一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法技术

本发明专利技术公开了一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法，具体针对入肺经中药蜜炙机理研究的关键问题，提供了一种以君、臣、佐、使关系清楚的入肺经中药血清色谱图为参照，比较入肺经中药、炼蜜及入肺经中药+炼蜜与入肺经中药蜜炙品血清色谱图各特征指纹峰的变化，进而从配伍和炮制的双重角度阐明入肺经中药蜜炙机理。本发明专利技术从新的视角提出了传统入肺经中药蜜炙机理，为入肺经中药蜜炙品质量的稳定和可控提供科学依据。

A method of study on the mechanism of honey roasting of traditional Chinese Medicine

【技术实现步骤摘要】
一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法
本专利技术涉及一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法,具体属于中药
技术背景蜜炙是一种以蜂蜜为辅料的特殊中药炮制技术，在炮制学中具有重要的地位。常用入肺经中药如紫菀、款冬、甘草、麻黄等常以蜜炙品入药。现代药理试验证实：入肺经中药蜜炙后可以增强其祛痰、止咳的药理作用，并认为蜜炙是借蜂蜜甘润益元，而增强药物的润肺止咳、补益脾胃等功能，但更深层次的机理一直不明，从而导致其质控无法进行，临床疗效无法保障。目前，入肺经中药蜜炙机理的研究还多以主成分分析的方法进行，但入肺经中药的蜜炙是一种特殊的炮制方法，其辅料蜂蜜也是一味常用中药，蜂蜜入脾、肺、大肠经，具有补中益气、润肺止咳的作用，现代药理学研究表明蜂蜜具有抗炎、抗氧化、止咳、促进吸收等药理作用。因此，近、现代学者认为入肺经中药蜜炙不仅仅是一种简单的炮制，更是蜂蜜与中药配伍组方应用的过程，即药物与蜂蜜相须配伍，协同增强其润肺止咳的作用。所以入肺经中药蜜炙增效机理应从“配伍炮制”的特殊性出发，从其“炮制”和“配伍”的双重视角进行深入研究。近年来，在学者不断的努力下，中药炮制和方剂配伍机理研究都取得了一定的进展。中药炮制机理的研究已经从单一的主成分分析发展为基于色谱技术的多成分的对比分析，这在一定程度上注意了中药炮制机理研究的整体性；方剂配伍机理的研究更进一步将色谱图与药效学相结合，即通过谱效关系分析进行研究，使得从量-效关系的层面对配伍机理的阐明成为可能。以上研究成果为中药炮制和方剂配伍机理的研究做出了贡献，也为进一步从配伍和炮制视角研究入肺经中药蜜炙这一特殊炮制机理提供了方法学借鉴。
技术实现思路
为解决现有入肺经中药蜜炙机理研究的不足，本专利技术提供一种有效的研究方法。本专利技术一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法具体包括以下研究步骤：步骤1：最佳给药剂量和最佳采血时间的确定入肺经中药蜜炙品灌服大鼠，其给药剂量为人体常规给药剂量折合后计量的5、10、20、30倍给药，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药剂量；在给药后60、90、120、180分钟采血，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药时间；步骤2：入肺经中药蜜炙品入血成分谱的获取具体将入肺经中药蜜炙品含药血清样品进入液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析，以出峰间隔为考察指标；通过检测色谱峰的质谱图，从总体上分析血浆中的化学成分的离子信息，通过保留时间比对及离子碎片质荷比解析，获取入肺经中药蜜炙品血清的色谱图；步骤3：入肺经中药蜜炙品入血成分的谱效关系研究入肺经中药蜜炙品粉碎后，采用质量浓度为50%、75%、90%的乙醇依次回流提取，减压回流后加水混悬，分别以水饱和石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚层、氯仿层、醋酸乙酯层、正丁醇层和水层5个部位；将5个分离部位看成一个复方，每个分离部位相当单味药，采用撤药拆方的方法研究各分离部位与血清色谱图特征峰的对应关系；即每次撤去一个分离部位，剩余4个分离部位作为一个拆方组，各拆方组以最佳给药剂量的折合剂量给药，在最佳时间点采血，经液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析获取各拆