一种重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，该重组慢病毒是包装质粒、包膜质粒和转移质粒共转染293FT细胞或293T细胞后得到的包装体；其中，所述包装质粒为psPAX2m-pol质粒；所述转移质粒为pHAGE-CMV-Luc-IRES-ZsGreen质粒。该重组慢病毒安全高效毒副作用小成本低，将其应用于HIV表型耐药检测中，能为临床上合理有效地选用抗HIV药物提供重要参考依据。该转移质粒报告基因Luciferase与ZsGreen位于pHAGE-CMV-Luc-IRES-ZsGreen上，且由CMV启动子控制报告基因Luciferase与ZsGreen的表达，使得HIV-1抑制剂的抗病毒效果能够简易地通过在倒置荧光显微镜下观察到或通过测定荧光素酶活性而获得，将pol区导入后，多种细胞用具有此转移质粒的重组慢病毒均可进行耐药性检测，通用性强。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及及医学分子生物学领域，具体涉及了一种重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用。
技术介绍
过去的数十年中，多种HIV-1抑制药物已批准入市，用于HIV感染病人的治疗。基于HIV-1逆转录酶和(或)蛋白酶的两种或多种抑制剂联合应用的高效抗逆转录病毒疗法(HAART)，被公认为是治疗HIV感染病人最有效方法之一。它不仅能够提高HIV感染病人的生活质量也能降低HIV的感染风险。尽管HAART能够抑制病毒的复制和降低HIV感染的风险，但不能清除HIV-1感染者体内的病毒。因此，抗逆转录病毒疗法会因药物选择性压力下新现的耐药毒株而大打折扣。因此，很有必要监测耐药毒株并对临床精准抗病毒治疗提供指导。目前，对于HIV药物耐药性检测主要有基因型和表型耐药两种检测类型。基因型耐药检测是通过序列分析，能检出HIV-1靶基因中特定耐药相关的基因突变，因其操作简便，成本低廉，及在线的评估系统的应用，较表型耐药检测常用。但是，基因型检测不能用于解释不常见的突变或几种突变型的混合突变。表型耐药检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，该重组慢病毒是包装质粒、包膜质粒和转移质粒共转染293FT细胞或293T细胞后得到的包装体；其中，所述包装质粒为psPAX2m‑pol质粒；所述转移质粒为pHAGE‑CMV‑Luc‑IRES‑ZsGreen质粒。

【技术特征摘要】
1.一种重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，该重组慢病毒是包装质粒、包膜质粒
和转移质粒共转染293FT细胞或293T细胞后得到的包装体；其中，所述包装质粒为psPAX2m-
pol质粒；所述转移质粒为pHAGE-CMV-Luc-IRES-ZsGreen质粒。
2.根据权利要求1所述的重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，其特征在于，所述
转移质粒结构如图1所示。
3.根据权利要求1所述的重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，其特征在于，所述
转移质粒的构建方法，包括以下步骤：使用BamHI和KpnI双酶切pMD2.G质粒，回收酶切产
物，收取119bpCMV片段；将pHAGE-EF1α-IRES-ZsGreen质粒用BamHI和KpnI进行双酶切，
回收4736bppHAGE-IRES-ZsGreen片段；将回收的CMV片段和pHAGE-IRES-ZsGreen用T4DNA
连接酶进行连接，连接成功后，提取的质粒命名为pHAGE-CMV-IRES-ZsGreen质粒；使用NcoI
和XbaI双酶切PGL3-PromoterVector，回收1906bpLuciferase片段，pHAGE-CMV-IRES-
ZsGreen质粒用NcoI和XbaI双酶切，回收4855bp的片段，将该片段和Luciferase片段用T4
DNA连接酶进行连接；连接成功后，提取的质粒即为pHAGE-CMV-Luc-IRES-ZsGreen。
4.根据权利要求1所述的重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，其特征在于，所述
psPAX2m-pol质粒结构如图3所示。
5.根据权利要求1所述的重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，其特征在于，所述
psPAX2m-pol质粒序列如SEQIDNo.6所示。
6.根据权利要求1所述的重组慢病毒在HIV表型耐药检测中的应用，其特征在于，所述
psPAX2m-pol质粒的构建方法，包括以下步骤：
psPAX2载体重建：利用长引物法突变psPAX2载体的酶切位点AgeI，获得psPAX2-1载体；
利用定点突变试剂盒突变psPAX2-1载体的酶切位点ApaI，获得psP...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎诚耀，翁云层，张玲，李金峰，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44