本发明专利技术提供了一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法，属于基因检测技术领域，本发明专利技术所揭示的引物探针组合物中第一引物探针预混液含有SEQ ID NO.1～4所示核苷酸序列的引物与探针，第二引物探针预混液含有SEQ ID NO.5～8所示核苷酸序列的引物与探针，第三引物探针预混液含有SEQ ID NO.9～12所示核苷酸序列的引物与探针。本发明专利技术所揭示的引物探针组合物通过荧光定量PCR扩增，能够有效地区分CYP2C19*2、CYP2C19*3与CYP2C19*17这三种基因分型，具有特异性强、灵敏度高、操作简单快速等优点，并能够缩短检测时间并降低对CYP2C19基因分型检测的检测成本，从而能够为个体化用药提供准确的依据，提高了基因分型检测的准确性。
【技术实现步骤摘要】
用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法
本专利技术涉及基因检测
，尤其涉及一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法。
技术介绍
CYP2C19是细胞色素P450(CytochromeP450,CYP)酶系的重要一员。P450同功酶也称药酶，是由一系列结构和功能相关的酶组成的酶家族，是体内药物代谢的主要酶系。研究发现CYP2C19可影响到氯吡格雷、奥美拉唑、地西泮、苯妥英钠等许多重要临床应用药物的代谢，而其基因多态性是引起个体间和种族间对同一药物表现出不同代谢能力的原因之一。2010年美国FDA要求氯吡格雷药物标签上注明CYP2C19与疗效的关系，并建议使用前检测CYP2C19基因型。编码正常酶活性的基因是CYP2C19*1型。CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型是中国人群中较常见的等位基因型。其中CYP2C19*2型和CYP2C19*3型可引起CYP2C19基因编码的酶活性丧失，代谢底物的能力减弱，使血药浓度增高，从而引起与血药浓度相关的药物不良反应，CYP2C19*17型可引起CYP2C19基因编码的酶活性增强，代谢底物的能力增强。对于药物代谢慢的人群，长期按正常剂量服用，就会出现严重毒副作用：主要是肝损害、造血系统损害、中枢神经系统损害等，严重时可导致死亡。根据CYP2C19基因型改变而引起酶代谢活性的改变，可将人群根据酶的代谢能力分为4类：超强代谢型，强代谢型，中间代谢型和弱代谢型。由于病人普遍存在动脉粥样硬化，尤其是支架内血栓的风险，正在或考虑接受抗血小板治疗(如氯吡格雷)。因此检查CYP2C19基因SNP类型，将有助于选择合适的抗血小板治疗方案。目前检测基因多态性的方法有直接测序法、荧光定量PCR法和基因芯片法。直接测序法耗时长、敏感性低，费用高，因此在适用用于医院等场所进行使用。基因芯片法的基因测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。基因芯片法检测基因多态性不仅制备成本昂贵且所依赖的检测仪器的成本更加不菲，同时利用基因芯片测试CYP2C19基因分型时也需要耗时至少8小时，且容易存在容易出现假阳性的缺陷，即将阴性样本误判为阳性样本。而荧光定量PCR法(qPCR)是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。因此，相对于上述直接测序法与基因芯片法对CYP2C19基因位点是否发生突变(即基因分型)进行基因测序的过程中，荧光定量PCR法对CYP2C19基因位点的多态性检测具有特异性强、检测成本低廉、灵敏度高、准确性强等诸多优点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于揭示一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物、试剂、试剂盒及检测方法，用于实现对CYP2C19位点的基因分型CYP2C19*2，CYP2C19*3及CYP2C19*17实现快速检测，并降低检测成本与检测时间，从而为不同人群由于CYP2C19位点的基因分型所存在的差异性，从而为接受抗血小板治疗所使用的处方药物(例如氯吡格雷)的服用量提供准确依据，提高接受抗血小板治疗的治疗效果。为实现上述第一专利技术目的，本专利技术提供了一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物，其特征在于，包括：用于检测CYP2C19*2并由引物L-1F、引物L-1R、野生探针L-1W、突变探针L-1M所组成的第一引物探针预混液；用于检测CYP2C19*3并由引物L-2F、引物L-2R、野生探针L-2W、突变探针L-2M所组成的第二引物探针预混液；用于检测CYP2C19*17并由引物L-3F、引物L-3R、野生探针L-3W、突变探针L-3M所组成的第三引物探针预混液；所述引物L-1F具有如SEQIDNO.1所示核苷酸序列；所述引物L-1R具有如SEQIDNO.2所示核苷酸序列；所述野生探针L-1W具有如SEQIDNO.3所示核苷酸序列；所述突变探针L-1M具有如SEQIDNO.4所示核苷酸序列；所述引物L-2F具有如SEQIDNO.5所示核苷酸序列；所述引物L-2R具有如SEQIDNO.6所示核苷酸序列；所述野生探针L-2W具有如SEQIDNO.7所示核苷酸序列；所述突变探针L-2M具有如SEQIDNO.8所示核苷酸序列；所述引物L-3F具有如SEQIDNO.9所示核苷酸序列；所述引物L-3R具有如SEQIDNO.10所示核苷酸序列；所述野生探针L-3W具有如SEQIDNO.11所示核苷酸序列；所述突变探针L-3M具有如SEQIDNO.12所示核苷酸序列。作为本专利技术的进一步改进，所述野生探针L-1W、突变探针L-1M、野生探针L-2W、突变探针L-2M、野生探针L-3W、突变探针L-3M的3’端标记有荧光淬灭基团，所述野生探针L-1W的5’端标记有荧光报告基团。