一种双特异性抗体及其抗肿瘤用途制造技术

本发明专利技术提供一种双特异性抗体及其抗肿瘤用途，所述双特异性抗体包含能与TIM‑3特异性结合的第一抗原结合功能区和能与VISTA特异性结合的第二抗原结合功能区，本发明专利技术提供的抗体为IgG形式，所述双特异抗体能同时结合两种靶分子并且在治疗复杂疾病方面效果更好，不易产生脱靶效应。

【技术实现步骤摘要】
一种双特异性抗体及其抗肿瘤用途
本专利技术涉及抗体药物领域，特别地涉及一种双特异性抗体及其抗肿瘤用途。
技术介绍
目前已经有数十种单克隆抗体药物被相关机构认证并且运用到了临床抗肿瘤治疗中，虽然它们给肿瘤免疫治疗带来了突破性的成效，但是其疗效往往有限，如其中一些会产生耐药性，从而导致部分患者用药后不响应，或是在初始响应后出现复发再进展。普通的肿瘤治疗性抗体只能结合单一的抗原，其结合特异性相对较低，容易发生脱靶效应。双特异性抗体(Bispecificantibody，BsAb)能分别识别和结合两种不同的抗原，所以它可以把免疫细胞、病毒分子等连接到肿瘤细胞上，进而增强对靶细胞的杀伤作用，同时它也可以结合同一肿瘤细胞上的不同抗原以增强其结合特异性，从而减少脱靶毒性等副作用。这种具有双功能的重组抗体作为治疗肿瘤的药物拥有比单抗药物更高的疗效。1986年，Staerz和Bevan第一次利用双特异性抗体把细胞毒性T淋巴细胞运用于癌细胞溶解实验。2014年12月，安进公司研发的双特异性抗体免疫治疗药物Blinatumomab用于复发性或难治性的费城染色体阴性前B细胞急性淋巴细胞白血病(Acutelymphoblasticleukemia，ALL)的治疗。随着全球环境的恶化和人们生活习惯的改变，肿瘤的发病率越来越高，肿瘤患者的死亡率也逐渐上升，故抗肿瘤药物的市场将不断扩大。随着科学研究技术的发展，可以通过改变双特异性抗体的结构、相对分子质量和化合价来改善其血浆清除率、组织渗透率和药物代谢动力学等，进而提高其成药稳定性和临床疗效。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种双特异性抗体及其抗肿瘤用途。本专利技术是以如下技术方案实现的：一种双特异性抗体，所述抗体包含能与TIM-3特异性结合的第一抗原结合功能区和能与VISTA特异性结合的第二抗原结合功能区。进一步地，所述第二抗原结合功能区的重链可变区的氨基酸序列是与SEQIDNo.7、9、10、11所示任一氨基酸序列具有至少95％同一性且保留相应生物活性的变体序列或经删除、替换和/或添加一个或多个氨基酸残基后获得的保留相应生物活性的变体序列。进一步地，所述第二抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列是与SEQIDNo.8、12、13、14所示任一氨基酸序列具有至少95％同一性且保留相应生物活性的变体序列或经删除、替换和/或添加一个或多个氨基酸残基后获得的保留相应生物活性的变体序列。进一步地，所述第二抗原结合功能区的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.7、9、10、11任一项所示和/或所述第二抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.8、12、13、14任一项所示。进一步地，所述第二抗原结合功能区的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.11所示，所述第二抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.14所示。进一步地，所述第一抗原结合功能区的重链的氨基酸序列如SEQIDNo.17所示，所述第一抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.18所示。进一步地，所述双特异抗体的Fc链为IgG形式。进一步地，所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab)'2、单链Fv(scFv)和双特异性抗体。进一步地，所述抗体的生产步骤包括：在培养基中和合适的培养条件下培养含有上述抗体相应核苷酸编码序列的宿主细胞，收集细胞，纯化双特异性抗体或其他等同生产方案。进一步地，所述双特异性抗体可以与至少一种治疗剂偶联以形成免疫偶联物，所述治疗剂选自细胞毒素剂、放射性核素、硼原子、免疫调节剂、免疫偶联物、寡核苷酸中的一种或多种。进一步地，包括从培养基中或从所培养的宿主细胞中回收产生的上述抗体及其抗原结合片段并与药学上可接受的载体制成药物用于治疗肿瘤的用途，所述肿瘤包括但不限于胃癌、胰腺癌、胆囊癌、肝癌、结直肠癌、白血病、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、前列腺癌、膀胱癌、肾细胞癌。T细胞活化的v域免疫抑制因子(VISTA)是一种新型的抑制性免疫检查点蛋白。VISTA在肿瘤细胞上的表达及其相关调控机制尚不清楚。