【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽用生物制品领域，涉及兽用疫苗，尤其涉及一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗制备方法及其应用。
技术介绍
1、猪腹泻是一种常见的影响猪生长最明显的多因素疾病，其发病率和死亡率高而造成巨大经济损失。引起仔猪腹泻的重要病毒包括猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒等。
2、猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritisvirus，tgev)引起猪的一种高度接触性消化道传染病。以引起2周龄以下仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为主要特征。其他年龄的猪也易感，但5周龄以上的猪很少死亡。多发生于寒冷季节，以每年12月至次年4月为发病高峰，3～4天内即暴发流行，迅速传播。
3、猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，pedv)(感染引起的各个日龄猪的一种急性肠道传染病。在我国多发生在每年12月份至次年1～2月，夏季也有发病的报道。各种年龄的猪都能感染发病。哺乳猪、肥育猪的发病率很高，尤以哺乳仔猪受害最为严重，母猪发病率变动很大，约为15～90％。主要的临床症状为粪便稀薄、水样腹泻，偶见呕吐。症状的轻重随年龄的大小而有差异，年龄越小，症状越重。一周龄内新生仔猪发生腹泻后3～4天，呈现严重脱水而死亡，死亡率可达50％以上。病猪体温正常或稍高，精神沉郁，食欲减退或废绝。断奶猪、母猪常呈精神萎顿、厌食和持续性腹泻大约一周，并逐渐恢复正常。
4、猪δ冠状病毒(p
5、针对猪病毒性腹泻的防控主要是商品化的疫苗，目前国内外有多款针对猪病毒性腹泻的疫苗。疫苗主要分为灭活疫苗和活疫苗，且多以猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎二联疫苗为主，也有猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒三联活疫苗和猪流行性腹泻灭活疫苗。但目前市场上尚未有猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗或活疫苗。因此，需要研发一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联疫苗。
技术实现思路
1、本申请要解决的技术问题是：如何有效的预防猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒所引起的猪腹泻。
2、为解决该技术问题，本申请提供了一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗及其制备方法。
3、一方面，本专利技术提供了一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，所述猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗的活性成分为灭活的猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株。
4、优选地，本专利技术所述猪传染性胃肠炎病毒shxb株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪传染性胃肠炎病毒，其保藏编号为cctcc no:v202370；所述猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪流行性腹泻病毒，其保藏编号为cctcc no：v201624；所述猪δ冠状病毒lyg/14株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪δ冠状病毒，其保藏编号为cctcc no:v202369。
5、优选地，本专利技术所述猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株均由st全悬浮细胞生产；灭活前猪传染性胃肠炎病毒shxb株的病毒含量≥108.5tcid50/ml，灭活前猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株的病毒含量≥107.5tcid50/ml，灭活前猪δ冠状病毒lyg/14株的病毒含量≥107.5tcid50/ml。
6、优选地，本专利技术所述的st全悬浮细胞是在中国典型培养物保藏中心保藏的st全悬浮细胞，其保藏编号为：cctcc no:c2023179。
7、优选地，本专利技术所述猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株的配比为1:5:3。
8、优选地，本专利技术所述猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗由所述活性成分和佐剂组成。
9、优选地，本专利技术所述佐剂为水性佐剂，所述水性佐剂为gel 01佐剂。
10、再一方面，本专利技术还提供了一种制备所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗的方法，所述方法包括以下步骤：
11、s1)使用st全悬浮细胞分别培养猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株，获得三种病毒的培养液；
12、s2)将s1)制备的三种病毒的培养液分别灭活，获得灭活的三种病毒的培养液；使用除菌pbs溶液将灭活好的猪传染性胃肠炎病毒液、猪流行性腹泻病毒液和猪δ冠状病毒液分别稀释至108.0tcid50/ml、107.0tcid50/ml、107.0tcid50/ml；
13、s3)将s2)稀释好的灭活的猪传染性胃肠炎病毒shxb株培养液、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株培养液和猪δ冠状病毒lyg/14株培养液按质量比为1:5:3的比例混合，获得抗原混合液；
