【技术实现步骤摘要】
一种功能增强型TIL细胞的培养方法
本专利技术属于生物医学领域，涉及细胞的培养方法，具体涉及一种功能增强型肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumorinfiltratinglymphocytes，TIL)细胞的培养方法。
技术介绍
肿瘤免疫治疗有望成为治愈肿瘤的一种新武器，尤其是抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体在临床肿瘤免疫治疗中的应用得到广泛的关注，它们显著延长了晚期恶性黑色素瘤、肺癌和结肠癌等患者的生存期，让许多难以治疗的癌症患者见到了曙光。免疫检查点阻断剂主要是通过阻断肿瘤组织内T细胞抑制性信号通路，从而使T细胞持续性活化，突破肿瘤微环境的免疫抑制，达到杀伤肿瘤细胞的目的。2018年也被称为是中国免疫治疗的元年，多个抗PD-1抗体已在国内上市。然而，随着免疫检查点抑制剂在肿瘤治疗中的临床应用，也暴露出非常突出的局限性，对于很多肿瘤患者的疗效有限，部分患者出现较强的副作用；另外，肿瘤患者一个疗程的用量按2-3mg/公斤，通常要用4-6个疗程，用量大，疗程数多，许多肿瘤患者难以承受高额的治疗费用(一支进口的100m...
【技术保护点】
1.一种功能增强型肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL细胞)的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：/nA.启动培养阶段：从肿瘤组织分离淋巴细胞，加入启动培养基，种于12孔培养板，4ml/孔，进行启动淋巴细胞培养，培养10天或14天获得启动TIL细胞，收获启动的TIL细胞冻存备用；所述启动培养基是在T细胞无血清培养基的基础上加入自体血清和IL-2；/nB.诱导培养阶段：用诱导培养基悬浮步骤A获得的淋巴细胞，置于37℃、5％CO
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种功能增强型肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL细胞)的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.启动培养阶段：从肿瘤组织分离淋巴细胞，加入启动培养基，种于12孔培养板，4ml/孔，进行启动淋巴细胞培养，培养10天或14天获得启动TIL细胞，收获启动的TIL细胞冻存备用；所述启动培养基是在T细胞无血清培养基的基础上加入自体血清和IL-2；
B.诱导培养阶段：用诱导培养基悬浮步骤A获得的淋巴细胞，置于37℃、5％CO2孵箱进行TIL细胞诱导培养1天；所述诱导培养基是在T细胞无血清培养基的基础上加入自体血清、CD3单抗和CD28单抗；
C.扩增培养阶段：用扩增培养基进行半量换液，对步骤B所获得的TIL细胞进行扩瓶培养和扩袋培养，共培养13天或14天；所述扩增培养基是在T细胞无血清培养基的基础上加入IL-2；
D.功能增强阶段：在培养第14天或第15天，收集TIL细胞，生理盐水洗涤，用功能增强培养基重悬TIL细胞后，孵育30分钟；所述功能增强培养基包括：生理盐水、人血清白蛋白、PD-1抗体；
E.细胞收获和鉴定：收集TIL细胞，进行功能检测，获得所述的功能增强型TIL细胞。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤A中，所述从肿瘤组织分离淋巴细胞包括：在培养皿中剪碎肿瘤组织，室温离心1800rpm×8分钟弃上清，加入10ml胶原酶IV液吹匀；置37℃水浴消化2小时；消化后收取上清，过100μm的筛子；生理盐水洗两次，室温离心1800rpm×8分钟，弃上清，取沉淀用X-VIVO悬浮，淋巴细胞分离液2:3进行Ficoll梯度离心，取中间层淋巴细胞，生理盐水洗两次，备用。
3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述步骤B中，所述TIL细胞诱导培养包括：取淋巴细胞5×106个与Feeder细胞(用′γ射线灭活的T细胞)1×108个混合，用所述诱导培养基悬浮细胞于25cm2培养瓶中，20ml/瓶，置于37℃、5％CO2孵箱培养。
技术研发人员：夏建川，潘求忠，何佳，宋梦佳，
申请(专利权)人：夏建川，
类型：发明
国别省市：广东;44
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