一种抗生物素抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗生物素抗体，并提供了编码所述抗体CDR的氨基酸序列。研究表明该抗体只与生物素标记物或衍生物反应，不与游离的生物素反应。本发明专利技术还提供了所述抗体的应用，包括但不限于：ELISA检测、细胞捕获、分选和富集、免疫印迹检测、流式检测、免疫细胞荧光染色、免疫组织化学检测。本发明专利技术所述抗生物素抗体结合磁珠获得的免疫磁珠微球可特异性地直接识别生物素标记物，且不与游离生物素结合，而游离生物素常存在于临床样本和培养基中；此外为抗生物素抗体偶联的磁珠微球或抗生物素抗体‑荧光素为特异性细胞的分离提供了一种理想的解决方案，甚至可以从富含碎屑的样品或其他低频生物原料中富集和分离目的细胞。

An anti biotin antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗生物素抗体及其应用
本专利技术属于生物科技领域；更具体地本专利技术涉及了一种抗生物素抗体及其应用。
技术介绍
生物素(Biotin)是水溶性维生素B群成员之一，又称维生素H、D-生物素、维生素B7、辅酶R(CoenzymeR)等，分子量为244.31。生物素为无色长针状结晶，具有尿素与噻吩相结合的骈环，并带有戊酸侧链；极微溶于水(22mg/100ml水，25℃)和乙醇(80mg/100ml，25℃)，较易溶于热水和稀碱液，不溶于其它常见的有机溶剂。遇强碱或氧化剂则分解。在生物科学等科研领域，生物素常被用来作为标记物提供反应位点，用于固化或显色等用途。为了便于标记通常会用化学方法制成衍生物，如生物素-羟基琥珀亚胺酯(biotin-hydroxysuccinimide，BNHS)等，可方便地与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物，并可与亲和素结合而被检测。生物素－亲和素系统(Biotin-Avidin—System，BAS)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。近年大量研究证实，生物素—亲和素系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，可极大地提高检测、分析的灵敏度，使BAS很快被广泛应用于生物、诊断、医学等领域。虽然生物素-亲和素检测体系有上述优势，但是生物素和亲和素的结合是非特异地，亲和素可识别所有来源和形态的生物素，包括生物素衍生物及游离的生物素小分子。因此在实际应用中需要将衍生物、标记物进行纯化，否则会产生严重的非特异性信号，从而影响检测的灵敏度和准确性。抗体是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。抗体的可变区基因分别由4个相对恒定的框架区(FR)和3个高度可变的抗原互补决定簇(CDR)构成，其中CDR区是抗体的特异性结合位点。不同抗体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。可变区位于"Y"的两臂末端。在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈，这些氨基酸的残基组成和排列顺序更易发生变异区域称可变区。可变区位于分子表面，最多由17个氨基酸残基构成，少则只有2-3个。可变区氨基酸序列决定了该抗体结合抗原抗原的特异性。一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的，位于两臂末端称抗原结合片段(antigen-bindingfragment,Fab)。"Y"的柄部称结晶片段(crystallinefragment,Fc)，糖结合在Fc上。抗体片段是抗体经蛋白酶水解所形成的片段。如木瓜蛋白酶水解IgG形成2个相同的Fab段和1个Fc段；胃蛋白酶水解IgG形成1个F(ab′)2段和若干多肽碎片(pFc′)。若F(ab′)2重链间二硫键断裂，可形成2个Fab片段，后者可进一步被酶解成Fv片段。其中抗原结合片段有全长的抗体(如IgG)、Fab、F(ab′)2、scFv等形式。Kohen,F.等报道了抗生物素抗体的制备和特性(MethodsEnzymol.279(1997)451-463)。Bagci,H.等(FEBSLett.322(1993)47-50)报道了单克隆抗生物素抗体在识别生物素中的模拟亲和力。Cao,Y.等报道了发展双特异性单克隆抗体作为用于检测生物素化大分子的通用免疫探针(J.Immunol.Meth.220(1998)85-91)。Dakshinamurti等报道了抗生物素的单克隆抗体的产生和表征(Biochem.J.237(1986)477-482)。Vincent,P.等(J.Immunol.Meth.165(1993)177-182)报道了生物素和生物素化大分子配体与抗生物素单克隆抗体和链霉抗生物素蛋白的结合的比较。Berger,M.等(Biochem.14(1975)2338-2342)报道了结合生物素并抑制含有生物素的酶的抗体的产生。目前市面上抗生物素抗体基本上为可竞争结合游离生物素小分子抗体，与生物素-亲和素系统相近。而不可竞争游离生物素小分子的抗生物素抗体则较少，竞争结合游离生物素的抗体可检测样本中的游离生物素，本专利技术的目的在于获得一种不与游离生物素反应、特异性识别标记物生物素的抗体，从而实现其在相关免疫学检测应用中不受游离生物素的干扰。
