藉由预靶向的双特异性聚乙二醇结合抗体将聚乙二醇化试剂条件性内吞用于诊断和治疗制造技术

一种单体双特异性聚乙二醇(PEG)衔接器，其包括一与双硫键稳定单链变异区片段(scFv)融合的抗聚乙二醇的Fab，其中所述双硫键稳定单链变异区片段能特异性结合一细胞表面抗原。所述聚乙二醇衔接器在缺少聚乙二醇下与细胞上的细胞表面抗原结合后依然呈单体在细胞表面上。本发明专利技术也提供一种治疗癌症的方法，其藉由施予一聚乙二醇衔接器后，再施予一聚乙二醇化抗癌剂。本发明专利技术也揭露一种含一聚乙二醇衔接器和一聚乙二醇化抗癌剂的套组。本发明专利技术进一步揭露用于细胞成像和诊断癌症的方法，其藉由施予一聚乙二醇衔接器后，再施予一聚乙二醇化造影剂。本发明专利技术提供另一种套组，其包括所述聚乙二醇衔接器和所述聚乙二醇化造影剂。

Conditional endocytosis of pegylated reagents for diagnosis and treatment by targeting bispecific PEGylated antibodies

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】藉由预靶向的双特异性聚乙二醇结合抗体将聚乙二醇化试剂条件性内吞用于诊断和治疗
技术介绍
三阴性乳腺癌(triple-negativebreastcancer，TNBC)占所有乳腺癌的11.2-16.3％。TNBC细胞不表达雌激素受体(estrogenreceptor)、黄体素受体(progesteronereceptor)和人类表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2)。TNBC通常具有侵袭性，故与预后不良有关。因为缺乏了明确的治疗标靶，能用的治疗选择有限。直到发现在50％的TNBC肿瘤中会过量表达表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)前，全身性化学治疗一直是TNBC的主要治疗选择。故EGFR靶向试剂，例如酪氨酸激酶(tyrosinekinase)抑制剂，正在开发来用于TNBC治疗。然而，EGFR靶向的酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)，在TNBC病患上则显示出最小的有效性。纳米药物(nanomedicines)，即纳米化的含药颗粒，对全身性化学治疗来说是具有吸引力的替代方案。纳米药物有利地改变化疗药物的药物动力学特征，减少脱靶毒性(off-targettoxicity)并改善治疗指数。纳米药物会被动地积聚在肿瘤中，这是因为在血管渗漏与淋巴引流受损相结合的肿瘤环境会强化渗透性和停留效应。肺部、乳房和卵巢的肿瘤都展现出高积聚的纳米颗粒。目前正在研究的纳米药物，如聚乙二醇(PEG)修饰(即聚乙二醇化)的微脂体阿霉素(liposomaldoxorubicin)是用于TNBC治疗。PEG藉由降低网状内皮系统(reticuloendothelialsystem)的辨识和清除来提高半衰期，即聚乙二醇化中的称为“隐形”的特色。纳米药物的有效性可以经由主动靶向的方式来改善，其藉由能与癌细胞上的胞吞受体(endocyticreceptor)结合的靶向配体(targetingligand)来功能化纳米载体表面。这种靶向促进受体介导的胞吞作用，会使细胞摄取纳米药物增加，同时也改善抗肿瘤活性。然而，这都必须克服许多技术障碍才能去生产出新的更有效的纳米载体。例如，靶向配体的附着可以损害聚乙二醇化纳米载体的隐形特色，并阻碍它们被摄入进肿瘤中。故需要开发出对抗癌细胞更有效，并同时具有更少的脱靶副作用的癌症治疗药剂。
技术实现思路
为了满足上述的需要，本专利技术提供一种单体双特异性聚乙二醇衔接器(monomericbispecificPEGengager)。它含有一与双硫键稳定单链变异区片段(scFv)融合的抗PEG的Fab，其中所述双硫键稳定scFv能特异性结合一细胞表面标靶。在缺少聚乙二醇下，所述聚乙二醇衔接器与一细胞上的细胞表面标靶结合后依然呈单体在所述细胞表面上。本专利技术也揭露一种治疗癌症的方法。所述治疗方法包括(i)鉴别出一罹患癌症的个体；(ii)施予所述个体一单体双特异性聚乙二醇衔接器，其能特异性结合聚乙二醇(PEG)和所述个体体内癌细胞上的标靶；以及(iii)接着施予所述个体一聚乙二醇化抗癌剂(PEGylatedanti-canceragent)。所述抗癌剂在与已和所述癌细胞结合的所述单体双特异性聚乙二醇衔接器结合后会被内吞进所述癌细胞中，进而杀死所述癌细胞。