白血病干细胞抑制剂及其在治疗慢性粒细胞白血病中的应用制造技术

本发明专利技术涉及白血病干细胞抑制剂及其在治疗慢性粒细胞白血病中的应用，所述白血病干细胞抑制剂为PAI‑1抗体，其能够以较高的亲和力结合PAI‑1蛋白，能够改善CML小鼠脾脏病变，能够延长CML小鼠生存期，能够用于预防或治疗慢性粒细胞白血病，有着广阔的应用前景。

Leukemia stem cell inhibitor and its application in the treatment of chronic myeloid leukemia

【技术实现步骤摘要】
白血病干细胞抑制剂及其在治疗慢性粒细胞白血病中的应用
本专利技术涉及生物医药领域，具体的涉及白血病干细胞抑制剂及其在治疗慢性粒细胞白血病中的应用。
技术介绍
慢性粒细胞白血病（chronicmyeloidleukemia，CML）是一种起源于造血干细胞（hematopoieticstemcell，HSC）的骨髓增殖克隆性疾病，正常的造血干细胞在各种内外因素的作用下，发生第9号染色体和22号染色体的易位，形成费城染色体（Philadelphiachromosome，Ph）,进而编码产生BCR-ABL1融合致癌蛋白，最终导致白血病干细胞（leukemiastemcell，LSC）的形成[1]。由于BCR-ABL1致癌蛋白具有持续激活的酪氨酸激酶活性，可诱导白血病细胞增殖失控、凋亡抑制，引起慢性粒细胞白血病的发生发展[2]。在不治疗的前提下，CML会由慢性期逐渐进展到加速期，最后进入难治的急变期。尽管已经有一些酪氨酸激酶抑制剂（tyrosinekinaseinhibitors，TKIs）能够显著的改善CML的预后，例如imatinib。但停药后的临床试验结果显示在至少达到两年完全分子学缓解（completemolecularremission，CMR）患者中，停药后12个月的分子学复发达到59%，而65个月的累积复发率上升到61%[3]。后期陆续开展的各项TKIs停药试验，例如TWISTER、HOVON等，都报道类似的复发率[4,5]。由于CML易复发，导致病人在康复后仍然不能停止服用酪氨酸激酶抑制剂药物。经过研究发现，达到CMR后停药复发可能表明患者体内的白血病干细胞的持续存在，并没有被TKIs彻底清除掉。并且，白血病干细胞检测相关研究也显示，在持续深度分子学缓解的慢粒患者中仍能检测到白血病干细胞[6,7]。白血病干细胞拥有独特的抵抗细胞毒性剂的能力，它拥有与正常造血干/族细胞一样的性能，包括自我更新、细胞周期静止以及抗传统化疗等[8,9]。各项研究证明TKIs只能杀死处于分裂增殖状态的白血病细胞，并不能清除处于静止休眠期的慢粒白血病干细胞[7,10-12]，这也是导致CML复发的关键原因。因此，清除白血病干细胞成为完全治愈慢性粒细胞白血病的关键点，也是当前慢性粒细胞白血病研究的热点[13]。现研究表明抑制纤溶酶原激活物抑制剂1(Plasminogenactivatorinhoibitor-1,PAI-1)的活性能够促进白血病干细胞清除[14]。PAI-1是纤溶系统的一个重要的丝氨酸蛋白酶抑制蛋白，在造血干细胞中，PAI-1能够抑制原蛋白转化酶以及弗林蛋白酶的蛋白水解活性。原蛋白转化酶以及弗林蛋白酶能够促进I型膜金属蛋白酶的活性（membranetype-1metalloprotease，MT1-MMP）[15]，而MT1-MMP则通过破坏细胞周围基质蛋白以及粘附分子，致使造血干细胞脱离干细胞龛，增强造血干细胞运动性[16,17]。抑制TGF-β-iPAI-1信号通路能够增加MT1-MMP依赖的细胞运动性，致使造血干细胞脱离干细胞龛，接受外来刺激[15,18]。因此阻断PAI-1活性，致使骨髓中的CML-LSCs脱离干细胞龛，使得CML-LSCs对TKI敏感，达到清除CML-LSCs以及完全治愈慢性粒细胞白血病的效果。到目前为止，有许多PAI-1抗体在W02011139973、W02015125904、WO2015023752、W02009033095、CN106029884、CN105705520等专利中提及，但一方面它们对PAI-1的结合能力还并不十分理想，另一方面，它们也并没有用来治疗慢性粒细胞白血病。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术的目的在于提供一种新的且具有更高PAI-1结合能力的抗PAI-1抗体，为治愈慢性粒细胞白血病提供一种新可能性。本专利技术提供以下技术方案：一种PAI-1抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区包含3个互补决定区，分别命名为VH-CDR1，VH-CDR2,VH-CDR3；同样地，轻链可变区也包含3个互补决定区，分别命名为VL-CDR1,VL-VDR2,VL-CDR3。