一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条及其制备方法技术

本发明专利技术提供的一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条及其制备方法，采用双抗体夹心法原理检测小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌的肿瘤标志物(抗原)，从而判断肺癌是否发生。本发明专利技术提供的免疫层析检测条便于携带和保存；操作简单，方法稳定，且在10分钟完成测试。具有可定量、半定量和定性检测的特点，能反映肺癌的肿瘤标志物的浓度范围和变化趋势，明显方便临床诊断和治疗检测的使用。本发明专利技术还可使用测试仪器，能简单快速的检测样品中的肿瘤标志物(抗原)。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药和医学检验
，尤其涉及一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条及其制备方法。
技术介绍
肺癌是目前全世界癌症死因的第一名，我国现在也是世界第一肺癌大国。肺癌是引发死亡率最高的癌症，在过去的三十年里，中国人肺癌死亡率增加了464.15％，非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌比例的85％。鳞状细胞癌，腺癌和大细胞癌都属于非小细胞肺癌的子型。小细胞肺癌所占比例不高，但恶性强度很高。中国人肺癌发生率每年递增20％。在过去的二十年肺癌病患的存活率非常低。早期检测肺癌是抗争肺癌的最好方式。目前市场上已有影像学检测，例如CT扫描、核磁(MRI)扫描能够看到肺癌的发生部位、大小，以及是否已经转移、转移部位等信息，但这种方法不能频繁使用，对患者的身体辐射较大而且费用较为昂贵。此外，肺组织穿刺细胞学检查对肺癌的早期诊断及确诊率也有重要的临床价值，采用手术肺穿刺取活体检测标本经固定、包埋、切片、染色后由经验丰富的病理学医师验片诊断，细胞学检测肺癌很大程度上依赖专业经验才能准确给出诊断结果，并且操作繁琐、获取诊断结果周期较长，同时患者的身体和精神伤害较大，不能满足人们快速检测的需要。血液肿瘤标志物的检测在肺癌的早期诊断和早期治疗中具有重要参考价值，但由于肺癌细胞多型性的特点，现有的单一肺癌血液肿瘤标志物灵敏度较低，例如，近年来，检测肺癌标记物的免疫检测方法有化学发光法和酶标法,这些方法虽然具有快速、准确、特异性高的特点，但是操作需检测设备和专业人员操作，灵敏度也有待提高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条，使该检测条具有较高的灵敏度和较准确的检测结果，同时还能完成定性和定量的检测。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条，包括底板，
所述底板上由下向上次为样品吸收区、固相标记抗体区、反应区和吸水区，所述反应区设有检测线T和质控线C，所述检测线T设置有一条或两条，所述质控线C设置一条或多条；所述检测线包被有检测小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌的肿瘤标志物对应的抗体；所述固相标记抗体区有检测小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌的肿瘤标志物对应的标记抗体。优选的，所述小细胞肺癌的肿瘤标志物SCLC神经化烯醇化酶为NEC、胃泌素释放肽前体pro-GRP。优选的，所述非小细胞肺癌的肿瘤标志物NSCLC抗原为角蛋白类抗原CYFRA21-1、磷状细胞抗原SCC或组织多肽特异性抗原TPS。优选的，所述标记抗体的标记物为金颗粒、或酶、或光或碳粒。优选的，所述检测线上包被的肿瘤标志物对应抗体的包被的浓度为1～3mg/ml。优选的，所述免疫检测条还包括盛装检测条的塑料壳。优选的，所述样品吸收区吸收的样品为血液，血清或血浆。优选的，所述检测线T的显色情况用肉眼观察或根据读数器测定的数据得到定量检测结果，或者以对照区质控线C的强度未对照，得到半定量检测结果。本专利技术还提供了上述技术方案所述的快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：1)将标记抗体溶解于缓冲液中，得到稀释的标记抗体，将所述的稀释的标记抗体喷涂在固相膜，如，玻璃纤维纸。然后在真空干燥器进行干燥；2)将包被抗体溶液划线于反应区上的检测区形成T线，将划线的反应区放在25～37℃环境下烘干10～20分钟；3)将样品吸收区、固相标记抗体区、反应区和吸水区进行裁剪后后按照由上向下的顺序依次固定在底板上，上端再贴上吸水区，切割成条，得到免疫检测条；本专利技术提供的一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条，包括底板，所述底板上由下向上次一次设置有样品吸收区、固相标记抗体区、反应区和吸水区，所述反应区设有检测线T和质控线C，所述检测线T设置有一条或两条，所述质控线C设置一条或多条；所述检测线包被有检测小细胞肺癌和/
或非小细胞肺癌的肿瘤标志物对应的抗体；所述固相标记抗体区有检测小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌的肿瘤标志物对应的标记抗体。本专利技术采用双抗体夹心法原理检测肺癌的肿瘤标志物，本专利技术选用合适的肺癌肿瘤标志物，以同时采用美国JAJ international,Inc.San Diego公司生产的具有与各肿瘤标志物抗原高度特异性的抗体得到具有高灵敏度的免疫检测条。所述免疫检测条便于携带和保存；操作简单，方法稳定、可单个测试，且在10分钟完成测试。具有可定量和半定量测定的特点，能反映肺癌的肿瘤标志物的浓度范围和变化趋势，明显方便临床诊断和治疗检测的使用。本专利技术还可使用测试仪器，能简便、快速的检测样品中的肿瘤标志物。进一步的，本专利技术所述免疫检测条检测非小细胞肺癌的肿瘤标志物CYFRA 21-1，结果表明所述免疫检测条的灵敏度为5ng/ml；本专利技术所述免疫检测条检测小细胞肺癌的肿瘤标志物NEC，结果表明所述免疫检测条的灵敏度为15ng/ml；本专利技术所述免疫检测条检测小细胞肺癌的肿瘤标志物Pro GRP，结果表明所述免疫检测条的灵敏度为15ng/ml。附图说明图1为本专利技术实施例1得到的非小细胞肺癌肿瘤标志物CYFRA 21-1定性检测阳性结果；图2为本专利技术实施例1得到的非小细胞肺癌肿瘤标志物CYFRA 21-1定性检测阴性结果；图3为本专利技术实施例1得到的非小细胞肺癌肿瘤标志物CYFRA 21-1定量检测结果；图4为本专利技术实施例2得到的小细胞肺癌的肿瘤标志物NSE定性检测阳性结果；图5为本专利技术实施例2得到的小细胞肺癌的肿瘤标志物NSE定性检测阴性结果；图6为本专利技术实施例2得到的小细胞肺癌的肿瘤标志物NSE定量检测结果；图7为本专利技术实施例3得到的小细胞肺癌pro-GRP定性检测阳性结果；图8为本专利技术实施例3得到的小细胞肺癌pro-GRP定性检测阴性结果；图9为本专利技术实施例3得到的小细胞肺癌pro-GRP定量检测结果；图10为本专利技术实施例4得到的CYFRA 21-1和NSE二个肺癌肿瘤标志物在同一个检测条上的定性检测结果。具体实施方式本专利技术提供了一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条，所述检测条上由下向上次依次设置有样品吸收区、固相标记抗体区、反应区和吸水区，所述反应区设有检测线T和质控线C，所述检测线T设置有一条或两条，所述质控线C设置一条或多条；所述检测线包被有检测小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌的肿瘤标志物对应的抗体；所述固相标记抗体区有检测小细胞肺癌和/或非小细胞肺癌的肿瘤标志物对应的标记抗体。本专利技术采用双抗体夹心法原理检测肺癌的肿瘤标志物，所述免疫检测条具有检测结果准确、灵敏度高的特点，且便于携带和保存；操作简单，方法稳定、可单个测试，且在10分钟完成测试。具有可定量和半定量测定的特点，能反映肺癌的肿瘤标志物的浓度范围和变化趋势，明显方便临床诊断和治疗检测的使用。本专利技术还可使用测试仪器，能快速的检测样品中的肿瘤标志物。本专利技术提供的免疫检测条包括底板。本专利技术对所述底板的材质、尺寸和来源没有特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的用于免疫检测条中的底板即可。在本专利技术中，所述底板的材质优选为塑料或胶片材料。本专利技术实施例中所用的底板为PVC板，为市售商品。本专利技术提供的免疫检测条包括设置在所述底板上的样品吸收区。在本专利技术中，所述样品吸收区的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条，检测条依次由样品吸收区S,免疫层析条,固相标记抗体区，检测肺癌特异抗原的检测区T，对照区C和吸水区组成。

