一种水胺硫磷单克隆抗体及其在胶体金检测试纸的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种水胺硫磷单克隆抗体,其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；以及一种水胺硫磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用，包括衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有水胺硫磷金标抗体，所述纤维素膜上设置有互相平行的隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线用水胺硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线用兔抗鼠IgG抗体印制；无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。

A kind of monoclonal antibody against thiamine and its application in colloidal gold test paper

【技术实现步骤摘要】
一种水胺硫磷单克隆抗体及其在胶体金检测试纸的应用
本专利技术涉及农药残留免疫分析
，具体涉及一种水胺硫磷单克隆抗体及其在胶体金检测试纸的应用。
技术介绍
水胺硫磷(Isocarbophos)是一种广谱的有机磷杀虫剂，用于防治贮藏谷物中的害虫和各种叶类作物上的害虫，也用来防治蚊成虫、蝇类、水生幼虫和卫生害虫。其作用机理是抑制乙酰胆碱酯酶的活性。乙酰胆碱是神经递质，过量的乙酰胆碱过度刺激乙酰胆碱受体，导致靶生物死亡。然而，一些不是预定目标的生物也遭到了毒害，包括人、鱼等其他生物。目前，对农药残留的检测方法主要是仪器分析方法和酶联免疫分析方法(ELISA)等。仪器分析方法包括高效液相色谱法(Highperformanceliquidchromatography，HPLC)、气相色谱法(Gaschromatography，GC)、薄层色谱法(Thinlayerchromatography，TLC)、液-质串联法(HPLC-MS)和气-质串联法(GC-MS)等，这些仪器分析方法虽然可以达到较高的检测灵敏度，但需要复杂昂贵的仪器设备及专业操作人员，加之样品前处理繁琐费时、检测费用高，难以满足快速、在线检测的需要。ELISA(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay)方法是常用的免疫检测方法，但是其操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观，不能在线进行检测等缺陷。因而ELISA方法的应用受到很大的限制。本专利技术的水胺硫磷胶体金试纸条，无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。
技术实现思路
本专利技术目的是：提供一种水胺硫磷单克隆抗体及其在胶体金检测试纸的应用。本专利技术的技术方案是：一种水胺硫磷单克隆抗体,其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。本专利技术还提供了一种水胺硫磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用，包括衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有水胺硫磷金标抗体，所述纤维素膜上设置有互相平行的隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线用水胺硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线用兔抗鼠IgG抗体印制。进一步的：水胺硫磷半抗原偶联的载体蛋白是利用活泼酯法将O-乙基-O-(1-苯基-1,2,4-三唑-3-基)-N-(丁酸基)硫代磷酸酯与牛血清白蛋白(BSA)偶联的产物。进一步的：所述水胺硫磷金标抗体为胶体金标记的水胺硫磷单克隆抗体。进一步的：所述衬板由不吸水的韧性材料制成，所述吸水垫为吸水滤纸垫或滤油纸垫，所述样品垫为玻璃纤维棉垫和/或尼龙膜垫和/或聚偏二氟乙烯膜垫和/或聚酯膜垫。与现有技术相比，本专利技术的优点是：1)特异性强，敏感性高。本胶体金试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，具有较强的特异性和较高的敏感性，检出最低限量可达到2ng/mL。2)简便、快速。在使用本胶体金试纸条时，无需任何其他辅助仪器，可现场操作，只要将检测样加入样品垫，在3至5分钟内即可判定检测结果。3)结果显示形象、直观、准确。胶体金试纸条的检测结果以纤维素膜上的显色情况来判断。