所述PAI-1抗体的重链包含如SEQIDNO:1所示的VH-CDR1氨基酸序列，和如SEQIDNO:2所示的VH-CDR2氨基酸序列，和如SEQIDNO:3所示的VH-CDR3氨基酸序列；所述PAI-1抗体的轻链包含如SEQIDNO:4所示的VL-CDR1氨基酸序列，和如SEQIDNO:5所示的VL-CDR2氨基酸序列，和如SEQIDNO:6所示的VL-CDR3氨基酸序列。本专利技术所述PAI-1抗体包含SEQIDNO:7所示的重链可变区和SEQIDNO:8所示的轻链可变区。本专利技术所述PAI-1抗体的重链可变区和轻链可变区均包含框架区，所述抗体轻链可变区进一步包含人源κ、λ链或其变体的轻链框架区。所述抗体重链可变区进一步包含人源IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3或IgG4或其变体的重链框架区。本专利技术所述PAI-1抗体包含恒定区,并且所述恒定区是人源化的，包含选自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的重链恒定区和包含选自kappa或Lambda亚型的轻链恒定区。在一些实施方案中,所述PAI-1抗体以5.7±1.2ng/ml的EC50值与PAI-1相结合。在一些实施方案中，所述PAI-1抗体能够改善CML小鼠脾脏病变情况。在一些实施方案中，所述PAI-1抗体能够延长CML小鼠生存期。本专利技术提供一种治疗慢性粒细胞白血病的方法，其特征在于：将使用TKI抑制剂的与本专利技术所述的抗PAI-1抗体联合应用。本专利技术所述的PAI-1抗体可应用于制备治疗慢性粒细胞白血病的药物中，优选为与TKI抑制剂联合应用。本专利技术所使用的术语“抗体”指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子，涵盖全长抗体(例如，IgG1或IgG4抗体)、其各种功能性片段(例如可仅包含抗原结合部分，如Fab、Fab′、F(ab′)2)。抗体的实例包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、Fab、Fab′、F(ab′)2片段等。术语“单克隆抗体”，指由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的，原核的或噬菌体的克隆细胞株。单克隆抗体或抗原结合片段可以用如杂交瘤技术、重组技术、噬菌体展示技术，合成技术(如CDR-grafting)，或其它现有技术进行重组得到。Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fab′片段”含有一条轻链和一条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分，由此可在两个Fab′片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab′)2分子。“F(ab′)2片段”含有两条轻链和两条重链的VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间的恒定区部分，由此在两条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗PAI-1抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区中VH-CDR1的序列如SEQ ID NO:1所示，VH-CDR2的序列如SEQ ID NO:2所示，VH-CDR3的序列如SEQ ID NO:3所示；轻链可变区中VL-CDR1的序列如SEQ ID NO:4所示，VL-CDR2的序列如SEQ ID NO:5所示，VL-CDR3的序列如SEQ ID NO:6所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗PAI-1抗体，由重链和轻链组成，重链和轻链分别包括可变区和恒定区，其中重链可变区中VH-CDR1的序列如SEQIDNO:1所示，VH-CDR2的序列如SEQIDNO:2所示，VH-CDR3的序列如SEQIDNO:3所示；轻链可变区中VL-CDR1的序列如SEQIDNO:4所示，VL-CDR2的序列如SEQIDNO:5所示，VL-CDR3的序列如SEQIDNO:6所示。


2.根据权利要求1所述的抗PAI-1抗体，其特征在于：所述重链可变区序列为SEQIDNo:7的氨基酸序列；所述轻链可变区序列为SEQIDNo:8的氨基酸序列。


3.根据权利要求1-2任一项所述的抗PAI-1抗体，其特征在于：所述抗体为全长抗体或嵌合抗体、人源化抗体、Fab、Fab′或F(ab′)2片段。


4.根据权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭菲，顾超，
申请(专利权)人：北京岳昊科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11