细胞培养制造技术

本发明专利技术涉及细胞培养。具体地，涉及一种用于确定多种培养条件对细胞的影响的方法，包括下列步骤：a)提供第一组各自包括一个或多个细胞的细胞单元群，并且将所述的群体暴露于所需要的培养条件；(b)汇聚两个或多个所述的群体以形成至少一个第二组；(c)再重分该第二组以产生进一步的细胞单元群；(d)将所述的进一步的群体暴露于所需要的培养条件；(e)任选地，根据需要反复地重复步骤(b)-(d)；以及(f)任选地评估已经接触细胞的培养条件对所述的给定细胞单元的影响。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

cell culture

The present invention relates to cell culture. Specifically, relates to a method for determining a variety of effects of culture conditions on cell, which comprises the following steps: a) providing a first set of each include one or more cell unit group and the group exposed to the required conditions; (b) from two or more of the the group to form at least one of second groups; (c) re divided the second groups to produce further cell group; (d) the group further exposed to the required conditions; (E) optionally, repeating steps according to the (b) - (d); and (f) optionally given to assess the impact of cell culture conditions have been in contact with cells of the.

【技术实现步骤摘要】
细胞培养本申请是申请日为2003年10月3日的中国专利申请200380104770.0“细胞培养”的分案申请。
本专利技术涉及细胞培养，并且特别涉及原代细胞、细胞系、多潜能细胞、全能细胞和干细胞的培养，及通过调节细胞培养条件对其多种细胞过程的调节。本专利技术涉及在多种条件下利用多重培养步骤来调节细胞通路并且提供用于确定各种多重培养步骤方式对细胞过程，例如生长、分化和代谢活动的影响的方法。
技术介绍
近年来细胞培养已经成为生命科学中的核心技术。在′BasicCellCulture′OxfordUniversityPress(2002)Ed.J.M.Davis；和′AnimalCellCulture′OxfordUniversityPress(2000)Ed.JohnR.W.Masters中有关于细胞培养的描述，两者在此全部引入作为参考。细胞培养为研究细胞过程，例如细胞的存活、表型、基因型、增殖和分化，以及生物分子、中间物和产物的形成提供基础。也从遗传学水平-无论是在分离物或完整的转基因动物中-直到个体的蛋白质分子水平，为研究这些过程的调节提供方法。尽管其对生物学目前的状态有巨大贡献，即为令人鼓舞的科学最终提供了遗传治疗和组织工程的可能性，然而在许多方面细胞培养仍处于发展状态。细胞培养的重要目的是能够使多种细胞在体外生长。可培养生长的不同细胞类型的目录是广泛的(参见美国典型培养物保藏中心，http://www.atcc.ora；欧洲细胞保藏中心，http://www.ecacc.org.uk；德国微生物保藏中心，http://www.dsmz.de)，包括大多数细胞类型的代表物，并且随着越来越多的培养条件被发现而不断增加。尽管本领域中的发展是稳定的，对于新的细胞类型的合适培养条件的确定方法仍保持为完全地经验主义状态：通常用反复试验的方法发现生长条件。起始点的选择经常是基于先前别人对于相似细胞所使用的，乃至目前实验室对于不同的细胞所正在使用的培养条件。通常这些条件可能根本是完全不够的，并且必须重新开始反复试验的过程。即使新的培养条件是成功的，也必须记住对先前方法的改进也为实验引入了历史性的偏移。例如，大量的早期组织培养实验使得成纤维细胞能广泛使用，并且迄今为止大多数标准的细胞培养条件促进来源于中胚层的细胞的生长(成纤维细胞、内皮、成肌细胞)。根据这些条件开发用于上皮细胞和其他细胞类型的选择性生长的培养基是一种挑战。对于一些细胞类型现在已知血清----用于中胚层细胞的许多培养基的正常成分----实际上抑制生长。在此所描述的本专利技术的一个方面是开发容许特定细胞类型的存活、增殖或生长以及保持其表型的合适培养条件的方法。除促进细胞增殖的条件外，现代组织培养中特别重要的步骤是能够控制或指导细胞向特定的表型分化。因为细胞系的增殖需要细胞数目增加，绝大多数的培养条件已经发展至促进最大的细胞增殖。并不令人惊讶的是这些条件对细胞分化没有帮助，其中细胞生长经常受到限制乃至消除了细胞生长。促进细胞增殖的条件一般是低的细胞密度、低的Ca2+浓度、和存在生长因子，例如表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)和血小板衍生的生长因子(PDGF)。