一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法

【技术实现步骤摘要】
一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法
。

技术介绍

[0002]流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，是人类面临的主要公共健康问题之一
。
接种疫苗是预防和控制流感流行最经济
、
最有效的手段
。
自
1940
年代问世以来，季节性流感疫苗限制了大流行性传播，挽救了无数生命
。
目前已批准的流感疫苗主要有灭活苗
(
全病毒灭活疫苗
、
流感病毒裂解疫苗以及亚单位疫苗
)、
减毒活疫苗和重组疫苗
。
其中四价流感裂解疫苗对人群具有泛的保护作用和较低的副作用，在批准疫苗里占主流地位
。
[0003]稳定性是评价药品有效性和安全性的重要指标之一，生物制品其活性成分蛋白质或多肽的分子构型和生物活性的保持都依赖于所处的微环境，随着药品监督管理部门对药品的质量标准的要求不断提升，特别是各行业企业在产品的纯度和杂质控制方面体现出日渐趋高的态势，产品纯化程度越高，最终产品成分单一，有效成分的稳定性越发降低，免疫效果越差
。
在不断趋高的标准下，生产企业面临的技术压力和成本压力也在在逐步增大，生产能力难以获得突破
。
生产能力不足是限制疫苗供应的一个重要因素，另一个重要因素是疫苗的运输，冷链运输在发展中国家并不完善，提高流感疫苗的
(
热
)
稳定性和保质期是解决这个问题的重要途径
。
[0004]现有传统流感病毒裂解疫苗制备工艺，主要流程为对纯化后病毒进行裂解后采用纯化步骤将裂解剂去除后低温灭活，如
CN102614508A
公开了一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法，包括以下步骤：
1)
生产用鸡胚：毒种传代和制备用鸡胚应来源于
SPF
鸡群；疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群，并选用9～
11
日龄无畸形
、
血管清晰
、
活动的鸡胚；
2)
病毒接种和培育：用
PBS
稀释工作种子批毒种
(H1N1
型
、H3N2
型
、B
型
)
，接种鸡胚尿囊腔，接种后进行病毒培养；
3)
病毒收获：筛选活鸡胚，进行冷胚，收获尿囊液于容器内；
4)
浓缩及纯化：将
H1N 1、H 3N 2、B
型流感病毒尿囊液，进行连续流离心，离心得到的上清液用截留分子量
300kD
的超滤膜包进行超滤浓缩，超滤浓缩后样品使用蔗糖密度梯度离心进行纯化，纯化后样品用截留分子量
300kD
的超滤膜包进行超滤除糖；
5)
病毒裂解：收集纯化的病毒液，加入
Triton X
‑
100
裂解，得到
H1N 1、H 3N 2、B
型流感病毒裂解液；
6)
裂解后纯化：流感病毒裂解液再经
Sepherose 4FF
层析纯化，去除裂解剂，通过
280nm
紫外监测，收集有病毒峰的病毒液为二次纯化液；
7)
病毒灭活：流感病毒二次纯化液经甲醛2～
8℃
灭活，得到
H1N 1、H 3N 2、B
型病毒灭活液，灭活后的病毒液以截留分子量
50kD
的超滤膜包进行超滤透析；
8)
除菌过滤：除菌过滤得到单价原液
。
所使用裂解主要包括使用有机溶剂或去污剂
/
表面活性剂处理，以去除表面糖蛋白，裂解剂对蛋白具有裂解的效果，被普遍认为是疫苗的一种杂质成分，各厂家采取各种纯化步骤组合的形式，力求将其去除，因此疫苗原液和成品中裂解剂的含量被控制在很低的水平
。
[0005]综上所述，传统的流感病毒裂解工艺存在如下问题：病毒裂解后采用纯化步骤将裂解剂去除后2～
8℃
灭活，灭活时间较长，灭活过程中血凝素含量有下降趋势，最终原液和
成品中裂解剂含量低，产品有效成分下降快，稳定性差，必须低温保存或冷链运输，所需能耗较大，压缩生产能力
。
因此，开发新型的流感病毒裂解疫苗制备方法，以实现高效制备具有高稳定性的流感病毒裂解疫苗，对于流感疫苗领域具有重要意义
。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种流感病毒裂解疫苗及其制备方法，以期高效制备流感病毒裂解疫苗，提高疫苗稳定性，延长有效期，降低能耗，提高产能
。
[0007]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种流感病毒裂解疫苗的制备方法，所述制备方法包括：
[0009]将流感病毒与裂解组合物混合，进行裂解处理，将裂解处理后的流感病毒与灭活剂混合，进行灭活处理，对灭活处理后的流感病毒进行纯化，控制原液和成品中的裂解剂浓度分别为
500
～
1500
μ
g/mL
和
200
～
300
μ
g/mL
，得到所述流感病毒裂解疫苗，所述裂解组合物含有裂解剂和无水乙醇，所述裂解处理后不进行去除裂解剂处理
。
[0010]本专利技术中，重新设计流感病毒裂解疫苗的制备工艺，在裂解剂中添加无水乙醇，无水乙醇可协同裂解剂对病毒进行裂解，缩短裂解时间，提高生产效率，裂解后，不进行裂解剂的去除，直接灭活，一定浓度裂解剂的残留可以保护抗原，提高血凝素稳定性，同时裂解后的流感病毒暴露出活性区域，加入灭活剂后可快速进行灭活，减少灭活剂的用量，缩短灭活时间，提高生产效率
。
[0011]本专利技术中，同时控制最终疫苗原液的裂解剂含量在
500
～
1500
μ
g/mL(
例如可以是
550
μ
g/mL、600
μ
g/mL、700
μ
g/mL、800
μ
g/mL、1000
μ
g/mL、1200
μ
g/mL、1300
μ
g/mL、1450
μ
g/mL、1480
μ
g/mL
或
1490
μ
g/mL)
，成品的裂解剂含量控制在
200
～
300
μ
g/mL(
例如可以是
220
μ
g/mL、250
μ
g/mL、260
μ
g/mL、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将流感病毒与裂解组合物混合，进行裂解处理，将裂解处理后的流感病毒与灭活剂混合，进行灭活处理，对灭活处理后的流感病毒进行纯化，控制原液和成品中的裂解剂浓度分别为
500
～
1500
μ
g/mL
和
200
～
300
μ
g/mL
，得到所述流感病毒裂解疫苗；所述裂解组合物含有裂解剂和无水乙醇；所述裂解处理后不进行去除裂解剂处理
。2.
根据权利要求1所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述裂解剂包括
TritonX
‑
100、TritonN
‑
101、
去氧胆酸钠
、
吐温
、
十六烷基三甲基溴化铵
、
聚乙二醇辛基苯基醚或乙醚中任意一种或至少两种的组合；优选地，所述吐温包括吐温
‑
20、
吐温
40、
吐温
60、
吐温
80、
吐温
81
或吐温
85
中任意一种或至少两种的组合；优选地，所述裂解组合物中裂解剂和无水乙醇的体积比为
1:(0.5
～
1)。3.
根据权利要求1或2所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述裂解处理的温度为
20
～
28℃
，时间为1～
2h。4.
根据权利要求1‑3任一项所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述灭活剂包括甲醛
、
β
‑
丙内酯
、
戊二醛
、
烷化剂或双氧水中任意一种或至少两种的组合
。5.
根据权利要求1‑4任一项所述的流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，所述灭活处理的温度为
20
～
28℃
，时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗丹，蒋正东，贾维，胡文超，刘鹏，刘春游，朱志强，
申请(专利权)人：深圳康泰生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：