抗CEACAM1抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了特异性结合CEACAM1能力改善的抗CEACAM1抗体及其用途。本发明专利技术的抗CEACAM1抗体显示出对CEACAM1的优异特异性结合能力，还可以激活细胞毒性T细胞和天然杀伤细胞的抗癌免疫功能。因此，它们中的每一种都可以有效地用作抗癌剂和治疗癌症的组合物。

Anti CEACAM1 antibody and its application

The invention provides an anti CEACAM1 antibody with improved ability to specifically combine with CEACAM1 and its application. The anti CEACAM1 antibody of the invention shows excellent specific binding ability to CEACAM1, and can also activate the anti-cancer immune function of cytotoxic T cells and natural killer cells. Therefore, each of them can be effectively used as an anticancer agent and a composition for treating cancer.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗CEACAM1抗体及其应用
本专利技术涉及特异性结合CEACAM1的抗CEACAM1抗体及其应用。
技术介绍
癌胚抗原相关细胞粘附分子1(以下称为CEACAM1)是一种跨膜糖蛋白，属于癌胚抗原(CEA)家族。在CEA家族成员中，CEACAM1、CEACAM3、CEACAM4、CEACAM5、CEACAM6、CEACAM7和CEACAM8在人类中表达。更重要的是，CEACAM1是唯一在淋巴细胞群(包括活化的T细胞和天然杀伤细胞)中表达的CEA家族成员。据报道，CEACAM1在癌细胞中高表达。此外，在上皮细胞、内皮细胞和骨髓细胞中，也观察到低水平的CEACAM1表达。在淋巴细胞表面，CEACAM1起到调节免疫应答的作用。具体而言，CEACAM1被证明是活化的T细胞(包括人肠道上皮细胞中含有的那些)的抑制性受体(Gray-Owen&Bloomberg，Nat.Rev.Immunol.2006；6:433-446；Morales等，J.Immunol.，1999；163:1363-1370)。特别地，CEACAM1被认为是类似于PD-1和CTLA-4的免疫检查点分子，在调节T细胞活化中起关键作用。免疫检查点途径保护组织免受非炎性生理条件下免疫介导的损伤。当CEACAM1在T淋巴细胞上被激活时，主要是在CEACAM1-CEACAM1反式同源性接合时，CEACAM1通过将磷酸酶募集到其自身的胞浆ITIM基序中来发出信号以抑制TCR介导的炎症途径(Chen等，J.Immunol.2008；180:6085-6093)。因此，抑制癌症环境下的免疫检查点途径已成为有希望的抗癌治疗策略。几种人肿瘤类型的研究显示，肿瘤可以通过诱导CEACAM1来逃避免疫。此外，在临床前动物肿瘤模型中，已显示使用单克隆抗体(mAb)阻断CEACAM1相互作用可增强针对肿瘤的免疫应答，促进肿瘤抑制(Ortenberg等，Mol.CancerTher.2012；11(6):1300-1310).常规抗癌药物的一个最大问题是，相对其有限的抗癌效果和高复发率，治疗会产生有害的副作用。另一方面，一种近期引人注目的方法，即所谓的免疫检查点阻断，通过重新激活肿瘤反应性耗尽的T细胞而不是直接杀死癌细胞来消除癌症。这种方法似乎相对安全有效，因为它利用宿主免疫功能消除癌症，能够避免影响不相关的正常细胞。就来自百时美施贵宝的靶向PD-1的纳武单抗(nivolumab)而言，与常规抗癌药物相比，其毒性谱处于可控范围内，而其抗癌作用显著高于常规药物。例如，在发行于2015年的纳武单抗和达卡巴嗪(治疗转移性黑色素瘤患者的标准化疗药物)的头对头比较的第三阶段研究中，与达卡巴嗪13.9％的客观反应率(95％CI，9.5至19.4)相比，纳武单抗显示出40％的客观反应率(95％CI，33.3至47.0)。纳武单抗组的中位无进展生存期为5.1个月，而达卡巴嗪组为2.2个月。毒性分析也证明了纳武单抗对达卡巴嗪的优越性(Robert等，NewEngl.J.Med.2015；372:320-330)。同时，CEACAM1阻断抗体作用于在细胞毒性T细胞和天然杀伤细胞表面表达的CEACAM1，其与肿瘤细胞上过表达的CEACAM1分子相互作用。因此，就过表达CEACAM1的肿瘤而言，预期CEACAM1靶向抗体可阻断T/NK细胞和肿瘤细胞之间的CEACAM1-CEACAM1亲同种抗原的抑制性相互作用，从而重新激活抗肿瘤的T/NK细胞应答。目前正在开发的CEACAM1靶向抗体(第1阶段临床试验于2017年2月提前终止)除了识别CEACAM1外，还识别CEACAM3和CEACAM5。这种BMS克隆的脱靶识别特性可能是由于其在N-结构域中的表位序列在人CEACAM1，CEACAM3和CEACAM5中高度同源。
技术实现思路
技术问题因此，为了开发特异性结合CEACAM1的抗CEACAM1抗体，本专利技术人努力发现一种结合CEACAM1的N-结构域且不与CEACAM3、CEACAM5、CEACAM6或CEACAM8交叉反应的抗CEACAM1抗体，并完成了本专利技术。技术方案根据本专利技术的一个目的，提供了抗CEACAM1抗体或其片段，其包含：具有选自SEQIDNO：1-8之一氨基酸序列的轻链CDR1；具有选自SEQIDNO：9-16之一氨基酸序列的轻链CDR2；具有选自SEQIDNO：17-29之一氨基酸序列的轻链CDR3；具有选自SEQIDNO：30-38之一氨基酸序列的重链CDR1；具有选自SEQIDNO：39-46之一氨基酸序列的重链CDR2；和具有选自SEQIDNO：47-55之一氨基酸序列的重链CDR3。根据本专利技术的另一个目的，提供了抗CEACAM1抗体或其片段，其包含：具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：9所示氨基酸序列轻链CDR2，具有SEQIDNO：23所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。此外，根据本专利技术的另一个目的，提供一种抗癌剂，其包含上述抗CEACAM1抗体或其片段作为活性成分。此外，根据本专利技术的另一个目的，提供了一种抗癌佐剂，其包含上述抗CEACAM1抗体或其片段作为活性成分。另外，根据本专利技术的另一个目的，提供一种用于治疗癌症的组合物，其包含上述抗癌佐剂和细胞治疗剂。此外，根据本专利技术的另一个目的，提供了一种治疗癌症的方法，包括给受试者施用与上述抗CEACAM1抗体或其片段接触的淋巴细胞。另外，根据本专利技术的另一个目的，提供了抑制表达CEACAM1的肿瘤细胞增殖的方法，该方法包括将表达CEACAM1的肿瘤细胞与抗CEACAM1抗体或其片段接触。专利技术的有益效果根据本专利技术的抗CEACAM1抗体特异性结合CEACAM1，从而激活细胞毒性T细胞和天然杀伤细胞的抗癌免疫功能，因此，可以有效地用作抗癌剂和治疗癌症的组合物。附图的简要说明图1是根据一种实施方式制备的重组CEACAM1的结构示意图。图2显示了取决于重组CEACAM1组成型结构域，抗CEACAM1抗体的结合能力。图3显示了取决于C25的浓度，C25与重组CEACAM1结合的比较结果。图4显示了取决于抗CEACAM1抗体的浓度，抗CEACAM1抗体与CEACAM1的结合。图5显示了取决于C25和C25衍生抗体克隆的浓度，CEACAM1-JurkatT细胞系表面表达的CEACAM1的结合能力：(a)表示取决于C25的浓度，与CEACAM1-JurkatT细胞系表面表达的CEACAM1的结合能力；(b)表示取决于C25衍生抗体克隆的浓度，与CEACAM1-JurkatT细胞系表面表达的CEACAM1的结合能力。图6是显示抗CEACAM1抗体对CEACAM1的亲和力的表格。亲和力通过动力学速本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，包括：/n轻链CDR1，其具有选自SEQ ID NO：1-8之一的氨基酸序列；/n轻链CDR2，其具有选自SEQ ID NO：9-16之一的氨基酸序列；/n轻链CDR3，其具有选自SEQ ID NO：17-29之一的氨基酸序列；/n重链CDR1，其具有选自SEQ ID NO：30-38之一的氨基酸序列；/n重链CDR2，其具有选自SEQ ID NO：39-46之一的氨基酸序列；和/n重链CDR3，其具有选自SEQ ID NO：47-55之一的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170324 KR 10-2017-0037613;20171130 KR 10-2017-011.一种抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，包括：
轻链CDR1，其具有选自SEQIDNO：1-8之一的氨基酸序列；
轻链CDR2，其具有选自SEQIDNO：9-16之一的氨基酸序列；
轻链CDR3，其具有选自SEQIDNO：17-29之一的氨基酸序列；
重链CDR1，其具有选自SEQIDNO：30-38之一的氨基酸序列；
重链CDR2，其具有选自SEQIDNO：39-46之一的氨基酸序列；和
重链CDR3，其具有选自SEQIDNO：47-55之一的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：9所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：17所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