另一方面，在高细胞密度、高Ca2+浓度和存在分化诱导物，例如激素(例如氢化可的松)、旁泌性因子(例如IL-6、KGF、NGF)、类视黄醇以及甚至平面的极性化合物，例如二甲基亚砜(DMSO)的条件下促进白细胞郁积和分化。因此可能需要不同的条件用于特定细胞系的增殖和分化，当然这些相应的条件可能在不同谱系的细胞之间是不同的。在此所描述的本专利技术的第二个方面是用于发现容许细胞选择性分化的合适培养条件的方法。在细胞培养中还遇到的一些常见问题是原代细胞系的有限寿命，随着传代及其转化的细胞系特性的变化伴随有重要细胞特性的丢失。这些影响严重地限制了培养细胞供实验或分析之用，例如如下所述基于细胞的分析的实用性。原代细胞，即从组织新分离的细胞，极大地提供了最精确的细胞培养模型，因为它们表现出与其组织起源广泛相似的方式。值得注意的是，仍然没有开发出培养原代细胞的可靠方法，因此这些细胞在体外显示出有限的寿命。例如当试图扩增原代培养物或当试图进行更长时间的实验时，这表现出严重的技术限制。与原代培养物的使用相关的进一步问题是由于它们需要恒定的新鲜分离物，可能很难找到原材料，特别是来自于人的原材料，也很难获得表现一致的品系。因此本专利技术的第三个方面是培养原代细胞以获得具有延长寿命的有存活力培养物的方法。如果原代培养物在体外维持延长的时间，它们一般经受大部分细胞死亡的危险期，然而幸存的细胞是寿命较长的并且可进行无限培养。大多数的这些连续细胞系几乎总是如同细胞存在于完整动物组织中时的细胞的弱表现物。对于此的一个原因是容许细胞变得永生的过程也对细胞的特性有影响。例如，大多数已建立的细胞培养物已经停止表达组织特异的基因，并且替代的只表达为在细胞培养中连续生长所需要的管家基因----因此大多数这种细胞系相互之间的相似性比与其最初来源的组织之间的相似性要高。例如，大多数肝细胞系已经停止表达药物--代谢酶，该酶一般可能使其成为用于测试药物毒性的重要工具。在此所描述的本专利技术的进一步方面是培养细胞的方法，以使得它们提供更精确的组织模型。这随后可能改善基于细胞的实验和分析的可靠性和预测功效。本领域中需要培养细胞的改进技术，以及发现和实施这种技术来调节细胞过程，例如生长、分化、代谢活动、和表型表达的方法。
技术实现思路
本专利技术提供新的细胞培养技术，该技术是基于将细胞培养作为涉及以限定顺序进行系列培养步骤的动力学过程从而更好地达到预期效果的概念。本专利技术认识到可开发顺序暴露于所选择试剂的方式以调节细胞过程，因此达到先前不能通过传统技术可得到的控制水平。本专利技术致力于解决通过传统技术即使能够也很难解决的涉及多个步骤和试剂的细胞培养技术。由于传统细胞培养的繁重特性，复杂的多阶段方法中组织培养条件的经验主义确定不是在实践中可实行的，因为它包括大量的工作负荷。在第一个方面，本专利技术提供用于确定多种培养条件对细胞的影响的方法，包括下列步骤：(a)提供第一组各自包括一个或多个细胞的细胞单元群，并且将所述的群体暴露于所需要的培养条件；(b)再重分一个或多个所述的群体以产生进一步的细胞单元群；(c)将所述的进一步的群体暴露于所需要的培养条件；(d)任选地，根据需要反复地重复步骤(b)-(c)；以及(e)评估已经接触细胞的培养条件对所述的给定细胞单元的影响。有利的是，根据本专利技术的细胞群是汇合的并且随后被分开。因此在优选的实施方案中，本专利技术提供用于确定多种培养条件对细胞的影响的方法，包括下列步骤：(a)提供第一组各自包括一个或多个细胞的细胞单元群，并且将所述的群体暴露于所需要的培养条件；(b)汇聚两个或多个所述的群体以形成至少一个库；(c)再重分所述库以产生进一步的细胞单元群；(d)将所述的进一步的群体暴露于所需要的培养条件；(e)任选地，根据需要反复地重复步骤(b)-(d)；以及(f)评估细胞已经接触的培养条件对给定细胞单元的影响。本专利技术致力于所有的细胞过程，包括细胞的表型、基因型、分子产生、活力和增殖以及分化。优选地，使用本专利技术鉴定导致细胞分化的条件。例如可通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
体外从干细胞或双潜能、多潜能或全能祖细胞获得分化的细胞的方法，包括下列步骤：（a）使附着于微载体或珠子、限制在培养基可渗透屏障物的范围内或截留的干细胞或祖细胞在培养基中生长；（b）将步骤（a）中的细胞从一种培养基转移到另一种培养基；（c）重复步骤（b）；以及（d）获得分化的细胞。

【技术特征摘要】
2002.10.03 GB 0222846.81.用于培养干细胞和来源于干细胞的分化的细胞的方法，其中所述干细胞不是人胚胎干细胞，所述方法包括使附着于微载体或珠子或限制在培养基可渗透屏障物的范围内或截留的所述细胞生长，其中所述细胞经受至少两种不同的培养条件，所述不同的培养条件包括培养基的变化，其中产生细胞的汇合物并反复重分，其中所述方法包括：（a）培养所述细胞；（b）将所述培养物分为两个或更多个细胞群；（c）在两种或更多种不同种类的培养条件下培养所述的细胞群；（d）...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡延，
申请(专利权)人：可塑细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：