一种CTLA-4单克隆抗体6F1及其用于抗肿瘤的用途制造技术

本发明专利技术提供一种CTLA‑4抗体，该抗体能够特异性的结合CTLA‑4蛋白的特定表面抗原，并且结合效果较好，具有较好的应用价值及市场前景，可以用于医药领域。

A CTLA-4 monoclonal antibody 6F1 and its application in anti-tumor

The invention provides a CTLA \u2011 4 antibody, which can specifically bind specific surface antigen of CTLA \u2011 4 protein, has good binding effect, good application value and market prospect, and can be used in the field of medicine.

【技术实现步骤摘要】
一种CTLA-4单克隆抗体6F1及其用于抗肿瘤的用途
本专利技术涉及抗体领域，更具体的涉及一种CTLA-4单克隆抗体及其用于抗肿瘤的用途。
技术介绍
细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxicTlymphocyte-associatedantigen-4,CTLA-4)，表达于活化的CD4+和CD8+T细胞的跨膜受体，是一种白细胞分化抗原，与T细胞表面的协同刺激分子受体(CD28)具有同源性，结合相同配体B7-1/B7-2。CTLA-4能平衡CD28介导的信号，防止淋巴细胞过渡激活。T细胞的活化需要两组信号的刺激，T细胞抗原识别受体与主要组织相容性复合体抗原肽结合作为第一信号、第二信号来自抗原呈递细胞(APC)与T细胞表面协同刺激受体的结合。T细胞表面受体细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)与APC表面的配体B7是一对协同共刺激信号，在T细胞的激活中起负性调节作用。研究显示，CTLA-4在自身免疫性疾病的发生发展中起重要作用。格雷夫斯病(Graves'disease，GD)、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)、乳糜泻疾病(celiacdisease，CD)等多种自身免疫性疾病患者血清中可溶性CTLA-4的水平较健康对照组高，但这种高表达的生物学意义尚未完全阐明。有研究发现，CTLA-4在自身免疫应答过程中通过调节抗炎/促炎细胞因子的平衡，进而调节疾病进程。小鼠CTLA-4废除实验表明，CTLA-4缺陷影响中枢和外周的免疫耐受及调节性T细胞(regulatoryTcell，Treg)介导的免疫抑制。CTLA-4在T细胞激活中的重要调节作用，让以CTLA-4参与的共刺激通路为切入点探究治疗自身免疫性疾病的新途径受到广泛关注。CTLA-4又被称作CD152，属于免疫球蛋白超家族成员。CTLA-4是由CTLA-4基因编码的T细胞表面跨膜蛋白，主要在活化的CD+4和CD+8T淋巴细胞以及活化的B淋巴细胞表面表达。人类CTLA-4基因位于第2号染色体长臂33带，包含4个外显子，分别编码引导序列、配体结合区域、跨膜区域以及胞质尾区。CTLA-4有两种亚型，分别是由4种外显子编码的全长型CTLA-4(flCTLA-4)和除编码跨膜区域外的其他3种外显子编码的可溶型CTLA-4(sCTLA-4)；sCTLA-4来源于可以导致一个半胱氨酸残基丢失的选择性剪接，是存在于血清的可溶性单体蛋白。活化的T细胞低表达sCTLA-4蛋白，高表达flCTLA-4蛋白。关于CTLA-4的功能和作用机制已研究多年，但至今尚未形成定论，比较公认的是CTLA-4在T细胞的活化中起负调控作用，从而保持T细胞的活化平衡。在T细胞活化所必需的共刺激信号中，B7/CD28信号起着十分重要的作用，CD28分子在T细胞表面组成性表达，且能在同源APC/T细胞相互作用时结合APC表面的配体B7-1(CD80)和B7-2(CD86)，通过CD28传递的信号促进T细胞活化、增殖以及细胞因子的产生。B7分子的另一个受体是CTLA-4，与CD28相反，CTLA-4并不在T细胞组成性表达，只有在T细胞过度激活的时才上调。越来越多的证据表明，CTLA-4阳性细胞可修饰APC的表型，从而调节幼稚T细胞的启动。需要注意的是，CTLA-4能通过反式内吞作用下调APC上共刺激配体的表达，从而抑制T细胞的增殖活化。CTLA-4阳性细胞作为调节剂存在的情况下，静止T细胞应答的抑制效应依赖于CTLA-4的表达，且与APC的数目极度相关。