本发明专利技术涉及一种特异性结合组织因子通道抑制剂(TFPI)的抗体，一种编码所述抗体的核酸，一种包含所述核酸的载体，一种使用所述载体转化的宿主细胞，一种用于生产所述抗体的方法，以及一种用于治疗血友病的药物组合物，其包含所述抗体作为活性成分。本发明专利技术所述的特异性结合TFPI的抗体，可通过抑制TFPI激活外源性凝血途径。因此，本发明专利技术所述的抗体可以有效用于治疗抗体诱导的血友病患者和预防A型血友病或B型血友病患者的凝血疾病。
【技术实现步骤摘要】
结合TFPI的新型抗体以及包含所述抗体的组合物本申请是申请日为2015年12月29日、中国申请号为201580078235.5、专利技术名称为“结合TFPI的新型抗体以及包含所述抗体的组合物”的分案申请。
本专利技术涉及一种特异性结合组织因子通道抑制剂(TFPI)的抗体，编码所述抗体的核酸，包含所述核酸的载体，包含所述载体的宿主细胞，用于生产所述抗体的方法，以及用于治疗血友病的药物组合物，其包含所述抗体作为活性成分。
技术介绍
已知，在大约30％的A型和B型血友病患者中，对用于治疗的FVIII(VIII因子)或FIX(IX因子)蛋白生成抗体，从而显著降低所述蛋白的治疗效果。作为蛋白质的替代物，已经施用活化的VIIa因子或aPCC(血浆来源的活化的凝血素复合物浓缩物(plasma-derivedactivatedprothrombincomplexconcentrate))。将上述重组蛋白通过每周两次或多次静脉内注射施用于血友病患者，但是持续存在由重复施用重组蛋白引起的不便的问题。因此，积极地进行了对具有增加的半衰期的长效重组蛋白的研究。在血友病模型中，近来尝试了一种针对TFPI(组织因子通道抑制剂)的方法。TFPI牵涉在外源性凝血途径中，并且通过使用TF/FVIIa防止X因子激活来抑制凝血的功能(见图1)。因此，当TFPI被抗TFPI抗体抑制时，出血过程中的凝血可以通过外源性途径激活。TFPI由三个KPI结构域(Kunitz型结构域或Kunitz结构域)组成，并且KPI-2(Kunitz结构域2)通过直接结合FXa来抑制FXa(见图2)。这意味着KPI-2形成TF/FVIIa/FXa/TFPI复合物，导致直接抑制FXa的生成。抗TFPI抗体可以用于已经生成了对抗FVIII或FIX蛋白的抗体的患者。此外，抗TFPI抗体具有极长的半衰期(大约2周)，并且因此可以减少其施用次数。针对TFPI的血友病治疗剂主要处于研究阶段或初始开发阶段。例如，由NovoNordisk开发的人源化单克隆抗体(mAb)mAb2021是人源化抗体(IgG4)，其为抗TFPI单克隆抗体，并处于1期临床阶段。此外，由Baxter开发的ARC19499是靶向TFPI的聚乙二醇化适体(aptamer)，并处于临床前阶段。此外，由Baxter和3BPharmaceuticals开发的JBT2329是聚乙二醇化抗人TFPI20肽，并处于临床前阶段。不断提出对治疗血友病新药的需要，并且对开发不同于绕过剂(bypassingagent)如FVIIa方法的治疗剂存在迫切需要。尤其，优选抑制TFPI通道的药物的方法。在使用凝血因子给药的血友病患者中，存在对所述因子具有抗性的许多患者，并且因此需要一种新型药物。然而，应该考虑如抗原(Ag)-抗体(Ab)复合物清除率的医学问题。因此，本专利技术的专利技术人做出大量的努力，开发了特异性结合TFPI的新型抗体，并且因此，发现抗体的用途可通过抑制TFPI的抗凝机制来激活外源性凝血途径，从而完成本专利技术。
技术实现思路
技术问题本专利技术的目的是提供特异性结合TFPI的新抗体，编码所述抗体的核酸，包含所述核酸的载体，包含所述载体的宿主细胞，用于生产所述抗体的方法，以及用于治疗抗体诱导的血友病或预防A型血友病和B型血友病患者的凝血疾病的药物组合物，所述药物组合物包含所述抗体作为活性成分并且能够抑制TFPI从而激活外源性凝血途径。技术方案为了实现上述目的，本专利技术提供了特异性结合由SEQIDNO:39表示的TFPI(组织因子通道抑制剂)的抗体。本专利技术还提供了：编码抗TFPI抗体的核酸；含有所述核酸的载体；和具有其中引入所述载体的细胞。本专利技术还提供了用于治疗血友病的药物组合物，其包含抗TFPI抗体作为活性成分。附图说明图1显示凝血和TFPI的外源性途径。图2显示TFPI的蛋白质结构示意图和KPI结构域的功能。图3显示纯化的抗TFPI抗体中T417和T308克隆抗体蛋白质电泳(SDS-PAGE)的结果。图4显示抗TFPI抗体中克隆T417和人源化抗体克隆308的氨基酸序列。