结合NKG2D、CD16以及FLT3的蛋白质制造技术

描述了结合NKG2D受体、CD16以及肿瘤相关抗原FLT3的多特异性结合蛋白，以及用于治疗癌症的药物组合物和治疗方法。

Proteins binding to NKG2D, CD16 and FLT3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合NKG2D、CD16以及FLT3的蛋白质相关申请的交叉引用本申请要求2017年7月31日提交的美国临时专利申请号62/539,421的权益和优先权；所述临时专利申请的内容出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。序列表本申请含有序列表，所述序列表已以ASCII格式以电子方式提交并且以全文引用的方式并入本文中。所述ASCII副本创建于2018年7月30日，名称为DFY-027WO_SL.txt并且大小为103,731字节。
本专利技术涉及结合于NKG2D、CD16以及肿瘤相关抗原FLT3的多特异性结合蛋白。
技术介绍
尽管文献中针对治疗癌症报道了大量研究工作和科学进展，但此疾病仍旧为重要健康问题。血液和骨髓癌为频繁被诊断的癌症类型，包括多发性骨髓瘤、白血病以及淋巴瘤。这些癌症的当前治疗选择并不对所有患者有效并且/或者可能具有大量有害副作用。其他类型的癌症也仍然对使用现有治疗选择的治疗形成挑战。癌症免疫疗法为所需的，因为它们具高度特异性并且可使用患者自己的免疫系统促成癌细胞破坏。诸如双特异性T细胞衔接者(T-cellengager)等融合蛋白为文献中所描述的癌症免疫疗法，所述融合蛋白结合于肿瘤细胞和T细胞以促成肿瘤细胞破坏。文献中已描述结合于某些肿瘤相关抗原和某些免疫细胞的抗体。参见例如WO2016/134371和WO2015/095412。自然杀手(NK)细胞为先天免疫系统的组分并且构成循环淋巴细胞的约15％。NK细胞实际上浸润所有组织并且最初以它们在无需事先致敏的情况下有效杀死肿瘤细胞的能力为特征。活化NK细胞通过类似于细胞毒性T细胞的手段(即，经由含有穿孔素和颗粒酶的细胞溶解颗粒以及经由死亡受体路径)杀死靶细胞。活化NK细胞还分泌炎性细胞因子(诸如IFN-γ)以及促进其他白细胞招募至靶组织的趋化因子。NK细胞通过多种活化以及它们表面的抑制受体对信号作出反应。举例来说，当NK细胞遇到健康的自身细胞时，它们的活性因杀手细胞免疫球蛋白样受体(KIR)的活化而受到抑制。或者，当NK细胞遇到外来细胞或癌细胞时，它们经由它们的活化受体(例如NKG2D、NCR、DNAM1)而活化。NK细胞还由一些免疫球蛋白的恒定区通过它们表面的CD16受体活化。NK细胞对活化的总灵敏度取决于刺激信号与抑制信号的总和。FMS样酪氨酸激酶-3(FLT3)为在多能祖细胞和普通淋巴祖细胞中表达的受体酪氨酸激酶，对造血和免疫系统的发育来说为重要的。通过FLT3进行信号传导在细胞存活、增殖以及分化中起重要作用。FLT3受体的突变可能导致产生白血病，例如急性骨髓性白血病、T细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病以及毛细胞白血病。FLT3的内部串联重复(FLT3-ITD)为与急性骨髓性白血病(AML)相关的最常见突变。
技术实现思路
本专利技术提供多特异性结合蛋白，所述多特异性结合蛋白结合于自然杀手细胞上的NKG2D受体和CD16受体，以及肿瘤相关抗原FLT3。此类蛋白质可接合超过一种NK活化受体，并且可阻断天然配体与NKG2D的结合。在某些实施方案中，所述蛋白质可激动人中的NK细胞。在一些实施方案中，所述蛋白质可激动人中以及诸如啮齿动物和食蟹猴等其他物种中的NK细胞。下文更详细地描述了本专利技术的各个方面和实施方案。因此，本专利技术的一个方面提供一种蛋白质，所述蛋白质合并有第一抗原结合位点，所述第一抗原结合位点结合NKG2D；第二抗原结合位点，所述第二抗原结合位点结合肿瘤相关抗原FLT3；以及抗体Fc结构域、其足以结合CD16的部分或结合CD16的第三抗原结合位点。抗原结合位点可各自合并有抗体重链可变域和抗体轻链可变域(例如如在抗体中那样排列，或融合在一起以形成scFv)，或抗原结合位点中的一者或多者可为单域抗体，诸如VHH抗体，如骆驼抗体；或VNAR抗体，如在软骨鱼中发现的那些VNAR抗体。在一个方面中，本专利技术提供多特异性结合蛋白，所述多特异性结合蛋白结合于自然杀手细胞上的NKG2D受体和CD16受体，以及肿瘤相关抗原FLT3。NKG2D结合位点包括与选自以下的氨基酸序列至少90％同一的重链可变域：SEQIDNO:1、SEQIDNO:41、SEQIDNO:49、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:69、SEQIDNO:77、SEQIDNO:85以及SEQIDNO:93。在一些实施方案中，结合于NKG2D的第一抗原结合位点可合并有与SEQIDNO:1有关的重链可变域，诸如通过具有与SEQIDNO:1至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一的氨基酸序列并且/或者合并有与SEQIDNO:1的CDR1(SEQIDNO:105)、CDR2(SEQIDNO:106)以及CDR3(SEQIDNO:107)序列相同的氨基酸序列。与SEQIDNO:1有关的重链可变域可与多种轻链可变域连接以形成NKG2D结合位点。举例来说，合并有与SEQIDNO:1有关的重链可变域的第一抗原结合位点可还合并有选自与以下有关的序列中的任一者的轻链可变域：SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36以及40。举例来说，第一抗原结合位点合并有氨基酸序列与SEQIDNO:1至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一的重链可变域以及氨基酸序列与选自以下的序列中的任一者至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一的轻链可变域：SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36以及40。或者，第一抗原结合位点可合并有与SEQIDNO:41有关的重链可变域以及与SEQIDNO:42有关的轻链可变域。举例来说，第一抗原结合位点的重链可变域可与SEQIDNO:41至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一，并且/或者合并有与SEQIDNO:41的CDR1(SEQIDNO:43)、CDR2(SEQIDNO:44)以及CDR3(SEQIDNO:45)序列相同的氨基酸序列。类似地，第二抗原结合位点的轻链可变域可与SEQIDNO:42至少90％(例如90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％)同一，并且/或者合并有与SEQIDNO:42的CDR1(SEQIDNO:46)、CDR2(SEQIDNO:47)以及CDR3(SEQIDNO:48)序列相同的氨基酸序列。在其他实施方案中，第一抗原结合位点可合并有与SEQIDNO:49有关的重链可变域以及与SEQIDNO:50有关的轻链可变域。举例来说，第一抗原结合位点的重链本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白质，所述蛋白质包含：/n(a)第一抗原结合位点，所述第一抗原结合位点结合NKG2D；/n(b)第二抗原结合位点，所述第二抗原结合位点结合FLT3；以及/n(c)抗体Fc结构域或其足以结合CD16的部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170731 US 62/539,4211.一种蛋白质，所述蛋白质包含：
(a)第一抗原结合位点，所述第一抗原结合位点结合NKG2D；
(b)第二抗原结合位点，所述第二抗原结合位点结合FLT3；以及
(c)抗体Fc结构域或其足以结合CD16的部分，或结合CD16的第三抗原结合位点。