方组的血清色谱图；对各拆方组血清色谱图与全方色谱图的对比关联分析，建立血清色谱图特征指纹峰与部位的对应关系，获得的体外对应部位即为“有效部位”；对上述的有效部位进行分离得到组分，按照“有效部位”的撤药拆方方法研究血清色谱图特征指纹峰与组分的对应关系，由此获得的体外对应组分即为“有效组分”；以入肺经中药蜜炙品最佳给药的折合剂量，按照与血清色谱图特征成分的对应关系，进行有效组分的药效学实验；对药效学数据进行模糊数学模型分析，确定血清色谱图特征指纹峰的“君、臣、佐、使”地位，获取入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的谱效关系；步骤4：入肺经中药蜜炙机理阐明入肺经中药、炼蜜及入肺经中药+炼蜜按照入肺经中药蜜炙品的折合剂量给药，在最佳时间采血，获取入肺经中药、炼蜜及入肺经中药+炼蜜的血清色谱图；入肺经中药、炼蜜的血清色谱图与入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的特征指纹峰进行对比，根据“君、臣、佐、使”特征指纹峰的变化，从配伍的视角阐明入肺经中药蜜炙机理；入肺经中药+炼蜜的血清色谱图与入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的特征指纹峰进行对比，根据“君、臣、佐、使”特征指纹峰的变化，从炮制的视角阐明入肺经中药蜜炙机理。所述的血清色谱图由高效液相色谱(HPLC)以及液质联用技术获得。本专利技术的有益效果：提供了一种以君、臣、佐、使关系清楚的入肺经中药血清色谱图为参照，从配伍炮制的视角进行入肺经中药蜜炙机理研究的方法。此方法能从更深层次阐明入肺经中药的蜜炙机理，为进一步完善入肺经中药蜜炙的质量控制提供更确实的质控标准，切实提高入肺经中药蜜炙品的临床疗效。具体实施方式以下对本专利技术作进一步说明。实施例11、最佳给药剂量和最佳采血时间的确定：入肺经中药蜜炙品灌服大鼠，其给药剂量采用人体常规给药剂量折合后计量的5、10、20、30倍给药，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药剂量为人体折合剂量的30倍给药；在给药后60、90、120、180分钟采血，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药时间为120分钟。2、入肺经中药蜜炙品入血成分谱的获取：将入肺经中药蜜炙品含药血清样品进入液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析，以出峰间隔为考察指标，合理选择色谱柱、检测器、色谱流动相及流速；质谱的氮气流量、CDL温度、检测器电压、内标的选择等条件。通过检测色谱峰的质谱图,从总体上分析血浆中的化学成分的离子信息。通过保留时间(tR)比对及离子碎片质荷比(m/z)解析,获取入肺经中药蜜炙品血清的色谱图。3、入肺经中药蜜炙品粉碎，采用50%、75%、90%乙醇依次回流提取，减压回流后加水混悬，分别以水饱和石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚层、氯仿层、醋酸乙酯层、正丁醇层和水层5个部位。将5个分离部位看成一个复方，每个分离部位相当单味药，采用撤药拆方的方法研究各分离部位与血清色谱图特征峰的对应关系。即每次撤去一个分离部位，剩余4个分离部位作为一个拆方组，各拆方组以最佳给药剂量的折合剂量给药，在最佳时间点采血，经液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析获取各拆方组的血清色谱图。对各拆方组血清色谱图与全方血清色谱图的对比关联分析，建立血清色谱图特征指纹峰与部位的对应关系，获得的体外对应部位即为“有效部位”。对上述的有效部位进行分离得到组分，按照“有效部位”的撤药拆方方法研究血清色谱图特征指纹峰与组分的对应关系，由此获得的体外对应组分即为“有效组分”。以入肺经中药蜜炙品最佳给药的折合剂量，按照与血清特征成分的对应关系，进行有效组分的药效学实验。对上述实验获得的药效学数据进行模糊数学分析，选择合适的权重和君、臣、佐、使阈值，确定有效组分的君、臣、佐、使关系，间接获得入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的谱效关系。