技术实现思路
本专利技术提供了一种抗生物素抗体或其抗体片段，并提供了编码所述抗体CDR区的氨基酸序列，该抗体只与生物素标记物或衍生物反应，不与游离的生物素反应。本专利技术还提供了所述抗体的应用，包括但不限于：ELISA检测、磁珠法B细胞克隆、免疫印迹检测、流式检测、免疫细胞荧光染色、免疫组织化学检测。本专利技术提供如下技术方案：一种抗生物素抗体，所述抗体运用Kabat方法分析包含以下多肽序列的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3：(1)含有SEQIDNO1：至少6个氨基酸序列的CDR-H1；序列为SSYWIC；(2)含有SEQIDNO2：至少18个氨基酸序列的CDR-H2；序列为CIDAGSSGSTYYARWVNG；(3)含有SEQIDNO3：至少14个氨基酸序列的CDR-H3；序列为EGDWGAPIYYGVDL；(4)含有SEQIDNO4：至少13个氨基酸序列的CDR-L1；序列为QSSQSVYNNNQLS；(5)含有SEQIDNO5：至少7个氨基酸序列的CDR-L2；序列为YASTLAS；(6)含有SEQIDNO6：至少12个氨基酸序列的CDR-L3；序列为LGGYYDYADTSA；其中，所述的抗生物素抗体特异性结合非游离的生物素。作为优选，所述抗体为兔源单克隆抗体。本专利技术还提供了另一种技术方案：一种抗生物素抗体的应用，包括但不限于：ELISA检测、细胞捕获、分选和富集、免疫印迹检测、流式检测、免疫细胞荧光染色以及免疫组织化学检测。本专利技术的优点和效果：1、本专利技术所述抗生物素抗体结合磁珠获得的免疫磁珠微球可特异性地直接识别生物素标记物，且不与游离生物素结合，而游离生物素常存在于临床样本和培养基中。本实验所述抗生物素抗体偶联的磁珠微球具有不与游离生物素结合的优点，根据这一特征可提供最敏感的标记和细胞分离。抗生物素抗体偶联的磁珠微球或抗生物素抗体-荧光素为特异性细胞的分离提供了一种理想的解决方案，甚至可以从富含碎屑的样品或其他低频生物原料中富集和分离目的细胞。2、本专利技术提供的抗生物素单克隆抗体的质量具有很强的可控性和可重复性。并通过对所得抗体特性的初步分析及鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗生物素抗体，其特征在于，所述抗体运用Kabat方法分析包含以下多肽序列的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3：/n(1)含有SEQ ID NO1：至少6个氨基酸序列的CDR-H1；序列为SSYWIC；/n(2)含有SEQ ID NO2：至少18个氨基酸序列的CDR-H2；序列为CIDAGSSGSTYYARWVNG；/n(3)含有SEQ ID NO3：至少14个氨基酸序列的CDR-H3；序列为EGDWGAPIYYGVDL；/n(4)含有SEQ ID NO4：至少13个氨基酸序列的CDR-L1；序列为QSSQSVYNNNQLS；/n(5)含有SEQ ID NO5：至少7个氨基酸序列的CDR-L2；序列为YASTLAS；/n(6)含有SEQ ID NO6：至少12个氨基酸序列的CDR-L3；序列为LGGYYDYADTSA；/n其中，所述的抗生物素抗体特异性结合非游离的生物素。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗生物素抗体，其特征在于，所述抗体运用Kabat方法分析包含以下多肽序列的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3：
(1)含有SEQIDNO1：至少6个氨基酸序列的CDR-H1；序列为SSYWIC；
(2)含有SEQIDNO2：至少18个氨基酸序列的CDR-H2；序列为CIDAGSSGSTYYARWVNG；
(3)含有SEQIDNO3：至少14个氨基酸序列的CDR-H3；序列为EGDWGAPIYYGVDL；
(4)含有SEQIDNO4：至少13个氨基酸序列的CDR-L1；序列为QSSQS...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明振，潘丽，胡旻，刘浩，
申请(专利权)人：杭州百凌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33