本发明专利技术公开了一种非小细胞肺癌预后检测组合物及其应用。一种人体血清/血浆中稳定存在的非小细胞肺癌预后标志miRNA组合，由miR‐638和miR‐27a组成。检测所述的非小细胞肺癌预后标志miRNA组合的引物和探针组合物，由美国应用生物系统公司生产的货号为ABI?assay?ID000200的miR‐638引物和荧光探针和美国应用生物系统公司生产的货号为ABI?assay?ID001582的miR‐27a引物和荧光探针组成。将筛选出的特定血清/血浆miRNA作为新型的肺癌标记物，该方法可广泛用于非小细胞肺癌的预后判断和疗效监测，其对非小细胞肺癌的预后判断的准确性明显高于已报道的血清miRNA。
【技术实现步骤摘要】
非小细胞肺癌预后检测组合物及其应用
本专利技术属于生物检测领域，涉及一种非小细胞肺癌预后检测组合物及其应用。
技术介绍
肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤，也是癌症相关死亡的首位死因。每年确诊的肺癌病例约161万例，占恶性肿瘤的12.7%，肺癌相关死亡约138万例，占癌症相关死亡的18.2%。肺癌也是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在中国大多数地区占第一位，在大城市及工业污染重的地区尤为显著。随着中国人口的持续增长和人口老龄化的加剧，加之生活方式、社会、经济和环境等因素的改变，肺癌的发病率和死亡率呈明显上升趋势。根据不同的肺癌细胞形态，可将肺癌分为两大类，非小细胞肺癌(non-small celllung cancer, NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC),非小细胞肺癌占所有肺癌病例的80%~85%，由于大多数患者在患病早期没有明显的症状，确诊时多已进人中晚期阶段，治疗效果及预后较差。缺乏有效的早期诊断方法和晚期肺癌治疗效果不佳是导致肺癌患者预后不良的主要原因。既往肺癌早期诊断常用的方法是影像学检查、血清标志物或者痰液细胞学检查。但敏感性和特异性均低；以被修饰的细胞为目标的靶向治疗则需要知道精确的癌细胞分类，但这仅依靠常规的组织病理学诊断技术是远远不够的。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类新发现的非编码单链小分子RNA，通常是由RNA聚合酶II转录。成熟的微小RNA保留在具有功能的复合体中，通过与靶mRNA的3’非翻译区结合(3untranslated region, 3 一 UTR)结合,抑制mRNA的翻译或影响mRNA的稳定性而发挥作用。广泛参与机体的生长发育、细胞的代谢、增殖、分化、凋亡和肿瘤形成等生理和病理过程，已成为生命科学界研究的热点。新近研究发现，微小RNA在人类的多种疾病中，包括肿瘤的病理过程中发挥重要作用。微小RNA表达与多种癌症相关，微小RNA可以起“癌基因”或者“抑癌基因”的功能，大约50%已阐明的微RNA在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点(fragile site)。这说明微小RNA在肿瘤发生、发展过程中起了至关重要的作用。miRNA的表达具有时空特异性。在不同组织与不同发育阶段中miRNA的水平有显著差异，miRNA在不同肿瘤中具有特定的表达模式，这为肿瘤的基因诊断提供了一种新方法。由于肺癌的发生受环境、遗传等多因素影响，其中miRNA在肺癌的早期诊断和治疗中发挥着重要的作用。越来越多的研究证明，血清miRNA的表达谱在预测肺癌的发展和预后中具有重要价值。Raponi M[1]检测了 61例肺鳞癌患者以及与之匹配的正常肺组织样本，发现有15种miRNAs存在表达差异，包括著名的miR - 17 - 92簇。目前，miR - 155、let - 7和miR - 146b被证明在肺腺癌中具有较高的预后判断价值，特别是miR - 146b对预后的指示准确率可达到78%。Cao Wm研究证明，miR - 21、miR - 143以及miR - 181a可作为NSCLC分子诊断及预测预后的生物标记物。Yanaihara等M运用RT - PCR及Kaplan - Meier分析显示:has - mir - 155前体高表达或者has - mir - let - 7a - 2前体低表达的肺腺癌患者预后差。另外，slva等[4]采用芯片技术检测发现，血清miR - 30 - 3P和let - 7f的水平与肺癌患者的无病生存率和总生存率显著相关；血清miR - 30 - 3P和let - 7f的高水平表达提示肺癌患者预后不良。