3.如权利要求2所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：56所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


4.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：9所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：18所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


5.如权利要求4所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：58所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


6.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：9所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：19所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


7.如权利要求6所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：60所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


8.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：9所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：20所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


9.如权利要求8所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：62所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


10.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：10所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：17所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


11.如权利要求10所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：64所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


12.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：10所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：21所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


13.如权利要求12所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：66所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


14.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：11所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：22所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


15.如权利要求14所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：68所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：86所示氨基酸序列的重链可变区。


16.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：10所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：17所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：30所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：48所示氨基酸序列的重链CDR3。


17.如权利要求16所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：64所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：88所示氨基酸序列的重链可变区。


18.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：1所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：10所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO：17所示氨基酸序列的轻链CDR3，具有SEQIDNO：31所示氨基酸序列的重链CDR1，具有SEQIDNO：39所示氨基酸序列的重链CDR2，和具有SEQIDNO：47所示氨基酸序列的重链CDR3。


19.如权利要求18所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：64所示氨基酸序列的轻链可变区和具有SEQIDNO：90所示氨基酸序列的重链可变区。


20.如权利要求1所述的抗CEACAM1抗体或其片段，其特征在于，所述抗体包含具有SEQIDNO：2所示氨基酸序列的轻链CDR1，具有SEQIDNO：12所示氨基酸序列的轻链CDR2，具有SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷昭暎，吴美英，朴惠英，李美祯，尹爱吝，廉慧仁，南惠美，李恩姬，元钟和，
申请(专利权)人：财团法人牧岩生命科学研究所，株式会社绿十字，
类型：发明
国别省市：韩国;KR