一种含有制造技术

本发明专利技术公开的是一种含有

【技术实现步骤摘要】
一种含有ctxB分子佐剂的H9亚型禽流感病毒亚单位疫苗


[0001]本专利技术涉及一种
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗，更具体一点说，涉及一种含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗，属于基因工程与生物制药领域
。

技术介绍

[0002]禽流感病毒
(AIV)
属正黏病毒科
、
流感病毒属
、A
型流感病毒，属于单股负链节段
RNA
病毒
。H9N2
亚型属于低致病性禽流感病毒，可以引起家禽的呼吸道症状
、
产蛋率
、
受精率下降等，并引起继发感染，在整个亚洲引起大规模感染，给家禽养殖业带来巨大损失
。
[0003]商用灭活疫苗在很大程度上减轻了疫情带来的影响，但是存在过度依赖鸡胚
、
无法区分免疫动物与感染动物等问题，不断出现的突变毒株也为疫苗的免疫效果带来了挑战
。
因此，多种概念的候选疫苗正在受到关注，其中亚单位疫苗作为研究热点，展现出较高的安全性，不过由于免疫组分单一，亚单位疫苗往往需要添加佐剂增强免疫效果
。
[0004]细菌类毒素是一种常见且高效的疫苗佐剂，主要由一个
A
亚基与五个
B
亚基组成的
AB5
结构蛋白，其中，
B
亚基可与细胞膜受体结合，介导
A
亚基进入细胞，能有效刺激免疫系统
。
已有相关研究证明，细菌毒素类佐剂经黏膜或胃肠外递送后，可增强黏膜免疫应答
。
[0005]目前，由于单组分的亚单位疫苗免疫原性较差，多组分的亚单位疫苗成本较高等问题，亚单位疫苗的研发进入瓶颈
。
由此，为了提升亚单位疫苗的免疫原性，同时降低添加佐剂带来的带来的成本，开发一种携带分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗具有重要意义
。