但是，到目前为止，尚缺少对化疗或放疗前后肺癌患者血液中的miRNA改变的检测研究数据，以及尚未有详细的关于用于疗效评估的有关理想miRNA及其组合的报道，从而可以将miRNA检测用于肺癌患者的个体化治疗。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供非小细胞肺癌预后检测组合物。本专利技术的另一目的是提供所述组合物的应用。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现:一种人体血清/血浆中稳定存在的非小细胞肺癌预后标志miRNA组合，由miR - 638 和 miR - 27a 组成。检测所述的非小细胞肺癌预后标志miRNA组合的引物和探针组合物，由美国应用生物系统公司生产的货号为ABI assay ID000200的miR-638引物和荧光探针和美国应用生物系统公司生产的货号为ABI assay ID001582的miR - 27a引物和荧光探针组成。所述的组合物在制备非小细胞肺癌预后检测试剂中的应用。一种非小细胞肺癌预后检测试剂盒，包含本专利技术所述的组合物。有益效果:(I)将筛选出的特定血清/血浆miRNA组合作为新型的肺癌标记物，该方法可广泛用于非小细胞肺癌的预后判断和疗效监测，其对非小细胞肺癌的预后判断的准确性明显高于已报道的血清miRNA。(2)血清/血浆miRNA组合作为新的疾病标记物，可改变单一的疾病标记物所难以克服的低特异性和低灵敏度，提高疾病的检出率和监测临床预后。(3)血清/血浆miRNA组合检测技术的优势在于其检测的是一系列疾病相关标记物，能个克服由个体因素引起的差异，而这是单一疾病标记物说无法逾越的一个主要障碍。可以用于肺癌的临床治疗疗效判断，从而可以为临床提供选择合适的治疗方案，达到个体化的抗肿瘤治疗。【附图说明】图1DDP作用下SPC-Al细胞的凋亡率随时间变化* P〈0.05，与对照组比较；.P〈0.05，与24h处理组比较；Λ P〈0.05，与24h处理组比较? Ρ〈0.05，与48h处理组比较。图2DDP作用后SPC-Al上清中miR-638相对表达水平比较* Ρ〈0.05，与对照组比较图346例NSCLC患者DDP化疗后miR-638水平较化疗前变化情况。26例患者化疗后血清中miR-638水平较化疗前上升，20例较化疗前水平下降，Y轴>1为表达水平升高，Y轴〈-1为表达水平降低。图4Kaplan_Meier生存曲线分析。miR-638表达升高者与表达下降者生存期存在显著差异，表达升高者生存期较下降者明显延长(P〈0.05)。图5SPC-A1细胞凋亡率随时间变化图6SPC-A1培养上清中不同时间段miR_27a含量(对照组比较，*，P〈0.05)图7SPC-A1培养上清中miR_27a含量随时间变化图8SPC-A1细胞内不同时间段miR_27a含量(对照组比较，*，P〈0.05) 图9SPC-A1细胞内miR_27a含量随时间变化图10肺癌患者血清miR_27a的相对含量化疗前与化疗后比较图11不同疗效组肺癌患者化疗前血清miR_27a的相对含量比较图12不同疗效组肺癌患者化疗后血清miR_27a的相对含量比较图13PR组肺癌患者化疗前后血清miR_27a的相对含量比较图14NR组肺癌患者化疗前后血清miR - 27a的相对含量比较图15血清miR - 27a化疗后变化趋势，Kaplan - Meier生存曲线分析图164例接受3~4周期化疗的晚期肺癌患者血清miR - 27a相对含量动态变化结果图17NSCLC患者及健康体检者miR - 638相对表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种人体血清/血浆中稳定存在的非小细胞肺癌预后标志miRNA组合，其特征在于由miR‐638和miR‐27a组成。
【技术特征摘要】
1.一种人体血清/血浆中稳定存在的非小细胞肺癌预后标志HiiRNA组合，其特征在于由 miR - 638 和 miR - 27a 组成。2.检测权利要求1所述的非小细胞肺癌预后标志miRNA组合的引物和探针组合物，其特征在于由美国应用生物系统公司生产的货号为ABI assay ID00...
【专利技术属性】
技术研发人员：潘世扬，王芳，徐建，杨瑞霞，黄珮珺，徐婷，张丽霞，陈丹，张燕，谢而付，顾兵，蒋叶，
申请(专利权)人：潘世扬，
类型：发明
国别省市：
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