一种拟除虫菊酯类农药单克隆抗体及其在胶体金快速检测试纸条的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种拟除虫菊酯类农药单克隆抗体其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；其应用胶体金快速检测试纸条包括有衬板和依次排列在衬板上的样品垫、金标结合物垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合物垫内吸附有胶体金标记的杂交瘤细胞株D3/A7分泌产生的拟除虫菊酯类农药单克隆抗体，所述纤维素膜上有隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线采用拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线采用兔抗鼠IgG抗体印制；无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。

A monoclonal antibody against pyrethroid pesticide and its application in colloidal gold rapid detection strip

【技术实现步骤摘要】
一种拟除虫菊酯类农药单克隆抗体及其在胶体金快速检测试纸条的应用
本专利技术涉及农药残留免疫分析
，具体涉及一种拟除虫菊酯类农药单克隆抗体及其在胶体金快速检测试纸条的应用。
技术介绍
拟除虫菊酯类农药是广谱性杀虫剂，具有速效、高效、低毒、低残留，对作物安全等特点，除对140多种害虫防治有特效外，有些拟除虫菊酯类农药还对地下害虫和螨类害虫有较好的防治效果。其作用机理是扰乱昆虫神经的正常生理，使之由兴奋、痉挛到麻痹而死亡。但是，拟除虫菊酯类农药对鱼类、蜜蜂和天敌等非靶标生物的毒性很高。目前，对拟除虫菊酯类农药残留的检测方法主要是仪器分析方法，包括气相色谱法(Gaschromatography，GC)、气相色谱串联质谱法(GC-MS)等。这些方法结果可靠，灵敏度高，已有相关的技术标准可供参考。但由于需要昂贵的仪器、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、有机溶剂使用量大等，因此该方法一方面不能实现现场的快速检测；另一方面也很难在我国基层单位广泛推广。与仪器分析方法相比，免疫检测方法因其简便、经济、快速等优点而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。ELISA(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay)方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观等缺陷。因而ELISA在拟除虫菊酯类农药的快速检测上的应用受到很大的限制。胶体金试纸条无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速，且结果直观准确、成本低。
技术实现思路
本专利技术目的是：提供一种拟除虫菊酯类农药单克隆抗体及其在胶体金快速检测试纸条的应用。本专利技术的技术方案是：一种拟除虫菊酯类农药金标抗体，该拟除虫菊酯类农药金标抗体为胶体金标记的拟除虫菊酯类农药单克隆抗体，其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。本专利技术还提供了一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条，包括有衬板(1)和依次排列在衬板(1)上的样品垫(2)、金标结合物垫(3)、纤维素膜(4)和吸水垫(7)，所述金标结合物垫(3)内吸附有胶体金标记的拟除虫菊酯类农药单克隆抗体，所述拟除虫菊酯类农药单克隆抗体为杂交瘤细胞株D3/A7分泌产生的单克隆抗体，所述纤维素膜(4)上有隐形检测线(5)和隐形对照线(6)，所述隐形检测线(5)采用拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线(6)采用兔抗鼠IgG抗体印制。进一步的：所述拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液中的载体蛋白是利用活泼酯法将4-(氰基(3-苯氧苯基)甲氧基)-4-氧丁酸与牛血清白蛋白偶联的产物。进一步的：所述吸水垫上设有手柄端保护膜，所述样品垫上设有样品浸入端保护膜，所述手柄端保护膜与样品浸入端保护膜均为不透明的胶膜。进一步的：所述金标结合物垫与所述样品垫之间设置有保护膜，且该保护膜上印制有待测样品标识线，该标识线偏向样品垫一侧约0.5厘米处。进一步的：所述样品垫采用玻璃纤维棉和/或尼龙膜和/或聚偏二氟乙烯膜和/或聚酯膜中的制成，所述纤维素膜采用硝酸纤维素膜和/或纯纤维素膜和/或羧化纤维素膜制成。上述一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条的制备方法包括以下步骤：1)拟除虫菊酯类农药半抗原的合成；2)拟除虫菊酯类农药半抗原与载体蛋白偶联得到拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液；3)拟除虫菊酯类农药金标抗体的制备；4)金标结合物垫的制备；5)拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗体包被纤维素膜；6)试纸条的组装。与现有技术相比，本专利技术的优点是：1)选择性款，敏感性高。