如果样品中有待测物时，待测物和金标抗体结合形成抗原－金标抗体复合物，并且继续上移，遇隐形检测线T线不显色或者显色很弱即表示检测样品阳性或者弱阳性；如果样品中没有待测样品时，金标抗体继续上移，遇隐形检测线T线显示一条清晰红线即表示检测样品阴性。隐形对照线C线颜色的有或无表示此试纸条的有效或无效。结果判定形象、直观、准确、简单明了。4)节省费用，适用范围广，便于推广。使用胶体金试纸条进行检测，比使用仪器和ELISA试剂盒检测进行检测的费用大幅降低。再者，试纸条的使用范围广，可满足不同层次人员的需要，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济和社会效益。本专利技术的水胺硫磷胶体金试纸条，无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。附图说明下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述：图1为水胺硫磷胶体金检测试纸条俯瞰结构示意图；图2为水胺硫磷胶体金测试纸条剖面结构示意图；其中：1：衬板，2：样品垫，3：金标结合垫，4：纤维素膜，5：隐形检测线，6：隐形对照线，7：吸水垫，8-1：样品浸入端保护膜，8-2：手柄端保护膜，9：标识线；图3为水胺硫磷胶体金检测试纸条结果判定示意图；其中，A为阴性样品检测结果，B为弱阳性样品检测结果，C为强阳性样品检测结果，D和E为试纸条失效示意。具体实施方式实施例：1、水胺硫磷半抗原(O-甲基-O-(2-异丙氧基羰基苯基)-N-(3-羧基丙基)硫代磷酸胺)的合成：①O-甲基-O-(2-异丙氧基羰基苯基)硫代磷酸胺的合成。在反应瓶中加入2.47g(15mmol)O-甲基硫代磷酰二氯，4.27g(30mmol)研细的K2CO3和0.8ml乙腈，揽拌，冷却至10℃以下，滴加含1.8g(10mmol)水杨酸异丙酷的乙腈(0.4ml)溶液，室温下继续搅拌30分钟，减压蒸去溶剂，柱层析分离(silicagel,2：1hexanes-benzene)，得无色液体产物(a)2.85g(产率为92.5％)。②O-甲基-O-(2-异丙氧基羰基苯基)-N-(3-羧基丙基)硫代磷酸胺的合成。在反应瓶中加入0.65g(2.1mmol)O-甲基-O-(2-异丙氧基羰基苯基)硫代磷酰氯(a)和3ml甲醇，冰水浴冷却，滴加由0.32g(5.72mmol)KOH、0.268g(2.6mmol)4-氨基丁酸和1.7ml甲醇构成的混合溶液，室温下继续揽拌10分钟，反应混合物用INHC1-氯仿萃取，萃取液经无水硫酸钠干燥后，减压蒸去溶剂，柱层析分离(silicagel，chloroform/ethylacetate/aceticacid,65:35:1)，得无色液体产物0.6g(产率为76％)。2、水胺硫磷半抗原与载体蛋白偶联利用活泼酯法(ActiveEstermethod，简称AE法)将具有羧基末端(-COOH)的半抗原偶联到大分子的蛋白质上。分别称取0.1mmol半抗原与0.1mmolNHS，用600μlDMF溶解于反应装置中；称取0.1mmolDCC，用400μlDMF溶解；将DCC/DMF溶液缓慢滴加到上述反应装置中。在磁力搅拌下室温密封反应7小时。反应终液置4℃冰箱冷却2小时以上，经8000rpm离心5分钟，取上清活泼酯液十分缓慢的加入到5ml15mg/ml的BSA蛋白中，反应在磁力搅拌下室温搅拌4小时。待反应完成后，将反应液置于透析袋内，于0.02mol/LpH6.8的PB缓冲液中4℃搅拌透析，每四小时换一次透析液，共透析60小时。透析结束后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水胺硫磷单克隆抗体,其特征在于：其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种水胺硫磷单克隆抗体,其特征在于：其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。


2.一种水胺硫磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用，其特征在于：包括衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有水胺硫磷金标抗体，所述纤维素膜上设置有互相平行的隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线用水胺硫磷半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线用兔抗鼠IgG抗体印制。


3.根据权利要求2所述的一种水胺硫磷单克隆抗体在胶体金检测试纸的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛相国，
申请(专利权)人：苏州快捷康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32