本专利技术进一步提供一种用于治疗表皮生长因子(epidermalgrowthfactor)表达(EGFR阳性)的癌症的套组，所述套组包含一单体双特异性聚乙二醇衔接器，其能特异性结合聚乙二醇(PEG)和一表皮生长因子受体；以及聚乙二醇化抗癌剂。在本专利技术范围内的另一种套组是用于诊断呈EGFR阳性癌症。所述套组包括一单体双特异性聚乙二醇衔接器，其能特异性结合聚乙二醇(PEG)和一表皮生长因子受体；以及一聚乙二醇化造影剂(PEGylatedimagingagent)。此外，本专利技术提供一种用于细胞成像的方法，其包括以下步骤：(i)将一细胞与一能和聚乙二醇及所述细胞上的一标靶特异性结合的单体双特异性聚乙二醇衔接器接触；(ii)接着使所述细胞与一聚乙二醇化造影剂接触；以及(iii)检测所述聚乙二醇化造影剂的存在。所述聚乙二醇化造影剂在与已和所述细胞结合的所述单体双特异性聚乙二醇衔接器结合后被内吞进所述细胞中。本专利技术也揭露一种诊断细胞介导病症(cell-mediateddisorder)的方法。所述方法的实现是藉由施予一个体一单体双特异性聚乙二醇衔接器，其能特异性结合聚乙二醇和介导病症的细胞上的一靶标，接着施予所述个体一聚乙二醇化诊断剂(PEGylateddiagnosticagent)，并检测所述聚乙二醇化诊断剂的位置。如果所述聚乙二醇化诊断剂在与已和所述细胞结合的单体双特异性聚乙二醇衔接器结合后位于所述细胞中的话，则所述个体被诊断为罹患所述细胞介导病症，例如癌症。以下的叙述和图式中阐述本专利技术的一个或多个实施例的细节。根据说明、图式和所附的申请专利范围，本专利技术的其它特征、目的和优点将变得显而易见。本文所引用的所有参考文献均透过引用方式将其整体内容并入本文中。如上所述，本专利技术揭露一单体双特异性聚乙二醇衔接器(PEG衔接器)，其包括一与双硫键稳定单链变异区片段(disulfidestabilizedscFv)融合的抗聚乙二醇(PEG)的Fab。所述抗PEG的Fab与PEG特异性结合。在一特定实施例中，所述Fab包括一含有SEQIDNO：3的序列的重链CDR1；一含有SEQIDNO：4的序列的重链CDR2；一含有SEQIDNO：5的序列的重链CDR3；一含有SEQIDNO：6的序列的轻链CDR1；一含有SEQIDNO：7的序列的轻链CDR2；以及一含有SEQIDNO：8的序列的轻链CDR3。上述双硫键稳定scFv特异性结合至一细胞表面抗原。所述细胞表面抗原表达在一目标细胞的表面上，例如癌细胞。所述细胞表面抗原可以是一蛋白质、一碳水化合物或一脂质。例如，所述细胞表面抗原可以是一生长因子受体(growthfactorreceptor)。所述生长因子受体可以是，但不限于表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR)、一类胰岛素生长因子受体(insulin-likegrowthfactorreceptor)、人类表皮生长因子受体2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2，HER2)、HER3、HER4和c-Met。在一特定实施例中，所述细胞表面蛋白是EGFR。所述细胞表面抗原的其他实施例包括CD19、CD20、CD5、CD21、CD25、CD37、CD30、CD33、CD45、CAMPATH-1、A33、G250、叶酸盐结合蛋白(folate-bindingprotein)、PSMA、GD2、GD3、GM2、LewisY、CA-125、CA19-9、IL2受体、黏蛋白(tenascin)、金属蛋白酶(metallo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单体双特异性聚乙二醇衔接器，其包含一与双硫键稳定单链变异区片段融合的抗聚乙二醇的Fab，其中所述双硫键稳定单链变异区片段能特异性结合一细胞表面标靶，其中在缺少聚乙二醇下，所述聚乙二醇衔接器在与一细胞上的细胞表面标靶结合后依然呈单体在所述细胞表面上。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170523 US 62/510,0461.一种单体双特异性聚乙二醇衔接器，其包含一与双硫键稳定单链变异区片段融合的抗聚乙二醇的Fab，其中所述双硫键稳定单链变异区片段能特异性结合一细胞表面标靶，其中在缺少聚乙二醇下，所述聚乙二醇衔接器在与一细胞上的细胞表面标靶结合后依然呈单体在所述细胞表面上。