技术实现思路

[0006]为了解决上述现有技术问题，本专利技术提供具有能有效提升
IgA
与
IgG
水平，既具有效果佳也具有成本低等技术特点的一种含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗
。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0008]一种含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗，抗原蛋白为携带分子佐剂
ctxB
的
H9
亚型禽流感病毒同义
HA
三聚体蛋白；抗原蛋白包括三聚体结构和单体结构
。
[0009]优选的，所述三聚体结构大小约为
300kDa
，单体结构大小约为
85kDa。
[0010]优选的，抗原蛋白包括
SEQ ID NO:1
氨基酸，其序列：
[0011]METTSLITILLVVTVSNANGTPQNITDLCAEYHNTQIHTLNDKIFSYTESLAGKREMAIITFKNGATFQVEVPGSQHIDSQKKAIERMKDTLRIAYLTEAKVEKLCVWNNKTPHAIAAISMANGGGGSGGGGSGGGGSDKICIGYQSTNSTETVDTLTENNVPVTHAKELLLTEHNGMLCATSLGQPLILDTCTIEGLIYGNPSCDLLLEGREWSYIVERPSAVNGLCYPGNVENLEELRSLFSSARSYQRIQIFPDTIWNVSYDGTSTACSGSFYRSMRWLTRKNGNYPIQDAQYTNNQGKNILFMWGINHPPTDTTQTNLYTRTDTTTSVATEEINRIFKPLIGPRPLVNGLMGRINYYWSVLKPGQTLRIKSDGNLIAPWYGHILSGESHGRILKTDLKRGSCTVQCQTEKGGLNTTLPFQNVSKYAFGNCSKYIGIKSLKLAVGLRNVPSRSSRGLFGAIAGFIEGGWSGLVAGWYGFQHSNDQGVGMAADRDSTQKAIDKITSKVNNIVDKMNKQYEII
DHE FSEVETRLNMINNKIDDQIQDIWAYNAELLVLLENQKTLDEHDANVNNLYNKVKRALGSNAVEDGKGCFELYHKCDDQCMETIRNGTYNRRKYQEESKLERQKIEGVSGRLVPRGSPGYIPEAPRDGQAYVRKDGEWVLLSTFLGSAHHHHHH。
[0012]优选的，利用载体质粒与感受态细胞构建重组杆状病毒表达质粒，利用重组杆状病毒
rBV
‑
ctxB
‑
HA
在
Sf9
细胞中表达重组蛋白
ctxB
‑
HA
后进行纯化，获得含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗
。
[0013]优选的，利用重组杆状病毒
rBV
‑
ctxB
‑
HA
在昆虫细胞
Sf9
中表达抗原蛋白
ctxB
‑
HA。
[0014]优选的，收集扩增后的重组杆状病毒，然后以2％的比例接种细胞密度为2×
106cells/mL
的
Sf9
细胞，收集上清液作为蛋白样，参照
Ni
‑
NTA
琼脂糖凝胶
6FF
的操作方法纯化携带
His
标签的
ctxB
‑
HA
蛋白，获得含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗
。
[0015]优选的，所述载体质粒为
pFastBac1
，所述感受态细胞为
DH10Bac。
[0016]有益效果：本专利技术既具有亚单位疫苗免疫原性佳，也具有成本较低技术特点；能有效提升
IgA
与
IgG
水平，应用情景广阔
。
附图说明
[0017]图1是本专利技术重组杆状病毒感染
Sf9
细胞图
。
[0018]图2是本专利技术重组杆状病毒感染
Sf9
细胞的对照图
。
[0019]图3是本专利技术蛋白
SDS
‑
PAGE
鉴定结果图
。
[0020]图4是本专利技术蛋白
WB
鉴定鉴定结果
。
[0021]图5是本专利技术中抗体水平检测图之一
。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗，其特征在于：抗原蛋白为携带分子佐剂
ctxB
的
H9
亚型禽流感病毒同义
HA
三聚体蛋白；抗原蛋白包括三聚体结构和单体结构
。2.
根据权利要求1所述的一种含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗，其特征在于：所述三聚体结构大小为
300kDa
，单体结构大小为
85kDa。3.
根据权利要求1或2所述的一种含有
ctxB
分子佐剂的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗，其特征在于：抗原蛋白包括
SEQ ID NO:1
氨基酸，其序列：
METTSLITILLVVTVSNANGTPQNITDLCAEYHNTQIHTLNDKIFSYTESLAGKREMAIITFKNGATFQVEVPGSQHIDSQKKAIERMKDTLRIAYLTEAKVEKLCVWNNKTPHAIAAISMANGGGGSGGGGSGGGGSDKICIGYQSTNSTETVDTLTENNVPVTHAKELLLTEHNGMLCATSLGQPLILDTCTIEGLIYGNPSCDLLLEGREWSYIVERPSAVNGLCYPGNVENLEELRSLFSSARSYQRIQIFPDTIWNVSYDGTSTACSGSFYRSMRWLTRKNGNYPIQDAQYTNNQGKNILFMWGINHPPTDTTQTNLYTRTDTTTSVATEEINRIFKPLIGPRPLVNGLMGRINYYWSVLKPGQTLRIKSDGNLIAPWYGHILSGESHGRILKTDLKRGSCTVQCQTEKGGLNTTLPFQNVSKYAFGNCSKYIGIKSLKLAVGLRNVPSRSSRGLFGAIAGFIEGGWSGLVAGWYGFQHSNDQGVGMAADRDSTQKAIDKITSKVNNIVDKMNKQYEIIDHEFSEVETRLNMINNKIDDQIQDIWAYNAELLVLLENQKTLDEHDANVNNLYNKVKRALGSNAVEDGKGCFELYHKCDDQCMETIRNGTYNRRK...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯华朋，朱顺帆，舒建洪，何玉龙，邬丽，
申请(专利权)人：浙江理工大学浙江洪晟生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：