图5显示抗TFPI抗体中作为克隆308抗体突变体的308-2和302-4克隆抗体的氨基酸序列。图6显示抗TFPI抗体中作为克隆308抗体突变体的308-2和302-4克隆抗体IgG的蛋白质电泳(SDS-PAGE)结果。图7显示根据动物的种类TFPIKPI-2(Kunitz结构域2)蛋白的蛋白质电泳(SDS-PAGE)结果。图8图示了抗TFPI抗体的亲和力。图9图示了通过FXa活性测定评估抗TFPI抗体中嵌合抗体作用的结果。图10图示了通过FXa活性测定评估抗TFPI抗体中人源化抗体作用的结果。图11图示了通过FXa活性测定评估抗TFPI抗体中回复突变抗体作用的结果。图12图示了通过TF/FVIIa/Fxa复合物测定评估抗TFPI抗体中嵌合抗体作用的结果。图13图示了通过TF/FVIIa/Fxa复合物测定评估抗TFPI抗体中人源化抗体作用的结果。图14图示了通过TF/FVIIa/Fxa复合物测定评估抗TFPI抗体中回复突变抗体(back-mutatedantibodies)作用的结果。图15图示了通过凝血酶生成测定评估抗TFPI抗体中人源化抗体作用的结果。图16图示了通过凝血酶生成测定评估抗TFPI抗体中回复突变抗体作用的结果。图17显示抗TFPI抗体中的克隆308和人TFPIK2结构域之间的预期结合。由红色表示的分子表示人TFPIK2结构域，和由绿色表示的分子表示克隆308抗体。图18显示抗TFPI抗体中的克隆308的重链可变区和人TFPI抗原之间的预期结合。图19显示抗TFPI抗体中的克隆308的轻链可变区和人TFPI抗原之间的预期结合。图20至28显示通过Fxa活性测定评估亲和力成熟的抗TFPI抗体作用的结果。图29至33显示通过TF/FVIIa/FX复合物测定评估亲和力成熟的抗TFPI抗体作用的结果。图34显示通过凝血酶生成测定评估亲和力成熟的抗TFPI抗体作用的结果。本申请涉及以下各项：1.特异性结合TFPI(组织因子通道抑制剂)的抗体，其中所述组织因子通道抑制剂由SEQIDNO:39表示，其中所述抗体含有由氨基酸序列SEQIDNO:5、23或149代表的重链CDR1、由氨基酸序列SEQIDNO:6、27、155或162代表的重链CDR2、由氨基酸序列SEQIDNO:7、151或156代表的重链CDR3；以及由氨基酸序列SEQIDNO:8、152或177代表的轻链CDR1；由氨基酸序列SEQIDNO:9或153代表的轻链CDR2；和由氨基酸序列SEQIDNO:10或154代表的轻链CDR3。2.权利要求1的抗体，其中，所述抗体含有由氨基酸序列SEQIDNO:1、21、25、137或本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.特异性结合TFPI(组织因子通道抑制剂)的抗体，其中所述组织因子通道抑制剂由SEQ ID NO:39表示，/n其中所述抗体含有由氨基酸序列SEQ ID NO:5、23或149代表的重链CDR1、由氨基酸序列SEQ ID NO:6、27、155或162代表的重链CDR2、由氨基酸序列SEQ ID NO:7、151或156代表的重链CDR3；以及由氨基酸序列SEQ ID NO:8、152或177代表的轻链CDR1；由氨基酸序列SEQID NO:9或153代表的轻链CDR2；和由氨基酸序列SEQ ID NO:10或154代表的轻链CDR3。/n
【技术特征摘要】
20150225 KR 10-2015-0026555;20150924 KR 10-2015-011.特异性结合TFPI(组织因子通道抑制剂)的抗体，其中所述组织因子通道抑制剂由SEQIDNO:39表示，
其中所述抗体含有由氨基酸序列SEQIDNO:5、23或149代表的重链CDR1、由氨基酸序列SEQIDNO:6、27、155或162代表的重链CDR2、由氨基酸序列SEQIDNO:7、151或156代表的重链CDR3；以及由氨基酸序列SEQIDNO:8、152或177代表的轻链CDR1；由氨基酸序列SEQIDNO:9或153代表的轻链CDR2；和由氨基酸序列SEQIDNO:10或...
【专利技术属性】
技术研发人员：金董植，李美祯，朴在灿，李秀珉，郭曦天，黄成虎，李滢权，金基洙，朴荣燮，丁俊弘，赵基俊，
申请(专利权)人：财团法人牧岩生命科学研究所，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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