4、入肺经中药、炼蜜及入肺经中药+炼蜜按照入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法，其特征在于：所述的方法具体包括以下研究步骤：/n步骤1：最佳给药剂量和最佳采血时间的确定/n入肺经中药蜜炙品灌服大鼠，其给药剂量为人体常规给药剂量折合后计量的5、10、20、30倍给药，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药剂量；在给药后60、90、120、180分钟采血，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药时间；/n步骤2：入肺经中药蜜炙品入血成分谱的获取/n具体将入肺经中药蜜炙品含药血清样品进入液相色谱串联质谱分析，以出峰间隔为考察指标；通过检测色谱峰的质谱图，从总体上分析血浆中的化学成分的离子信息，通过保留时间比对及离子碎片质荷比解析，获取入肺经中药蜜炙品血清的色谱图；/n步骤3：入肺经中药蜜炙品入血成分的谱效关系研究/n入肺经中药蜜炙品粉碎后，采用质量浓度为50%、75%、90%的乙醇依次回流提取，减压回流后加水混悬，分别以水饱和石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚层、氯仿层、醋酸乙酯层、正丁醇层和水层5个部位；将5个分离部位看成一个复方，每个分离部位相当单味药，采用撤药拆方的方法研究各分离部位与血清色谱图特征峰的对应关系；即每次撤去一个分离部位，剩余4个分离部位作为一个拆方组，各拆方组以最佳给药剂量的折合剂量给药，在最佳时间点采血，经液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析获取各拆方组的血清色谱图；对各拆方组血清色谱图与全方色谱图的对比关联分析，建立血清色谱图特征指纹峰与部位的对应关系，获得的体外对应部位即为“有效部位”；对上述的有效部位进行分离得到组分，按照“有效部位”的撤药拆方方法研究血清色谱图特征指纹峰与组分的对应关系，由此获得的体外对应组分即为“有效组分”；/n以入肺经中药蜜炙品最佳给药的折合剂量，按照与血清色谱图特征成分的对应关系，进行有效组分的药效学实验；对药效学数据进行模糊数学模型分析，确定血清色谱图特征指纹峰的“君、臣、佐、使”地位，获取入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的谱效关系；/n步骤4：入肺经中药蜜炙机理阐明/n入肺经中药、炼蜜及入肺经中药+炼蜜按照入肺经中药蜜炙品的折合剂量给药，在最佳时间采血，获取入肺经中药、炼蜜及入肺经中药+炼蜜的血清色谱图；入肺经中药、炼蜜的血清色谱图与入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的特征指纹峰进行对比，根据“君、臣、佐、使”特征指纹峰的变化，从配伍的视角阐明入肺经中药蜜炙机理；入肺经中药+炼蜜的血清色谱图与入肺经中药蜜炙品的血清色谱图的特征指纹峰进行对比，根据“君、臣、佐、使”特征指纹峰的变化，从炮制的视角阐明入肺经中药蜜炙机理。/n...

【技术特征摘要】
1.一种入肺经中药蜜炙机理研究的方法，其特征在于：所述的方法具体包括以下研究步骤：
步骤1：最佳给药剂量和最佳采血时间的确定
入肺经中药蜜炙品灌服大鼠，其给药剂量为人体常规给药剂量折合后计量的5、10、20、30倍给药，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药剂量；在给药后60、90、120、180分钟采血，根据含药血清色谱图的出峰数量确定最佳给药时间；
步骤2：入肺经中药蜜炙品入血成分谱的获取
具体将入肺经中药蜜炙品含药血清样品进入液相色谱串联质谱分析，以出峰间隔为考察指标；通过检测色谱峰的质谱图，从总体上分析血浆中的化学成分的离子信息，通过保留时间比对及离子碎片质荷比解析，获取入肺经中药蜜炙品血清的色谱图；
步骤3：入肺经中药蜜炙品入血成分的谱效关系研究
入肺经中药蜜炙品粉碎后，采用质量浓度为50%、75%、90%的乙醇依次回流提取，减压回流后加水混悬，分别以水饱和石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚层、氯仿层、醋酸乙酯层、正丁醇层和水层5个部位；将5个分离部位看成一个复方，每个分离部位相当单味药，采用撤药拆方的方法研究各分离部位与血清色谱图特征峰的对应关系；即每次撤去一个分离部位，剩余4个分离部位作为一个拆方组，各拆方组以最佳给药剂量的折合剂量给药，在最佳时间点采血，经液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘可越，刘海军，
申请(专利权)人：九江学院，
类型：发明
国别省市：江西;36