本发明专利技术涉及活性形式的人源半胱天冬酶蛋白，优选地为人源半胱天冬酶‑4或半胱天冬酶‑1，或者由人源半胱天冬酶蛋白的同源基因(优选地为人源半胱天冬酶‑4(例如鼠源半胱天冬酶‑11蛋白)的同源基因)编码的活性形式的蛋白质在诊断和/或预后和/或监控肿瘤(特别是肺癌)的进程的方法中作为生物标记物的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及活性形式的人源半胱天冬酶蛋白，优选地为人源半胱天冬酶-4或半胱天冬酶-1，或者由人源半胱天冬酶蛋白的同源基因(优选地为人源半胱天冬酶-4(例如鼠源半胱天冬酶-11蛋白)的同源基因)编码的活性形式的蛋白质在诊断和/或预后和/或监控肿瘤(特别是肺癌)的进程的方法中作为生物标记物的用途。
技术介绍
肺癌为工业化国家中的主要死因之一，其以不良预后和低存活率为特征(Jett等人.，1983；Pinto等人.，2011)。肺癌的危险因素之一为暴露于(吸入)致癌物(Valavanidis等人.，2008)，虽然还没有明确定义肿瘤生长的细胞和分子机制。肿瘤性疾病的发生/发展与免疫系统之间的严格相关性(Coussens等人.，2013；Pinto等人.，2011；Zitvogel等人.，2012)是近年来科学的兴趣。慢性炎症是许多呼吸系统疾病(包括肺癌)的共同特征。众所周知，肿瘤发展/进程与促进肿瘤细胞的生长超出抗-肿瘤免疫控制的免疫抑制环境有关(Coussens等人.，2013)。尽管有经典的化疗，目前似乎在治疗肿瘤中发挥着越来越重要的作用的概念是介入，尤其是对肿瘤微环境的免疫系统进行“药理操纵”。迄今为止，目前最广泛使用的免疫治疗由白细胞激活以便获得抗肿瘤免疫应答(Coussens等人.，2013)组成。然而，为肿瘤生长基础的慢性炎症中所涉及的特异性分子的识别和细胞机制似乎在鉴定能够调控肿瘤生长的药物靶标方面具有最大的学术影响。肺上皮细胞、巨噬细胞(MФ)和组织树突细胞(DC)是防御外部攻击的第一道防线，且它们负责随后的适应性免疫应答(Pinto et等人.，2011)。对这些细胞的持续损害促进和维持了以释放称为警报器的分子(包含IL-1α、IL-1β、高迁移率族蛋白b1(HMGB1))为特征的慢性炎症应答(Paul-Clark等人.，2012)。该警报器的合成/释放由称为炎性体的多-蛋白系统根据半胱天冬酶-1依赖性经典通路(Latz等人.，2013)和半胱天冬酶-11依赖性非经典通路(Kayagaki等人.，2013)精确调控。半胱天冬酶-1激活将IL-1β前体和IL-18前体转变为它们的活性形式(Lamkanfi和Dixit，2012)。相反地，半胱天冬酶-11促进IL-1α和HMGB1的释放(Ng和Monack，2013)。半胱天冬酶-1和半胱天冬酶-11均能够诱导细胞死亡(pyropoptosis)，不同于细胞凋亡的细胞死亡，因为其诱导了在肿瘤环境中能促进有利于肿瘤生长的免疫抑制状态的促炎症应答(Lamkanfi和Dixit，2012)。炎性体络合物受称为Nod样受体(NLR)和更一般地称为病原体识别受体(PRR)的胞浆蛋白的活性调控，该病原体识别受体(PRR)能够识别在半胱天冬酶-1依赖性通路的上游发挥作用的外源性配体(病原体相关的分子模式：PAMP)和内源性配体(危险相关的分子模式：DAMP)(Caffrey和Fitzgerald，2012)。迄今为止，识别出22种NLR。虽然胞浆内的NLRP3受体确实是迄今为止研究最深入的，但其在癌症中的作用似乎仍存在争议(Zitvogel等.，2012)。事实上，NLRP3在结肠癌中发挥着保护作用，因为其基因缺失促进了与结肠上皮细胞中的更高水平的慢性炎症相关的肿瘤生长(Allen等.，2010)。而且，NLRP3似乎对某些经典的化疗药物(如阿霉素和5-氟尿嘧啶)的活性是必不可少的(Ghiringhelli等.，2009)。形成鲜明对比的是，在肺转移和纤维内瘤的鼠源模型中，NLRP3激活促进了肿瘤生长(Chow等.，2012a)，从而促进募集具有免疫抑制活性的细胞，如髓源性抑制细胞(MDSC)，该髓源性抑制细胞(MDSC)不仅抑制细胞毒性T淋巴细胞(细胞毒性T淋巴细胞:CTL)活性，而且还抑制天然杀伤细胞(NK)。另外，尽管对肿瘤生长是非必要的(Chow等.，2012b)，NLRP3似乎参与由石棉和二氧化硅(间皮瘤的催动因素)诱导的肺部炎症(Dostert等.，2008)。半胱天冬酶-11，人源半胱天冬酶-4的鼠源类似物，是激活非经典炎性体通路的关键性酶(Ng和Monack，2013)。由于促炎性条件和尤其是通过致病性感染的细胞坏死，这种酶能够诱导成熟形式的IL-1α的水解，并诱导细胞外基质中HMGB1的释放(Ng和Monack，2013)。迄今为止，在文献中有所描述的是，在细菌感染期间，通过诱导包含TIR-结构域的适配蛋白的干扰素-β(TRIF)转导通路以I型干扰素依赖性方式激活半胱天冬酶-11，该转导通路构成激活某些Toll样受体(TLR)(如TLR4和TLR3)的基础(Bortoluci和Medzhitov，2010)。