作为本专利技术的进一步改进，所述荧光淬灭基团选自DABCYL、MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种。另一方面，本专利技术还提出了一种用于检测人CYP2C19基因分型的试剂，所述试剂包括如上述任一项专利技术创造所揭示的引物探针组合物。另一方面，本专利技术还提出了一种用于检测人CYP2C19基因分型的试剂盒，所述试剂盒包括如上述第二个专利技术所揭示的试剂。作为本专利技术的进一步改进，所述试剂盒还包括：内参试剂、Taq酶、扩增预混液、阴性质控样品及阳性质控样品；所述阴性质控样品为TE缓冲液，阳性质控样品为杂合质粒和β-globin质粒的混合液，所述内参试剂包括：内参引物M-26F、内参引物M-26R、内参探针M-01D；所述内参引物M-26F具有如SEQIDNO.13所示核苷酸序列；所述内参引物M-26R具有如SEQIDNO.14所示核苷酸序列；所述内参探针M-01D具有如SEQIDNO.15所示核苷酸序列；作为本专利技术的进一步改进，所述扩增预混液由PCR缓冲液、dNTPs和MgCl2组成，所述MgCl2浓度为2.5～6mM，所述dNTPs浓度为0.1～0.8mM，所述Taq酶浓度为8～12U/μl。作为本专利技术的进一步改进，所述杂合质粒由CYP2C19*2质粒、CYP2C19*3质粒及CYP2C19*17质粒组成；所述CYP2C19*2质粒具SEQIDNO.16所示核苷酸序列；所述CYP2C19*3质粒具SEQIDNO.17所示核苷酸序列；所述CYP2C19*17质粒具SEQIDNO.18所示核苷酸序列；所述β-globin质粒具SEQIDNO.19所示核苷酸序列。最后，本专利技术还揭示了一种检测人CYP2C19基因分型的检测方法，应用如上述第一个专利技术所揭示的引物探针组合物或者如上述第二个专利技术所述的试本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物，其特征在于，包括：用于检测CYP2C19*2并由引物L‑1F、引物L‑1R、野生探针L‑1W、突变探针L‑1M所组成的第一引物探针预混液；用于检测CYP2C19*3并由引物L‑2F、引物L‑2R、野生探针L‑2W、突变探针L‑2M所组成的第二引物探针预混液；用于检测CYP2C19*17并由引物L‑3F、引物L‑3R、野生探针L‑3W、突变探针L‑3M所组成的第三引物探针预混液；所述引物L‑1F具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；所述引物L‑1R具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；所述野生探针L‑1W具有如SEQ ID NO.3所示核苷酸序列；所述突变探针L‑1M具有如SEQ ID NO.4所示核苷酸序列；所述引物L‑2F具有如SEQ ID NO.5所示核苷酸序列；所述引物L‑2R具有如SEQ ID NO.6所示核苷酸序列；所述野生探针L‑2W具有如SEQ ID NO.7所示核苷酸序列；所述突变探针L‑2M具有如SEQ ID NO.8所示核苷酸序列；所述引物L‑3F具有如SEQ ID NO.9所示核苷酸序列；所述引物L‑3R具有如SEQ ID NO.10所示核苷酸序列；所述野生探针L‑3W具有如SEQ ID NO.11所示核苷酸序列；所述突变探针L‑3M具有如SEQ ID NO.12所示核苷酸序列。...
【技术特征摘要】
1.一种用于检测人CYP2C19基因分型的引物探针组合物，其特征在于，包括：用于检测CYP2C19*2并由引物L-1F、引物L-1R、野生探针L-1W、突变探针L-1M所组成的第一引物探针预混液；用于检测CYP2C19*3并由引物L-2F、引物L-2R、野生探针L-2W、突变探针L-2M所组成的第二引物探针预混液；用于检测CYP2C19*17并由引物L-3F、引物L-3R、野生探针L-3W、突变探针L-3M所组成的第三引物探针预混液；所述引物L-1F具有如SEQIDNO.1所示核苷酸序列；所述引物L-1R具有如SEQIDNO.2所示核苷酸序列；所述野生探针L-1W具有如SEQIDNO.3所示核苷酸序列；所述突变探针L-1M具有如SEQIDNO.4所示核苷酸序列；所述引物L-2F具有如SEQIDNO.5所示核苷酸序列；所述引物L-2R具有如SEQIDNO.6所示核苷酸序列；所述野生探针L-2W具有如SEQIDNO.7所示核苷酸序列；所述突变探针L-2M具有如SEQIDNO.8所示核苷酸序列；所述引物L-3F具有如SEQIDNO.9所示核苷酸序列；所述引物L-3R具有如SEQIDNO.10所示核苷酸序列；所述野生探针L-3W具有如SEQIDNO.11所示核苷酸序列；所述突变探针L-3M具有如SEQIDNO.12所示核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述野生探针L-1W、突变探针L-1M、野生探针L-2W、突变探针L-2M、野生探针L-3W、突变探针L-3M的3’端标记有荧光淬灭基团，所述野生探针L-1W的5’端标记有荧光报告基团。3.根据权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述荧光淬灭基团选自DABCYL、MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种；所述荧光报告基团选自FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种。4.一种用于检测人CYP...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛青松，姚鲁帅，
申请(专利权)人：无锡市申瑞生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。