结合BCMA、NKG2D和CD16的蛋白制造技术

描述了结合BCMA、NKG2D受体和CD16的多特异性结合蛋白，以及用于治疗癌症的药物组合物和治疗方法。

Proteins binding to BCMA, NKG2D and CD16

A multi-specific binding protein combining BCMA, NKG2D receptor and CD16, as well as a pharmaceutical composition and a treatment method for cancer are described.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合BCMA、NKG2D和CD16的蛋白相关申请的交叉引用本申请要求2017年2月10日提交的第62/457,780号美国临时专利申请的权益和优先权，出于所有目的将其全部内容通过引用并入本文。序列表本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交，并且将其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII拷贝创建于2018年2月8日，命名为DFY-003PC_SL.txt，大小为91,310字节。专利
本专利技术涉及结合于B细胞成熟抗原(BCMA)、NKG2D受体和CD16的多特异性结合蛋白。背景尽管在文献中报道了用于治疗该疾病的大量研究努力和科学进展，但癌症仍然是重要的健康问题。血癌和骨髓癌是经常确诊的癌症类型，包括多发性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤。目前针对这些癌症的治疗选择并不是对所有患者都有效和/或可能具有显著的不良副作用。使用现有治疗选择治疗其他类型的癌症仍然具有挑战性。癌症免疫疗法是理想的，因为它们是高度特异性的并且可以利用患者自身的免疫系统促进癌细胞的破坏。融合蛋白，如双特异性T细胞衔接器(engager)是文献中描述的癌症免疫疗法，其结合于肿瘤细胞和T细胞以促进肿瘤细胞的破坏。文献中已经描述了结合于某些肿瘤相关抗原和某些免疫细胞的抗体。参见例如，WO2016/134371和WO2015/095412。自然杀伤(NK)细胞是先天免疫系统的组分，并且占循环淋巴细胞的约15％。NK细胞几乎渗透到所有组织中，原始的特征在于它们能够有效杀死肿瘤细胞而无需事先致敏。活化的NK细胞通过类似于细胞毒性T细胞的方式杀死靶细胞—即通过含有穿孔素和颗粒酶的细胞溶解颗粒以及通过死亡受体途径。活化的NK细胞还分泌炎性细胞因子，例如IFN-γ和趋化因子，其促进其他白细胞向靶组织的募集。NK细胞通过其表面上的各种活化和抑制受体对信号作出反应。例如，当NK细胞遇到健康的自体细胞时，它们的活性通过活化杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)而被抑制。供选择地，当NK细胞遇到外来细胞或癌细胞时，它们通过其活化受体(例如，NKG2D、NCR、DNAM1)被活化。NK细胞也通过其表面上的CD16受体被一些免疫球蛋白的恒定区活化。NK细胞对活化的总体敏感性取决于刺激和抑制信号的总和。BCMA是属于TNF-受体超家族的跨膜蛋白。它特异性结合于肿瘤坏死因子(配体)超家族成员13b(TNFSF13B/TALL-1/BAFF)，导致NF-κB和MAPK8/JNK活化。其表达局限于B细胞谱系，并且已显示对B细胞发育和自身免疫应答是重要的。BCMA还结合于各种TRAF家族成员，因此可能转导细胞存活和增殖的信号。BCMA涉及多种癌症，如多发性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病。本专利技术提供了改善表达BCMA的癌症的治疗的某些优点。专利技术概述本专利技术提供了与癌细胞上的BCMA和自然杀伤细胞上的NKG2D受体和CD16受体结合的多特异性结合蛋白。这样的蛋白可以与多于一种的NK活化受体结合，并且可以阻断天然配体与NKG2D的结合。在某些实施方案中，蛋白可以激动人和其他物种，如啮齿动物和食蟹猴中的NK细胞。下面进一步详细描述本专利技术的各方面和实施方案。因此，本专利技术的一个方面提供了一种蛋白，其包含结合NKG2D的第一抗原结合位点；结合于BCMA的第二抗原结合位点；和足以结合CD16的抗体Fc结构域或其部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。所述抗原结合位点可以各自包含抗体重链可变结构域和抗体轻链可变结构域(例如，如在抗体中排列，或融合在一起以形成scFv)，或所述抗原结合位点中的一个或多个可以是单结构域抗体，例如VHH抗体，如骆驼抗体，或VNAR抗体，如在软骨鱼中发现的那些。在一个实施方案中，例如通过使氨基酸序列与SEQIDNO:1至少90％、至少95％或100％相同，和/或包含与SEQIDNO:1的CDR1(SEQIDNO:64)、CDR2(SEQIDNO:65)和CDR3(SEQIDNO:66)序列相同的氨基酸序列，结合于NKG2D的第一抗原结合位点可以包含与SEQIDNO:1相关的重链可变结构域。供选择地，第一抗原结合位点可以包含与SEQIDNO:41相关的重链可变结构域和与SEQIDNO:42相关的轻链可变结构域。例如，第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQIDNO:41至少90％、至少95％或100％相同，和/或包含与SEQIDNO:41的CDR1(SEQIDNO:67)、CDR2(SEQIDNO:68)和CDR3(SEQIDNO:69)序列相同的氨基酸序列。类似地，第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQIDNO:42至少90％、至少95％或100％相同，和/或包含与SEQIDNO:42的CDR1(SEQIDNO:70)、CDR2(SEQIDNO:71)和CDR3(SEQIDNO:72)序列相同的氨基酸序列。在其他实施方案中，第一抗原结合位点可以包含与SEQIDNO:43相关的重链可变结构域和与SEQIDNO:44相关的轻链可变结构域。例如，第一抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQIDNO:43至少90％、至少95％或100％相同，和/或包含与SEQIDNO:43的CDR1(SEQIDNO:73)、CDR2(SEQIDNO:74)和CDR3(SEQIDNO:75)序列相同的氨基酸序列。类似地，第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQIDNO:44至少90％、至少95％或100％相同，和/或包含与SEQIDNO:44的CDR1(SEQIDNO:76)、CDR2(SEQIDNO:77)和CDR3(SEQIDNO:78)序列相同的氨基酸序列。供选择地，例如通过分别使氨基酸序列与SEQIDNO:45和SEQIDNO:46至少90％、至少95％或100％相同，第一抗原结合位点可以包含与SEQIDNO:45相关的重链可变结构域和与SEQIDNO:46相关的轻链可变结构域。在另一个实施方案中，例如通过使氨基酸序列分别与SEQIDNO:47和SEQIDNO:48至少90％、至少95％或100％相同，第一抗原结合位点可以包含与SEQIDNO:47相关的重链可变结构域和与SEQIDNO:48相关的轻链可变结构域。第二抗原结合位点可以任选地包含与SEQIDNO:49相关的重链可变结构域和与SEQIDNO:53或SEQIDNO:54相关的轻链可变结构域。例如，第二抗原结合位点的重链可变结构域可以与SEQIDNO:49至少90％、至少95％或100％相同，和/或包含与SEQIDNO:49的CDR1(SEQIDNO:50)、CDR2(SEQIDNO:51)和CDR3(SEQIDNO:52)序列相同的氨基酸序列。类似地，第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQIDNO:53至少90％、至少95％或100％相同和/或包含与SEQIDNO:53的CDR1(SEQIDNO:55)、CDR2(SEQIDNO:56)和CDR3(SEQIDNO:57)序列相同的氨基酸序列。供选择地，第二抗原结合位点的轻链可变结构域可以与SEQIDNO:本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白，其包含：/n(a)结合NKG2D的第一抗原结合位点；/n(b)结合BCMA的第二抗原结合位点；和/n(c)足以结合CD16的抗体Fc结构域或其部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170210 US 62/457,7801.一种蛋白，其包含：
(a)结合NKG2D的第一抗原结合位点；
(b)结合BCMA的第二抗原结合位点；和
(c)足以结合CD16的抗体Fc结构域或其部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。