本胶体金试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，具有较宽的选择性和较高的敏感性，能够特异性的检测氯氰菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯、苄氯菊酯、苯醚菊酯、氟氰戊菊酯、氰戊菊酯、高效氯氰菊酯、氟胺氰菊酯和氯氟氰菊酯等10种拟除虫菊酯类杀虫剂，检测限在50-200ng/mL之间。2)简便、快速。在使用本胶体金试纸条时，无需任何其他辅助仪器，可现场操作，只要将检测样加入样品垫，在3至5分钟内即可判定检测结果。3)结果显示形象、直观、准确。胶体金试纸条的检测结果以纤维素膜上的显色情况来判断。如果样品中有待测物时，待测物和金标抗体结合形成抗原－金标抗体复合物，并且继续上移，遇隐形检测线T线不显色或者显色很弱即表示检测样品阳性或者弱阳性；如果样品中没有待测样品时，金标抗体继续上移，遇隐形检测线T线显示一条清晰红线即表示检测样品阴性。隐形对照线C线颜色的有或无表示此试纸条的有效或无效。结果判定形象、直观、准确、简单明了。4)节省费用，适用范围广，便于推广。使用胶体金试纸条进行检测，比使用仪器和ELISA试剂盒检测进行检测的费用大幅降低。再者，试纸条的使用范围广，可满足不同层次人员的需要，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济和社会效益。本专利技术的拟除虫菊酯类农药胶体金试纸条，无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟内即可判定结果，不仅操作简便、快速、结果直观准确、成本低，并且可以在室外进行检测。附图说明下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述：图1为本专利技术中一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条的俯瞰结构示意图；图2为本专利技术中一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条的剖面结构示意图；其中：1、衬板；2、样品垫；3、金标结合物垫；4、纤维素膜；5、隐形检测线；6、隐形对照线；7、吸水垫；8-1、样品浸入端保护膜；8-2、手柄端保护膜；9、标识线；图3为本专利技术中一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条的结果判定示意图；其中：A为阴性样品检测结果，B为弱阳性样品检测结果，C为强阳性样品检测结果，D和E为试纸条失效。具体实施方式实施例：一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条的制备方法包括以下步骤：1)拟除虫菊酯类农药半抗原的合成；2)拟除虫菊酯类农药半抗原与载体蛋白偶联得到拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液；3)拟除虫菊酯类农药金标抗体的制备；4)金标结合物垫的制备；5)拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗体包被纤维素膜；6)试纸条的组装。首先：1、拟除虫菊酯类农药半抗原的合成1.1合成3-(3-苯氧基苯甲酰氨基)丙酸。将1.1g3-苯氧基苯甲算、0.6gNHS、1gDCC加入到3mL污水DMF中，室温搅拌反应3h。4℃静置1h后，上清滴入含有0.5g3-氨基丙酸的PBS溶液(12mL)。室温搅拌反应1h后在4℃反应过夜。去除有机溶剂，将沉淀溶解在乙酸乙酯中，使用冷水、1MNaOH和4MHCl洗涤，收集有机相。无水硫酸钠干燥后去除有机溶剂，获得白色固体。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种拟除虫菊酯类农药金标抗体，其特征在于：该拟除虫菊酯类农药金标抗体为胶体金标记的拟除虫菊酯类农药单克隆抗体，其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种拟除虫菊酯类农药金标抗体，其特征在于：该拟除虫菊酯类农药金标抗体为胶体金标记的拟除虫菊酯类农药单克隆抗体，其抗体重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，其轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。


2.一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条，其特征在于：包括有衬板(1)和依次排列在衬板(1)上的样品垫(2)、金标结合物垫(3)、纤维素膜(4)和吸水垫(7)，所述金标结合物垫(3)内吸附有胶体金标记的拟除虫菊酯类农药单克隆抗体，所述拟除虫菊酯类农药单克隆抗体为杂交瘤细胞株D3/A7分泌产生的单克隆抗体，所述纤维素膜(4)上有隐形检测线(5)和隐形对照线(6)，所述隐形检测线(5)采用拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液印制，所述隐形对照线(6)采用兔抗鼠IgG抗体印制。


3.根据权利要求2所述的一种拟除虫菊酯类农药胶体金快速检测试纸条，其特征在于：所述拟除虫菊酯类农药半抗原偶联的载体蛋白溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛相国，
申请(专利权)人：苏州快捷康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32