14、s4)将s3)制备的抗原混合液与佐剂按质量比为9:1的比例混合，获得猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗。
15、优选地，本专利技术所述的步骤s1)中使用st全悬浮细胞培养猪传染性胃肠炎病毒shxb株包括以下步骤：
16、1)st全悬浮细胞在无血清培养基中的逐级放大培养；
17、2)将放大培养的st全悬浮细胞转入生物反应器中在无血清培养基中进行发酵培养，当细胞密度达4～6×106个/ml时，使用含终浓度为20～30μg/ml胰酶的无血清培养基稀释至3.0×106个/ml，按照moi为0.1～0.2接入种毒，设置培养参数：ph值为7.2、do值为40～50％、温度为37℃、转速为80～100r/min，每日观察记录细胞密度，培养24～36小时进行收毒；
18、3)将收获的细胞培养物在无菌条件下去除细胞碎片，即为病毒的培养液，取样进行病毒含量和无菌检验，将病毒液置于-15℃以下保存待用。
19、再一方面，本专利技术还提供了一种所述的猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株在制备猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联疫苗中的应用。
20、本申请开发的疫苗具有以下特点：pedv、pdcov、tgev均为中国主要流行本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗的活性成分为灭活的猪传染性胃肠炎病毒SHXB株、猪流行性腹泻病毒ZJ15XS0101株和猪δ冠状病毒LYG/14株。
2.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎病毒SHXB株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪传染性胃肠炎病毒，其保藏编号为CCTCC NO:V202370；所述猪流行性腹泻病毒ZJ15XS0101株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪流行性腹泻病毒，其保藏编号为CCTCC NO：
3.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎病毒SHXB株、猪流行性腹泻病毒ZJ15XS0101株和猪δ冠状病毒LYG/14株均由ST全悬浮细胞生产；灭活前猪传染性胃肠炎病毒SHXB株的病毒含量≥108.5TCID50/ml，灭活前猪流行性腹泻病毒ZJ15XS0101株的病毒含量≥107.5TCID50/
4.根据权利要求3所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述的ST全悬浮细胞是在中国典型培养物保藏中心保藏的ST全悬浮细胞，其保藏编号为：CCTCC NO:C2023179。
5.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎病毒SHXB株、猪流行性腹泻病毒ZJ15XS0101株和猪δ冠状病毒LYG/14株的配比为1:5:3。
6.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗由所述活性成分和佐剂组成。
7.根据权利要求6所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述佐剂为水性佐剂，所述水性佐剂为GEL 01佐剂。
8.一种制备如权利要求1～7任一权利要求所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的步骤S1)中使用ST全悬浮细胞培养猪传染性胃肠炎病毒SHXB株包括以下步骤：
10.一种如权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒SHXB株、猪流行性腹泻病毒ZJ15XS0101株和猪δ冠状病毒LYG/14株在制备猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联疫苗中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗的活性成分为灭活的猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株。
2.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎病毒shxb株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪传染性胃肠炎病毒，其保藏编号为cctcc no:v202370；所述猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株是在中国典型培养物保藏中心保藏的猪流行性腹泻病毒，其保藏编号为cctcc no：
3.根据权利要求1所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述猪传染性胃肠炎病毒shxb株、猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株和猪δ冠状病毒lyg/14株均由st全悬浮细胞生产；灭活前猪传染性胃肠炎病毒shxb株的病毒含量≥108.5tcid50/ml，灭活前猪流行性腹泻病毒zj15xs0101株的病毒含量≥107.5tcid50/ml，灭活前猪δ冠状病毒lyg/14株的病毒含量≥107.5tcid50/ml。
4.根据权利要求3所述的猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪δ冠状病毒三联灭活疫苗，其特征在于，所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：李彬，舒建洪，李肖梁，
申请(专利权)人：浙江洪晟生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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