鼠源半胱天冬酶-11和类似的人源半胱天冬酶-4在癌症(特别是肺癌)中的作用仍然是完全未知的。因此，根据日益新兴的文献，炎性体生物学的几个方面仍未经探索，尤其是在肺肿瘤学领域，在肺肿瘤学领域中慢性炎症似乎是肿瘤生长的催动因素(Coussens等人.，2013)。专利申请WO2008/009028涉及用于确定患有肺腺癌的受试者的预后的方法，该方法包括对几种细胞因子的表达进行定量，这几种细胞因子中的一些与鼠源半胱天冬酶-11或人源半胱天冬酶-4不相关。此外，在M.Yamauchi等人.，(2010)中，描述了通过分析基因表达谱来鉴定人类原发性肺肿瘤上皮细胞中的139个吉非替尼敏感基因(也包含半胱天冬酶4基因)。在专利申请WO2010/064702中，描述了用于通过分析227个基因(包含半胱天冬酶-1基因和半胱天冬酶-4基因)的基因表达的变化来诊断肺癌的方法。然而，之前从未描述或暗示过活性形式的人源半胱天冬酶蛋白作为参与肺癌的生物标记物的用途。而且，既不知晓也没有暗示鼠源半胱天冬酶-11或人源半胱天冬酶-4的促炎性细胞因子效应器(如IL-1α)和肺癌之间的关系。
技术实现思路
作者已经惊奇地发现，半胱天冬酶，尤其是鼠源半胱天冬酶-11[NCBI登记号CAA73531.1](SEQ ID No.4)和人源类似物半胱天冬酶-4[NCBI登记号NP_001216.1](SEQ ID No.1)，以及鼠源半胱天冬酶-1[NCBI登记号小鼠：NP_033937.2(NM_009807.2)](SEQ ID No.3)和人源半胱天冬酶-1[CAA46153.1](SEQ ID No.2)，参与了肺癌中的肿瘤生长。而且，尽管这些酶的激活因子的分子配体仍然是未知的，但本专利技术的作者已鉴定出新的参与肺肿瘤生长的“激活信号通路”，其有利于鉴定新的治疗性和诊断性靶标。在通过暴露于致癌物诱导的氧化应激过程中，产生了8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OH-dG)，其反过来被胞浆内受体AIM2[NCBI登记号：小鼠：NP_001013801.2](SEQ ID No.5)、人源[NP_004824.1](SEQ ID No.6)(炎性体络合物的组分)识别。AIM2在小鼠中结合至半胱天冬酶-11且在人类中结合至半胱天冬酶-4，该活性形式诱导了警报器的释放，如IL-1α[NCBI 10登记号：小鼠：NP_034684[GI:47059075]](SEQ I本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于诊断和/或预后和/或用于监控肿瘤的发展的体外或离体方法，其特征在于确定生物标记物的存在，所述生物标记物选自生物样品中的：a)活性形式的人源半胱天冬酶蛋白；b)其变体、功能性衍生物或功能性片段。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.24 IT RM2014A0000801.一种用于诊断和/或预后和/或用于监控肿瘤的发展的体外或离体方法，其特征在于确定生物标记物的存在，所述生物标记物选自生物样品中的：a)活性形式的人源半胱天冬酶蛋白；b)其变体、功能性衍生物或功能性片段。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述人源半胱天冬酶蛋白为人源半胱天冬酶-4蛋白(SEQ ID No.1)或人源半胱天冬酶-1蛋白(SEQ ID No.2)。3.根据权利要求1或2所述的方法，包括以下步骤：a)对从受试者分离出来的样品中的如权利要求1或2中所限定的生物标记物进行确定和/或定量，和b)将其与给定的对照进行比较。4.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，还包括对至少一种其它肿瘤标记物进行确定和/或定量并与适当的对照样品进行比较。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述其它标记物为根据权利要求1或2所述的生物标记物的促炎性细胞因子效应器，优选地所述促炎性细胞因子为IL-1α、IL-1β、IL-18或HMGB1。6.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其特征在于所述方法确定了预后和/或监控肿瘤的发展和/或进程过程中生物样品中的...
【专利技术属性】
技术研发人员：奥尔多·平托，瑞塔·帕特里齐亚·阿基诺，罗莎琳达·索伦蒂诺，米凯拉·泰尔利齐，
申请(专利权)人：免疫制药股份责任有限公司，
类型：发明
国别省市：意大利;IT
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