已有研究表明VISTA在人类卵巢癌和子宫内膜癌中高度表达。VISTA在子宫内膜癌中的上调与VISTA启动子甲基化状态有关。VISTA在肿瘤细胞中抑制T细胞增殖和细胞因子的产生，并在体内减少肿瘤浸润的CD8+T细胞。抗VISTA抗体延长荷瘤小鼠的存活时间。代表性的抗原结合功能区包括：抗体的可变区、抗体可变区的结构变构体、受体的结合域、配体结合域或酶结合域。抗体的结合特异性及亲合力均主要由CDR序列决定，根据成熟、公知的现有各项技术可轻易地将非CDR区域的氨基酸序列改变而获得具有相类似的生物活性的变体。“可变区”是指在抗体间，可变区的某些区段的序列显著不同，所述高度可变区为各3-12个氨基酸，其主要采取β折叠构型，由三个高度可变区连接，这些高度可变区形成环，所述环连接β折叠结构及在一些情况下形成β折叠结构的一部分。各链中的高度可变区是由FR紧挨着结合在一起，而与其他链的高度可变区有助于形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))，恒定区不直接涉及抗体对抗原的结合。“抗体的抗原结合片段”指能够与表位结合的抗体的片段、部分、区域或结构域，因此术语“抗原结合”与“表位结合”以及“抗体的抗原结合片段”与“抗体的表位结合片段”是相同的。抗原结合片段可以含有该类抗体的1、2、3、4、5或所有6个CDR域，并且尽管能够结合到所述表位，仍可以展现出不同的特异性、亲和力或选择性。优选地，抗原结合片段含有所述抗体的所有6个CDR域。“抗体的抗原结合片段”可以是单条多肽链(例如，scFv)的一部分或包含单条多肽链，或者可以是两条或更多条多肽链(各自具有氨基末端和羧基末端，例如，双抗体、Fab片段、Fab2片段等)的一部分或包含两条或更多条多肽链。“IgG”是免疫球蛋白G(ImmunoglobulinG，IgG)的缩写，是血清主要的抗体成分，根据IgG分子中的r链抗原性差异，人IgG有四个亚型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。“单克隆抗体”是指获得自大体上均质的抗体的群体的抗体，即组成该群体的抗体除了个别抗体可少量存在的可能天然生成的突变外均相同。单克隆抗体是高度特异性的，是指针对单一抗原位点。此外，相对于包括针对不同决定子(抗原决定基)的不同抗体的多克隆抗体制剂，各单克隆抗体是针对抗原上的单一决定子。除单克隆抗体的特异性外，单克隆抗体的有利的处在于其可经合成而不被其他抗体污染。一个或多个二硫键链间连接是指第一Fc链及第二Fc链通过一个或多个二硫键链间连接，形成异源二聚体片段。在本专利技术中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双特异性抗体，其特征在于，所述抗体包含能与TIM-3特异性结合的第一抗原结合功能区和能与VISTA特异性结合的第二抗原结合功能区。/n

【技术特征摘要】
20190725 CN 20191067820771.一种双特异性抗体，其特征在于，所述抗体包含能与TIM-3特异性结合的第一抗原结合功能区和能与VISTA特异性结合的第二抗原结合功能区。


2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第二抗原结合功能区的重链可变区的氨基酸序列是与SEQIDNo.7、9、10、11所示任一氨基酸序列具有至少95％同一性且保留相应生物活性的变体序列或经删除、替换和/或添加一个或多个氨基酸残基后获得的保留相应生物活性的变体序列。


3.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第二抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列是与SEQIDNo.8、12、13、14所示任一氨基酸序列具有至少95％同一性且保留相应生物活性的变体序列或经删除、替换和/或添加一个或多个氨基酸残基后获得的保留相应生物活性的变体序列。


4.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第二抗原结合功能区的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.7、9、10、11任一项所示和/或所述第二抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.8、12、13、14任一项所示。


5.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，所述第二抗原结合功能区的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo.11所示，所述第二抗原结合功能区的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNo....

【专利技术属性】
技术研发人员：杨彪，
申请(专利权)人：杨彪，
类型：发明
国别省市：湖北;42