一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法技术

本发明专利技术涉及一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法，采用如下色谱条件：色谱柱：以嵌入极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相：有机相‑水相；流速0.5‑1.5ml/min，检测波长190‑210nm；柱温：10‑40℃；进样量：5‑20µL；检测器采用紫外检测器或二极管阵列检测器。现有方法均采用生测法进行定量，柱前衍生的方法作为定性方法，本发明专利技术通过所述色谱柱和所述流动相的配合使用，取得了很好的分离度，准确度，通过本检测方法使中生菌素F与结构相似的同系物达到很好的分离，提高了中生菌素F检测的准确度；该检测方法中生菌素F出峰时间约8.8min。

A high performance liquid chromatography method for the determination of mesogenin f

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法
本专利技术属于农药检测分析
，具体涉及一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法。
技术介绍
中生菌素，化学名称为链丝菌素（streptothricins），是最早发现的抗生素之一，其中链丝菌素F早在1942年即由Waksman的研究小组所发现，但其化学结构一直到1982年才通过人工全合成而最终确定，其中F组分的结构式如下：中生菌素的化学结构由链里定内酰胺、古洛糖胺和赖氨酸侧链三部分组成，具有杀菌活性的主要成分有7个，根据赖氨酸的数量从1-7分别命名为链丝菌素F、E、D、C、B、A和X，其活性高低与赖氨酸的数量呈整相关，即赖氨酸数量越多，活性越强。中生菌素抗菌谱广，能抗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、分枝杆菌、酵母菌及丝状真菌，对人畜中等毒性。我国目前有效登记的中生菌素原药及制剂共有41个品种，其中12%中生菌素原药登记产品1个，其余40个为可湿性粉剂、颗粒剂及水剂等，且混配制剂占有很大比例，主要用于防治苹果轮纹病、黄瓜细菌性角斑病、番茄青枯病等病害。农药产品质量标准是产品生产、检验和评定质量的技术依据，科学有效的产品质量标准是保证农药实现稳定防治效果的技术保障。农用抗生素与化学合成农药相比具有原药含量低、组分复杂等特点，在检测方法的开发上具有较大的难度。从当前公开资料来看，现行有效的中生菌素产品共有6个产品质量标准，均为企业标准，分别为福建凯立生物制品有限公司的Q/KLSW013-2018《12%中生菌素母药》，Q/KLSW033-2018《3%中生菌素可溶液剂》，Q/KLSW030-2018《0.5%中生菌素颗粒剂》，福建新农大正生物工程有限公司Q/XNDZ124-2016《3%中生菌素可湿性粉剂》，海利尔药业集团股份有限公司Q/370202HYJ373-2018《2.0%四霉素中生菌素水剂》，四川金珠生态农业科技有限公司Q/73023813-3.7-2017《3%中生菌素水剂》，以上6个企业标准中中生菌素的控制指标均为生物效价。生物效价作为控制指标在早期的农用和医用抗生素质量标准中非常普遍,但生物效价法具有很大的局限性，如分析时间长、实验室间重现性差、人为干扰因素多等。更为致命的是当前中生菌素的混配制剂很多，两种杀菌活性化合物混合在一起，尤其是与具有抗细菌活性的杀菌剂混配，从理论上来说用生物效价法测定中生菌素含量存在很大的问题，是不准确更是没有可行性的。色谱法具有分析时间短、结果重现性好、可实现特定化合物的准确定量等优点，近年用色谱法代替生物效价法已成为抗生素质量标准的趋势。以上企业标准中均将液相色谱柱前衍生作为中生菌素的鉴别方法，但从方法的技术细节上看存在明显的缺陷。福建凯立生物制品有限公司的Q/KLSW013-2018《12%中生菌素母药》中存在两个明显缺陷:一是OPA柱前衍生产物不专一，标准中选择第一个峰进行定量，这具有很大的随意性，因为这个产物的比例不是固定的，同一样品反应结果也会存在很大的差异，柱前衍生的要求必须是反应定量进行，产物专一；二是采用荧光检测，但方法中只是给出检测波长为360nm，而荧光检测必须有激发波长和检测波长两个关键参数。因为农药产品质量标准中要求必须列出鉴别方法，所以该方法的列入可能主要是满足企业产品质量标准的形式需求，并不具有实际的可行性。中生菌素F与中生菌素同系物结构相似，在HPLC检测中，容易受到某些同系物的干扰。因此本领域迫切需要一种分离度良好，运行时间短的检测中生菌素F的方法。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法，该方法能够实现中生菌素F与其他同系物的分离，从而达到产品质量的控制。本专利技术采用如下技术方案，一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法，采用如下色谱条件；色谱柱：以嵌入式极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相；流动相：有机相-水相；流速：0.5-1.5mL/min，优选1.0mL/min；检测波长：190-210nm，优选200nm；柱温：10-40℃，优选30℃；进样量：5-20µL，优选10µL；检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。