2.如权利要求1中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述细胞表面标靶是一肿瘤抗原。


3.如权利要求2中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述肿瘤抗原是选自由表皮生长因子受体、一类胰岛素生长因子受体、人类表皮生长因子受体2、人类表皮生长因子受体3、人类表皮生长因子受体4和c-Met所组成的群组。


4.如权利要求3中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述肿瘤抗原为表皮生长因子受体。


5.如权利要求1中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述抗聚乙二醇的Fab包括一含有SEQIDNO：3的序列的重链CDR1；一含有SEQIDNO：4的序列的重链CDR2；一含有SEQIDNO：5的序列的重链CDR3；一含有SEQIDNO：6的序列的轻链CDR1；一含有SEQIDNO：7的序列的轻链CDR2；以及一含有SEQIDNO：8的序列的轻链CDR3。


6.如权利要求2中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述抗聚乙二醇的Fab包括一含有SEQIDNO：3的序列的重链CDR1；一含有SEQIDNO：4的序列的重链CDR2；一含有SEQIDNO：5的序列的重链CDR3；一含有SEQIDNO：6的序列的轻链CDR1；一含有SEQIDNO：7的序列的轻链CDR2；以及一含有SEQIDNO：8的序列的轻链CDR3。


7.如权利要求3中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述抗聚乙二醇的Fab包括一含有SEQIDNO：3的序列的重链CDR1；一含有SEQIDNO：4的序列的重链CDR2；一含有SEQIDNO：5的序列的重链CDR3；一含有SEQIDNO：6的序列的轻链CDR1；一含有SEQIDNO：7的序列的轻链CDR2；以及一含有SEQIDNO：8的序列的轻链CDR3。


8.如权利要求4中所述的聚乙二醇衔接器，其中所述抗聚乙二醇的Fab包括一含有SEQIDNO：3的序列的重链CDR1；一含有SEQIDNO：4的序列的重链CDR2；一含有SEQIDNO：5的序列的重链CDR3；一含有SEQIDNO：6的序列的轻链CDR1；一含有SEQIDNO：7的序列的轻链CDR2；以及一含有SEQIDNO：8的序列的轻链CDR3。


9.一种治疗癌症的方法，所述方法包含鉴别一罹患癌症的个体，施予所述个体一单体双特异性聚乙二醇衔接器，其能特异性结合聚乙二醇和所述个体体内癌细胞上的一第一标靶，接着再施予所述个体一聚乙二醇化抗癌剂，其中所述聚乙二醇化抗癌剂在与已和癌细胞结合的所述单体双特异性聚乙二醇衔接器结合后被内吞进所述癌细胞中，进而杀死所述癌细胞。


10.如权利要求9中所述的方法，其中所述第一标靶是表皮生长因子受体、一类胰岛素生长因子受体、人类表皮生长因子受体2、人类表皮生长因子受体3、人类表皮生长因子受体4或c-Met。


11.如权利要求10中所述的方法，其中所述第一标靶是表皮生长因子受体。


12.如权利要求9中所述的方法，其中所述聚乙二醇化抗癌剂是聚乙二...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗傅伦，郑添禄，苏昱诚，庄国祥，
申请(专利权)人：中央研究院，高雄医学大学，
类型：发明
国别省市：中国台湾;71