【技术特征摘要】
1.一种快速诊断和监控肺癌的免疫层析检测条，检测条依次由样品吸收区S,免疫层析条,固相标记抗体区，检测肺癌特异抗原的检测区T，对照区C和吸水区组成。2.根据权利要求1加入检测对象血样予样品吸收区S，借助或不借助一种缓冲液推动血样液体沿层析膜上行，血样中的肺癌特异抗原或称肿瘤标志物，先与固相标记区标记抗体形成“标记抗体---肺癌抗原”免疫复合物，经由层析原理沿免疫层析条继续上行，在检测区T与检测区固相化的配对特异抗体吸附，形成“标记抗体---肺癌抗原---固相化抗体”沉淀物。该沉淀物的浓度与肺癌抗原在血样的浓度成正比例。3.根据权利要求1标记抗体为金颗粒标记，或酶标记，或光标记，或碳粒标记。4.根据权利要求1检测检测区T浓度可用肉眼检测，或可以置予读数器下定量检测，亦可以用对照区C,一条线或多条线的强度作比较，以做出半定量检测。5.根据权利要求1肺癌肿瘤标记物，或称肺癌肿瘤抗原,为非小细胞肺癌标记物NSCLC如角蛋白类抗原Cytok...

【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·儆翊·卢，惟钊·卢，胡成龙，
申请(专利权)人：卢氏实验室公司，南京路始生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US