本专利技术的优选的实施方案中，所述以嵌入式极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，优选以嵌入式极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱。本专利技术的优选的实施方案中，所述流动相中的有机相选自甲醇、乙腈中的一种或几种。本专利技术的优选的实施方案中，所述流动相的水相还含有庚烷磺酸钠，庚烷磺酸钠的质量浓度范围为0.05%-0.15%，优选0.1%。本专利技术的优选的实施方案中，所述流动相的水相还含有磷酸，磷酸的质量浓度范围为0.1%-0.3%，优选0.1%。本专利技术的优选的实施方案中，所述流动相的有机相-水相的体积比为0:100-30:70，优选20:80。本专利技术的优选的实施方案中，所述的色谱柱和流动相配合使用。本专利技术所述的高效液相色谱法检测中生菌素F的方法，通过以下步骤实现：（1）称取含适量中生菌素F的标品，于50mL容量瓶中，用纯水溶解、定容、摇匀，过滤0.45µm滤膜，备供试标品溶液用；（2）称取含适量中生菌素F的样品，于50mL容量瓶中，用纯水溶解、定容、摇匀，过滤0.45µm滤膜，备供试待测样品用；（3）取供试标品和待测样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照所述的色谱条件进行高效液相色谱分析。本专利技术的优选的实施方案中，所述的标品的纯度高于99.9%。现有方法均采用生测法进行定量，柱前衍生的方法作为定性方法，与现有技术相比，本专利技术通过所述的色谱柱和所述的流动相的配合使用，取得了很好的分离度，准确度，通过本检测方法使中生菌素F与结构相似的同系物达到很好的分离，极大的提高了中生菌素F检测的准确度和检测效率；该检测方法中生菌素F出峰时间约8.8min。附图说明下面结合附图对本专利技术进一步说明：图1为按照实施例1条件分离的中生菌素F样品高效液相色谱图；图2为按照实施例2条件分离的中生菌素F样品高效液相色谱图；图3为按照实施例3条件分离的中生菌素F样品高效液相色谱图；图4为本专利技术的分析方法的线性关系图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步详细说明，但本专利技术并不仅仅局限于下述实施例。实施例1实验仪器和条件：Waters1525高效液相色谱仪，waters2489紫外检测器；色谱柱：嵌入式极性基团的C18（150×4.6mm，5µm）；流动相：（0.1%庚烷磺酸钠+0.1%磷酸）水溶液：乙腈=80:20；流速：1.0mL/min；检测波长：200nm；柱温：30℃；进样量：10µL。试验步骤：称取含0.02g中生菌素F的标品，于50mL容量瓶中，用纯水溶解、定容、摇匀，过滤0.4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法，其特征在于，采用如下色谱条件：/n色谱柱：以嵌入式极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相；/n流动相：有机相-水相；/n流速：0.5-1.5ml/min；/n检测波长：190-210nm；/n柱温：10-40℃；/n进样量：5-20µL；/n检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱法检测中生菌素F的方法，其特征在于，采用如下色谱条件：
色谱柱：以嵌入式极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相；
流动相：有机相-水相；
流速：0.5-1.5ml/min；
检测波长：190-210nm；
柱温：10-40℃；
进样量：5-20µL；
检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用如下色谱条件：流速：1.0ml/min；检测波长：200nm；柱温：30℃；进样量：10µL。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述以嵌入式极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，以嵌入式极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱。


4.根据权利要求3中任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相中的有机相选自甲醇、乙腈中的一种或几种。


5.根据权利要求3中任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相的水相还含有庚烷磺酸钠，庚烷磺酸钠的质量浓度范围为0.05%-0.15%...

【专利技术属性】
技术研发人员：张楠，潘忠成，杨宏勃，高波，陈豪，李蒲民，
申请(专利权)人：陕西麦可罗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西;61