在低数目的APC或低水平配体下，CTLA-4依赖性抑制非常有效；而在较高数目的APC或高水平配体下，抑制丧失。故抑制程度与保留在APC上CD86的表达水平有关。目前关于CTLA-4调控免疫应答的具体机制尚未完全明了，研究结果相悖的情况也常发生。Schneider等报道，CTLA-4通过破坏ZAP-70微团簇的形成而传递抑制信号，而此前研究认为CTLA-4并不影响ZAP-70的招募或磷酸化作用。CTLA-4是少数免疫基因之一，缺失会导致致命性的淋巴组织增生性疾病，但也有研究报道，在成年小鼠模型中消除CTLA-4不会引起自发性自身免疫性疾病，提示CTLA-4在不同时期不同情形下的作用还需要进一步明确。Simone等研究自身免疫性疾病与CTLA-4的关系时发现，自身免疫性疾病组血清sCTLA-4的水平较健康对照组升高。用双向混合淋巴细胞反应诱导发现，自身免疫性疾病患者血清sCTLA-4能抑制T细胞增殖，减少γ干扰素、白细胞介素(interleukin，IL)-2、IL-13的分泌，提高转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β，TGF-β)和IL-10的水平，提示sCTLA-4对细胞因子的产生具有双重作用，即精细调节免疫应答过程中激活因子与抑制因子间的平衡。将CTLA-4作为免疫检查点来研究治疗自身免疫性疾病的新途径已渐成趋势，使用Abatacept(CTLA4-Ig)阻断B7通路是近年来研究的热点，并显示出成效。也有研究采用人多发性硬化动物模型EAE模型探索B7通路阻塞的影响发现，阻断B7通路会导致更严重的疾病。CTLA-4作为调节T细胞活化平衡的重要分子，为自身免疫性疾病的治疗开辟了新的途径。CTLA-4阻断性抗体广泛用于治疗前列腺癌、肾癌、黑色素瘤等。表达4-1BBL的肿瘤细胞疫苗结合CTLA-4阻断剂，较单独使用组相比较，联合组明显降低小鼠前列腺癌RM-1肿瘤并明显增加存活率，联合组导致更高的CTL，及混合细胞培养上清中细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的分泌增加。以上结果提示结合4-1BB与CTLA-4阻断可能为前列腺癌免疫治疗提供了一种新的策略。实际上，抗CLA-4抗体对于弱免疫原性的肿瘤效果不明显，但与GM-CSF表达的肿瘤疫苗或其它抗体相结合则可明显增强疗效。与冷冻消融术或CTLA-4阻断单独使用相比，联合使用减缓或防止了大量继发性肿瘤的生长。减少了CD4+和CD8+效应细胞的扩增，同时效应T细胞与调节性T细胞的比值上升。第一个被批准的CTLA-4单抗Yervoy(伊匹单抗)，2011年获批治疗转移/不可切除黑色素瘤，2015年10月扩大适应症用于治疗黑色素瘤，与Opdivo联合用药可以显著提高客观缓解率，延长无进展生存期。该药2017年一季度销售额约为3.3亿美元。基于该抗体的巨大商业利益，针对该靶点研究也变得非常热门。但是现有技术中针对CTLA-4的抗体虽然也有涉及，但是种类还不够多，特异性表位的抗体以及活性高的抗体还不能满足需求。
技术实现思路
本专利技术一方面提供一种CTLA-4的抗体,其能够高亲和力的结合CTLA-4抗体。具体的，抗CTLA-4单克隆抗体，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示。更具体的，在全人源抗CTLA-4单克隆抗体中，重链恒定区为同种型人CH的恒定区，轻链恒定区为人CL的恒定区。一种抗CTLA-4单克隆抗体，含有重链和轻链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CTLA-4的抗体,其能够高亲和力的结合CTLA-4抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种CTLA-4的抗体,其能够高亲和力的结合CTLA-4抗体。


2.一种抗CTLA-4单克隆抗体，轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:5所示。


3.如权利要求2或3所述的单克隆抗体，其中重链恒定区为同种型人CH的恒定区，轻链恒定区为人CL的恒定区。


4.一种抗CTLA-4单克隆抗体，含有重链和轻链(重链和轻链通过二硫键连接)，重链可变区含有CDR1、CDR2和CDR3三个高变区，轻链可变区含有CDR...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振，张勇，
申请(专利权)人：苏州立豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32