2.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点结合于人、非人灵长类动物和啮齿动物中的NKG2D。


3.根据权利要求1或2所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。


4.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述重链可变结构域和所述轻链可变结构域存在于相同的多肽上。


5.根据权利要求3-4中任一项所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。


6.根据权利要求5所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域存在于相同的多肽上。


7.根据权利要求5或6所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点的轻链可变结构域的氨基酸序列与所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域的氨基酸序列相同。


8.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:1至少90％相同的重链可变结构域。


9.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:41至少90％相同的重链可变结构域和与SEQIDNO:42至少90％相同的轻链可变结构域。


10.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:43至少90％相同的重链可变结构域和与SEQIDNO:44至少90％相同的轻链可变结构域。


11.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:45至少90％相同的重链可变结构域和与SEQIDNO:46至少90％相同的轻链可变结构域。


12.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:47至少90％相同的重链可变结构域和与SEQIDNO:48至少90％相同的轻链可变结构域。


13.根据权利要求1或2所述的蛋白，其中所述第一抗原结合位点是单结构域抗体。


14.根据权利要求13所述的蛋白，其中所述单结构域抗体是VHH片段或VNAR片段。


15.根据权利要求1-2或13-14中任一项所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变结构域和轻链可变结构域。


16.根据权利要求15所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域和轻链可变结构域存在于相同的多肽上。


17.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含与SEQIDNO:49至少90％相同的氨基酸序列，并且所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含与SEQIDNO:53或SEQIDNO:54至少90％相同的氨基酸序列。


18.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点的重链可变结构域包含含有以下的氨基酸序列：
与SEQIDNO:50的氨基酸序列相同的重链CDR1序列；
与SEQIDNO:51的氨基酸序列相同的重链CDR2序列；和
与SEQIDNO:52的氨基酸序列相同的重链CDR3序列。


19.根据权利要求18所述的蛋白，其中所述第二抗原结合位点的轻链可变结构域包含含有以下的氨基酸序列：
与SEQIDNO:55的氨基酸序列相同的轻链CDR1序列；
与SEQIDNO:56的氨基酸序列相同的轻链CDR2序列；和
与SEQIDNO:57或SEQIDNO:57的氨基酸序列相同的轻链CDR3序列。


20.根据权利要求1-16中任一...

【专利技术属性】
技术研发人员：格雷戈里·P·张，安·F·张，威廉·哈尼，布拉德利·M·伦德，比昂卡·普林茨，
申请(专利权)人：蜻蜓治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US