方法技术

本发明专利技术在一个方面涉及用于测定细胞单位的细胞培养史的方法，所述细胞单位用超过一种类型的标记进行标记，所述方法包括下述步骤：（ａ）测量用于标记细胞单位的每种标记的一种或多种参数；（ｂ）鉴定细胞单位中的每种标记；和（ｃ）使每种标记的标识与细胞单位的标识和／或细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术一般涉及细胞培养-例如原代细胞、细胞系、多能细胞、全能 细胞和干细胞培养。专利技术背景近年来，细胞培养已成为生命科学中的核心技术。细胞培养在'Basic Cell Culture' Oxford University Press ( 2002 ) Ed. J.M. Davis;和'Animal Cell Culture'Oxford University Press ( 2000 ) Ed. John R. W. Masters中得到描述；所述参考文献整体引入本文作为参考。细胞培养提供了用于 研究细胞进程的基础，所述细胞进程例如细胞存活力、表型、基因型、 增殖和分化，以及生物分子、中间物和产物形成。它还已经提供了研究 这些进程调节的，从遗传水平-无论是在分离还是完整转基因动物中 -下至个别蛋白质分子水平。尽管它对当前生物学状态有着巨大贡献，但 在许多方面细胞培养保持发展纪律，虽然不寻常地令人兴奋的科学最终 提供遗传治疗和组织工程的可能性。细胞培养的重要目标是能够体外培养广泛多样的细胞。可以在培养 中生长的不同细胞类型列表是广泛的(参见美国典型培养物保藏中心 http: 〃www.atcc.org;欧洲纟田月包i咅养物j呆藏中心,http: 〃www.ecacc.org.uk; 德意志微生物保藏中心，http: 〃www.dsmz.de),包括大多数细胞类型 的代表且不断增加，因为越来越多的培养条件得到发现。尽管本领域中 有稳定进展，但确定关于新细胞类型的合适培养条件的仍是完全根 据经验的生长条件几乎总是通过试验与误差来开发。起始点的选择将 通常基于其他人对于类似细胞先前使用的那种，或甚至是目前在实验室 中对于不同细胞使用的那种。许多次这些将筒单地是完全不适当的，且 试验与误差的过程必须重新开始。即使当新培养条件是成功的时，值得 记住的是先前方案的适应将已对实验引入历史偏差。例如，许多早期组 织培养实验广泛使用成纤维细胞，且迄今为止最标准的细胞培养条件促 进来源于中胚层的细胞(成纤维细胞、内皮、成肌细胞)生长。基于这 些条件开发适合于上皮和其他细胞类型的选择性生长培养基是个挑战。对于这些细胞类型中的一些，现在已知的是血清-用于中胚层细胞的许多 培养基的正常组分-实际上抑制生长。本文描述的本专利技术的 一个方面是用 于开发合适培养条件的，所述培养条件允许存活力、增殖或生长， 和保留特定细胞类型的表型。细胞培养中仍遇到的某些常见问题是原代细胞系的有限寿命、细胞 系传代的特性改变、及其伴随感兴趣的细胞特性丧失的转化。这些结果 严重显著了培养细胞用于在实验或测定法中使用的效用，例如下文描述 的基于细胞的测定法。原代细胞，即从组织中新分离的细胞，到目前为 止提供了最精确的细胞培养模型，因为它们以广泛类似其起源组织的方 式表现。值得注意的是，培养原代细胞的可靠仍未被开发，且因此 这些细胞在体外显示有限的寿命。这呈现严重的技术限制，例如当企图 扩大原代培养时，或当企图进行较长期实验时。与原代培养物使用相关 的进一步问题是，因为它们需要不断的新分离，所以难以特别是从人中 获得原始材料，且也难以获得一致表现的细胞系。本专利技术的第3个方面 因此是培养原代细胞以获得具有延长寿命的存活培养物的。如果原代物培养在体外维持延长期间，那么它们通常经历其中大多 数细胞死亡的危机，然而存活细胞活得更长，且可以进4亍无限期地培养。 当在完整动物组织中发现时，大多数这些连续细胞系几乎总是细胞的不良代表。关于这点的一个原因存在于下述事实允许细胞成为永生的过 程也对细胞特性具有影响。例如，大多数建立的细胞培养已停止表达组 织特异性基因，且改为只表达在细胞培养物中连续生长所需的管家基因 -因此大多数此类细胞系更像彼此而不像它们最初来源的组织。例如，大 多数肝细胞系已停止表达药物代谢酶，所述药物代谢酶将通常使得它们 成为测试药物毒性的有利工具。