2.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点结合于人中的NKG2D。


3.如权利要求1或2所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域。


4.根据权利要求3所述的蛋白质，其中所述重链可变域和所述轻链可变域存在于相同多肽上。


5.根据权利要求3或4所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点包含重链可变域和轻链可变域。


6.根据权利要求5所述的蛋白质，其中所述第二抗原结合位点的所述重链可变域和所述轻链可变域存在于相同多肽上。


7.根据权利要求5或6所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点的所述轻链可变域具有与所述第二抗原结合位点的所述轻链可变域的氨基酸序列相同的氨基酸序列。


8.根据前述权利要求中任一项的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与选自以下的氨基酸序列至少90％同一的重链可变域：SEQIDNO:1、SEQIDNO:41、SEQIDNO:49、SEQIDNO:57、SEQIDNO:59、SEQIDNO:61、SEQIDNO:69、SEQIDNO:77、SEQIDNO:85以及SEQIDNO:93。


9.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:41至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:42至少90％同一的轻链可变域。


10.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:49至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:50至少90％同一的轻链可变域。


11.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:57至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:58至少90％同一的轻链可变域。


12.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:59至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:60至少90％同一的轻链可变域。


13.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:61至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:62至少90％同一的轻链可变域。


14.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:69至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:70至少90％同一的轻链可变域。


15.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:77至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:78至少90％同一的轻链可变域。


16.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:85至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:86至少90％同一的轻链可变域。


17.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:93至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:94至少90％同一的轻链可变域。


18.根据权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述第一抗原结合位点包含与SEQIDNO:101至少90％同一的重链可变域以及与SEQIDNO:102至少90％同一的轻链可变域。

【专利技术属性】
技术研发人员：格雷戈里·P·张，安·F·张，威廉·哈尼，布拉德利·M·伦德，比昂卡·普林茨，
申请(专利权)人：蜻蜓治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US