一种基于分子佐剂的广谱型制造技术

本发明专利技术公开的是一种基于分子佐剂的广谱型

【技术实现步骤摘要】
一种基于分子佐剂的广谱型H9亚型禽流感HA亚单位黏膜疫苗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种疫苗，更具体一点说，涉及一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗及其制备方法和应用，属于基因工程与生物制药领域
。

技术介绍

[0002]H9N2
禽流感病毒作为主要的禽流感病毒亚型，自
1994
年首次在大陆被分离，在我国已有近
30
年的流行历史
。H9N2
病毒的感染会诱发高传染性疾病，引起家禽的呼吸道症状与产蛋率
、
受精率下降等，并引起继发感染，造成巨大的经济损失，此外
H9N2
禽流感病毒能为其他亚型流感病毒提供了广泛的基因库，这为流感病毒的大规模传播带来潜在风险，严重影响人类生生活，同时
H9N2
亚型病毒感染人的事件时有发生，给公共卫生带来巨大挑战
。
[0003]疫苗接种是禽流感防控的最有效手段，当前商用灭活疫苗虽然能为免疫动物提供一定保护，但是灭活疫苗无法诱导细胞免疫，不能完全阻断病毒的传播，且无法区分免疫动物和野毒感染动物
。
因此开发免疫效果好的
H9
亚型禽流感病毒亚单位疫苗对
H9N2
亚型禽流感的防控具有重要意义
。

技术实现思路

[0004]为了解决上述现有技术问题，本专利技术提供具有能有效诱导机体产生较高的
IgA/>和
IgG
抗体水平等技术特点的一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗及其制备方法和应用
。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗，所述亚单位疫苗中抗原为
H9
亚型禽流感病毒同义
HA
蛋白，且携带分子佐剂
fliC
或
GM
‑
CSF
和
T4 Foldon
三聚体序列
。
[0007]优选的，亚单位疫苗为融合蛋白，其具有如下氨基酸序列：
[0008]由
SEQ ID NO.1
所示氨基酸序列组成的蛋白质；
[0009]由
SEQ ID NO.1
所示氨基酸序列增加
、
缺失一个或多个氨基酸组成的蛋白质
。
[0010]优选的，融合蛋白包括三种抗原蛋白，其分别为
HA、fliC
‑
HA
和
GM
‑
CSF
‑
HA
蛋白
。
[0011]优选的，利用
pFastBac1
质粒与
DH10Bac
感受态细胞构建重组杆状病毒表达三聚化的广谱型
HA、fliC
‑
HA
和
GM
‑
CSF
‑
HA
蛋白
。
[0012]优选的，利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞
Sf9
中表达三聚化的广谱型
HA、fliC
‑
HA
和
GM
‑
CSF
‑
HA
蛋白
。
[0013]一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗制备方法，由同义
HA
基因或其与不同分子佐剂融合形成基因重组；
[0014]基因重组进入穿梭质粒后，转染昆虫细胞，获得了重组杆状病毒，借助
Sf9
细胞表达了三种抗原蛋白；
[0015]经镍离子亲和层析纯化后进行定量，以稀释的蛋白样品作为亚单位黏膜疫苗
。
[0016]一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗的应用
。
[0017]有益效果：本专利技术制备的亚单位疫苗能有效诱导机体产生较高的
IgA
和
IgG
抗体水平，滴鼻免疫后能为
H9N2
禽流感病毒的攻击提供部分保护；对
H9N2
亚型禽流感的防控具有重要意义
。
附图说明
[0018]图1是本专利技术
HA
序列比对结果图
。
[0019]图2是本专利技术重组杆状病毒感染
Sf9
细胞图之一
。
[0020]图3是本专利技术重组杆状病毒感染
Sf9
细胞图之二
。
[0021]图4是本专利技术重组杆状病毒感染
Sf9
细胞图之三
。
[0022]图5是本专利技术感染
Sf9
细胞的对照图
。
[0023]图6是本专利技术
HA
间接免疫荧光鉴定结果图
。
[0024]图7是本专利技术
fliC
‑
HA
间接免疫荧光鉴定结果图
。
[0025]图8是本专利技术
GM
‑
CSF
‑
HA
间接免疫荧光鉴定结果图
。
[0026]图9是本专利技术间接免疫荧光鉴定对照图
。
[0027]图
10
是本专利技术中
HA SDS
‑
PAGE
鉴定结果图
。
[0028]图
11
是本专利技术中
fliC
‑
HA SDS
‑
PAGE
鉴定结果图
。
[0029]图
12
是本专利技术中
GM
‑
CSF
‑
HA SDS
‑
PAGE
鉴定结果图
。
[0030]图
13
是本专利技术中
HA Western blotting
鉴定结果图
。
[0031]图
14
是本专利技术中
fliC
‑
HA Western blotting
鉴定结果图
。
[0032]图
15
是本专利技术中
GM
‑
CSF
‑
HA Western blotting
鉴定结果图
。
[0033]图
16
是本专利技术间接
ELISA
鉴定抗体表达水图之一
。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗，其特征在于：所述亚单位黏膜疫苗中抗原为
H9
亚型禽流感病毒同义
HA
蛋白，且携带分子佐剂
fliC
或
GM
‑
CSF
和
T4 Foldon
三聚体序列
。2.
根据权利要求1所述的一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗，其特征在于：亚单位黏膜疫苗为融合蛋白，其具有如下氨基酸序列：由
SEQ ID NO.1
所示氨基酸序列组成的蛋白质；由
SEQ ID NO.1
所示氨基酸序列增加
、
缺失一个或多个氨基酸组成的蛋白质
。3.
根据权利1或2所述的一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗，其特征在于：融合蛋白包括三种抗原蛋白，其分别为
HA、fliC
‑
HA
和
GM
‑
CSF
‑
HA
蛋白
。4.
根据权利3所述的一种基于分子佐剂的广谱型
H9
亚型禽流感
HA
亚单位黏膜疫苗，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯华朋，朱顺帆，邬丽，舒建洪，何玉龙，
申请(专利权)人：浙江洪晟生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：