一种与心血管疾病相关的MTHFR基因分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与心血管疾病相关的MTHFR基因分子标记、检测引物及其应用，属于医学分子生物学领域。所述MTHFR基因第1298位是A或C，其中，AC基因型或CC基因型患心血管疾病的风险高于AA基因型。利用本发明专利技术的分子标记可以进行心血管疾病的辅助诊断，对后续临床治疗具有指导意义。

A Molecular Marker of MTHFR Gene Associated with Cardiovascular Diseases and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种与心血管疾病相关的MTHFR基因分子标记及其应用
本专利技术属于医学分子生物学领域，具体地，涉及一种与心血管疾病相关的MTHFR基因分子标记及其应用。
技术介绍
随着老年人口不断增加，心血管疾病(Cardiovasculardisease，CVD)已成为老年病死率最高的疾病，以往认为年龄为心血管病高危因子；近年来越来越多的研究着重于基因对于心血管疾病易感性的个体差异。心血管疾病包括冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronaryatheroscleroticheartdisease，CAD)、原发性高血压(Essentialhypertension，EH)、动脉硬化等，它是由遗传和环境因素共同作用所致的复杂疾病，其发病过程与多基因之间和基因-环境之间的相互作用相关。环境因素包括性别、年龄、高血压、高血脂、吸烟及糖尿病等；基因突变和表观遗传学改变在疾病的发生发展中也起着重要的作用。然而，与心血管疾病相关的基因突变及其类型仍鲜有报道。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，专利技术人通过收集心血管疾病患者血清检测MTHFR基因突变及相关血清学标志物Hcy，并收集基线临床资料，探讨心血管疾病与MTHFR基因突变、血浆Hcy水平，以及与基线临床资料的相关性，出乎意料地，MTHFR基因第1298位是A或C，该多态性与患心血管疾病的风险显著相关，从而完成本专利技术。本专利技术的第一方面提供一种与心血管疾病相关的MTHFR基因分子标记，所述MTHFR基因第1298位是A或C。MTHFR是同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)代谢关键酶之一。MTHFR基因的突变会导致血浆Hcy水平增高，诱导心血管疾病的发生，Hcy主要通过促进血管内皮细胞损伤、血管平滑肌细胞增殖、脂质过氧化和血液凝固性增高等机制，诱导动脉粥样硬化的发生。在本专利技术中，AC基因型或CC基因型患心血管疾病的风险高于AA基因型，其中，纯化突变型即CC基因型患心血管疾病的风险最高。进一步地，AC基因型或CC基因型Hcy血清水平显著高于AA基因型，其中其中，纯化突变型即CC基因型Hcy血清水平最高。在本专利技术中，所述心血管疾病选自冠状动脉粥样硬化性心脏病、原发性高血压、冠心病中。本专利技术第二方面提供用于检测本专利技术第一方面所述分子标记的试剂在制备用于预测和诊断心血管疾病的试剂盒中的应用。在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂为能够扩增所述分子标记的引物组合。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述引物组合包括具有SEQIDNO.1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQIDNO.2所示核苷酸序列的下游引物。进一步地，利用所述试剂盒检测对象中MTHFR基因基因型，当待测对象为AC基因型或CC基因型时，表示患心血管疾病的风险高。其中，当待测对象为CC基因型时，表示患心血管疾病的风险高。本专利技术第三方面提供一种用于预测和诊断心血管疾病的试剂盒，包括具有SEQIDNO.1所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQIDNO.2所示核苷酸序列的下游引物。本专利技术第四方面提供一种突变的MTHFR基因，其特征在于，所述突变的MTHFR基因第1298位是由A突变为C。本专利技术的有益效果相对于现有技术，本专利技术提供一种全新的用于辅助诊断心血管疾病患病风险的分子标记，对后续临床治疗具有重要价值。附图说明图1示出了TG、TC、HDL、LDL、LP(a)和Hcy的ROC曲线。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。实施例以下例子在此用于示范本专利技术的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表专利技术人发现的可以用于实施本专利技术的技术，因此可以视为实施本专利技术的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本专利技术的精神或范围。除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本专利技术所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的专利技术的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。实施例11对象与方法1.1对象选择2015年10月至2016年3月在贵州省人民医院就诊并符合心血管疾病诊断标准的患者108例，作为病例组。选择同时间在本院做体检的年龄相仿的正常人群105例，作为对照组。病例组的疾病类型包括冠状动脉粥样硬化性心脏病、原发性高血压；分别经过血管造影术确诊为冠心病、按照2005年中国高血压防治指南制定的高血压诊断标准并排除继发性高血压确诊为原发性高血压。均获得研究对象或亲属的知情同意。对病例及对照组采集全血5ml，EDTA抗凝，-20℃保存。1.2临床资料收集采用问卷调查方式并结合病历资料收集所有研究对象的基线临床资料(为第一次入院记录)：姓名、性别、年龄、种族、吸烟史(吸烟定义为每天均吸烟且连续超过一年)、甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(totalcholesterol，TC)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol，LDL-C)、载脂蛋白A(apolipoproteinA，ApoA)、载脂蛋白B(apolipoproteinB，ApoB)、脂蛋白(a)[lipoproteinalpha，LP(a)]。1.3主要试剂和仪器ABI2400型PCR仪、血液基因组DNA快速抽提试剂盒(中国生工生物工程股份有限公司)、LowMWDNAMarker-A(中国生工生物工程股份有限公司)、4SGreenNucleicAcidStain核酸染色剂、琼脂糖H等。引物由上海生工生物工程股份有限公司设计合成。1.4方法1.4.1基因组DNA提取及检测取冰冻静脉血于37℃水浴箱溶解，按血液基因组DNA快速抽提试剂盒步骤提取基因组DNA。采用微量分光光度计测定DNA浓度及纯度，用OD260/OD280估算核酸纯度，标本纯度在1.8～2.0之间，可用于后续实验。1.4.2PCR扩增及产物检测引物由上海生工生物公司设计并合成，运用聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)扩增MTHFRA1298C位点的目的片段。位点的扩增引物序列见表1。表1MTHFRA1298C位点的扩增引物序列PCR反应体系为50μl，包括25μlTaqPCRMasterMix，各2μl正反向引物(10umol/L)，1μl模板DNA(100ng/μl)，其余水补足。PCR反应程序如下：94℃预变性4min；进入循环，94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次；72℃终延伸10min；4℃冷却保存。位点的PCR扩增产物用2％的琼脂糖凝胶电泳分离检测，4SGreen染色，用紫外凝胶成像系统检测产物片段大小及特异性。1.4.3PCR-DNA测序技术基因测序采用一代测序法进行正向测序，由上海生工生物工程股份有限公司完成。1.5统计学分析用群体遗传性Hardy-weinb本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与心血管疾病相关的

【技术特征摘要】
1.一种与心血管疾病相关的MTHFR基因分子标记，其特征在于，所述MTHFR基因第1298位是A或C。2.根据权利要求1所述的MTHFR基因分子标记，其特征在于，AC基因型或CC基因型患心血管疾病的风险高于AA基因型。3.根据权利要求1或2所述的分子标记，其特征在于，所述心血管疾病选自冠状动脉粥样硬化性心脏病、原发性高血压、冠心病中。4.用于检测权利要求1所述分子标记的试剂在制备用于预测和诊断心血管疾病的试剂盒中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂为能够扩增所述分子标记的引物组合。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述引物组合包括具有SEQIDNO.1所示核苷酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄山，冯勤颖，吴娴，
申请(专利权)人：贵州省临床检验中心，
类型：发明
国别省市：贵州,52