本文描述的本专利技术的一个进一步的方面 是培养细胞的，从而使得它们提供更精确的组织模型。这依次将改 善基于细j包的实验和测定法的可靠性和预测力。用于培养细胞的改良技术以及用于开发和实现此类技术调节细胞进程的呈现于我们共同未决的国际申请WO 2004/031369中，所述 细胞进程例如生长、分化、代谢活性和表型表达。当处理大量细胞单位 时，它们的标识和/或细胞培养史(例如，任何一个群体或单位可能已暴 露于的 一 系列培养条件的时间排列和确切性质)可能变得混乱。 WO2004/031369描述了用于测定细l包单位的标识和/或细月包培养史的改良。在一个方面描述了细胞单位的使用，所述细胞单位可以在细胞 生物学实验中方便地进行处理，使得例如能够分裂和合并所述单位。 本专利技术寻求提供克服现有技术的某些限制的进一步改进。专利技术概述在第一个方面，提供了用于测定用超过一种标记(例如标记类型)进行标记的细胞单位的细胞培养史的，所述包括下述步骤 (a)测量用于标记细胞单位的每种标记的一种或多种参数；(b)鉴定 细i包单位中的每种标记；和(c )使每种标记的标识与细胞单位的标识/ 或细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。在一个进一步的方面，提供了计算机程序产品，所述计算机程序产 品包括用于控制计算机执行本文所述的计算机程序。在一个进一步的方面，提供了用于测定细胞单位的细胞培养史的装 置，所述装置包含依照本文所述执行数据处理操作的可操作数据处 理逻辑。在一个进一步的方面，提供了包含微载体和带电(例如带负电荷的) 标记的复合物。在一个进一步的方面，提供了包含微载体和杆状标记的复合物。改进包含例如特定标记类型和特定细胞单位类型的改善标记，来自细胞 单位的标记的改善分离，和标记的改善分析。在一个进一步的方面，提供了用于分离包含微载体和标记的复合物 的，所述包括使复合物与蛋白酶接触的步骤，其中所述微载体 包含蛋白质、由蛋白质组成、或基本上由蛋白质组成。在一个进一步的方面，提供了用于分离包含微载体和标记的复合物 的，所述包括使所述复合物与酸接触的步骤。得标记可以使用本文所述进行分析。此外，这些不会导致标记 被此类处理破坏。此外进一步地，这些解决了标记以严重地使其分 析复杂化的方式获得的问题-例如标记变得在大表面积上分散和/或漂浮 在较稠密的水溶液上。在一个进一步的方面，提供了用于测定多种培养条件对细胞的影响的，所述包括本文所述复合物的使用。在一个进一步的方面，提供了用于测定多种培养条件对细胞的影响的，所述包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞 的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b )使2 个或更多所述群体合并，以形成至少一个第2个库；(c)使第2个库 再细分，以产生另外一组细胞单位群体；(d)使所述另外的群体暴露 于所需培养条件；(e)需要时任选反复重复步骤(b) - (d);和(f) 评估培养条件对已暴露于其的给定细胞单位的影响，其中每个细胞单位包含与本文所述复合物附着或结合的一种或多种细胞。在一个进一步的方面，提供了用于使细胞暴露于各种细胞培养条件 的，所述包括下述步骤(a)提供各自包含一种或多种细胞 的第1组细胞单位群体，且使所述群体暴露于所需培养条件；(b )使2 个或更多所述群体合并，以形成至少本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于测定用超过一种标记进行标记的细胞单位的细胞培养史的方法，其包括下述步骤：　　　　（ａ）测量用于标记所述细胞单位的每种标记的一种或多种参数；　　　　（ｂ）鉴定所述细胞单位中的每种标记；和　　　　（ｃ）使每种标记的标识与所述细胞单位的标识／或所述细胞单位已暴露的特定细胞培养条件关联。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：Y乔，F霍恩比，J吉尔德莱斯通，
申请(专利权)人：可塑细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]