NO：61891
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B1，噬菌体PSD2002的保藏编号为GDMCC NO：61892
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B1。2.根据权利要求1所述的裂解性大肠杆菌噬菌体制剂，其特征在于，所述的噬菌体制剂中噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002的效价比例为(1～3)：(1～3)：(1～3)。3.根据权利要求2所述的裂解性大肠杆菌噬菌体制剂，其特征在于，所述的噬菌体制剂中噬菌体PNJ1902、PSD2001和PSD2002的效价比例为1：1：1。4.权利要求1～3任一项所述的裂解性大肠杆菌噬菌体制剂在制备大肠杆菌抑制剂中的应用；优选的，所述大肠杆菌为大肠杆菌ATCC:43895。5.权利要求1～3任一项所述的裂解性大肠杆菌噬菌体制剂在在制备大肠杆菌生物被膜清除剂中的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤芳，戴建君，王瑜欣，薛峰，李一昊，曾颃，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：