本发明专利技术属于生物样品检测领域，公开了非小细胞肺癌胸水肿瘤标志物的应用。SP70作为非小细胞肺癌胸水肿瘤标志物在制备非小细胞肺癌胸水和/或胸水脱落细胞诊断试剂中的应用。SP70的单克隆抗体在制备非小细胞肺癌所致胸水和/或胸水脱落细胞诊断试剂中的应用。一种非小细胞肺癌胸水脱落细胞的直接免疫荧光检测试剂盒，包含荧光标记的SP70的单克隆抗体、5%BSA、1%PBS。本发明专利技术通过大量实验研究发现，SP70抗原可作为由非小细胞肺癌引起的恶性胸水的一个敏感、特异的检测指标，同时检测胸水中和胸水脱落细胞上的SP70抗原，可大大提高癌性胸水诊断的敏感性和特异性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物样品检测领域，涉及非小细胞肺癌胸水肿瘤标志物的应用。
技术介绍
胸水，又名胸腔积液，是临床上常见的病症之一，可因多个疾病引发。在我国，结核是第一位的病因，恶性肿瘤居病因的第二位。不同疾病引发的胸水，其应对措施和患者预后迥然不同。因此良恶性胸水的鉴别诊断具有至关重要的作用。恶性胸水是晚期肿瘤病人常见而又令人苦恼的一种并发症，469Γ64%的胸腔积液患者为恶性肿瘤所致，近来有增加的趋势。几乎所有的恶性肿瘤(除原发性脑肿瘤)均可引起胸腔积液，在临床上引起胸水的恶性肿瘤中肺癌是占第一位的(249Γ4290，其次分别为原发灶不明的胸膜转移性腺癌(34%)、乳腺癌(239Γ2590，恶性淋巴瘤(12°/Γ24%)。肺癌病人在其病程中，约有半数患者发展成胸水。有数据显示约30%的肺癌患者最初的临床表现是胸水。恶性胸水患者总的预后不佳。近年来国内外学者都在试图寻找更为有效的检测指标以提高恶性胸水的检出率，肿瘤标志物就是其中研究的热点。肿瘤标志物(tumour marker, TM)主要是指细胞在癌变的发生、发展、浸润及转移过程中所分泌的一些活性物质，这些物质在正常人体内缺乏或含量极低。它们在释放入血的同时，也大量存在于肿瘤组织周围和因肿瘤产生的胸水中，且其浓度可能远远高于血清。故检测胸水中的肿瘤标志物越来越受到临床的重视。肿瘤标志物癌胚抗原(carcinoma embryonic antigen, CEA)是一种糖蛋白，其分子量较大,存在于胚胎胃肠粘膜上皮与一些恶性病变组织的细胞表面，可见于肺癌、乳腺癌、结肠癌等恶性肿瘤患者，其特异性不理想。当胸膜腔受到恶性肿瘤细胞侵犯时，由于快速的细胞转换，多糖蛋白质复合物，包括CEA脱落至胸腔，CEA由于分子量较大，一旦在闭合的胸腔产生，便不易进入血液循环，故不易形成被肾脏清除的抗原抗体复合物，因此，恶性胸水中CEA水平较血清出现早且更明显。细胞角质蛋白19片段(cytokeratin 19fragment, CYFRA 21_1)是利用鼠的单克隆抗体KS19和BM19-21在人体液中检测细胞角蛋白19的一个可溶性片段。主要分布于肺、食道、乳腺上皮，是非小细胞肺癌尤其是肺鳞癌的首选标志物。神经元特异性烯醇化酶(neuron specificenolase,NSE)主要存在于神经元及外周神经内分泌组织中，与小细胞肺癌(small cell lungcancer, SCLC)有关,是公认的小细胞肺癌高特异性、高灵敏性的肿瘤标志物。国内外通过检测CEA、CYFRA 21-1和NSE来鉴别胸水性质的报道较多见，但其敏感性和特异性均不理想。因此，寻找诊断肺癌性胸水较为敏感和特异的指标，成为临床迫切需要解决的问题。临床上以细胞学检查和组织活检作为鉴别良恶性胸水的标准，前者虽然特异性高，但不够敏感，其阳性检出率仅为40%-50%，胸腔镜检查虽可大大提高诊断的敏感性(达90%左右)，但因损伤较大、费用高，又有一定的风险，临床应用受限。由于以上多方面原因，迄今为止，临床上仍未能有一个敏感性和特异性均较为理想的胸水肿瘤标志物。众所周知，在胸水中找到肿瘤细胞是判断恶性胸水的金标准。然而，只有当肺癌病灶浸破脏层胸膜，癌细胞脱入胸腔内，才能形成胸腔脱落癌细胞。首先，从胸膜上脱落下来的反应性间皮细胞也有腺癌细胞的一些形态特征，加之某些异形性不明显的癌细胞与反应性间皮细胞几乎无法区别。其次，由于癌细胞在积液中无组织及器官构架的束缚而自由漂浮和增生甚至经几代繁殖，失去了原来在组织中的形态特征，故单纯依靠形态学进行诊断，敏感性较低以至造成诊断结果中存在着相当数量的假阴性。细胞形态学诊断的敏感性仅为50%左右，特异性为80%。因此，建立一种科学、有效的细胞学诊断方法是提高肺癌性胸水诊断阳性率的有效途径，也是提高肺癌患者生存率与治愈率的关键。目前，利用抗肿瘤单克隆抗体研究和确定相关的抗原分子在肿瘤结构和功能活动中的有关特性，对于研究这些分子在恶性肿瘤细胞生物学行为中的作用有十分重要的意义，并在近年取得长足进展。同时利用抗肿瘤单克隆抗体检测各种体液中的肿瘤抗原用于恶性肿瘤的早期诊断也显示出诱人的前景，受到广泛关注。本实验室前期以人肺腺癌细胞株SPC-Al为抗原，免疫BALB/c小鼠，常规细胞融合，间接细胞ELISA法筛选阳性细胞克隆，得到一株高效价并稳定分泌IgGl抗人非小细胞肺癌单克隆抗体的细胞株NJ001 ；Western blot显示单抗NJOOl特异性结合的抗原相对分子质量(Mr)为70000左右，因此该蛋白被命名为SP70 ;免疫荧光法等证实单抗NJ001能特异地识别肺癌细胞系，其识别抗 原在非小细胞肺癌细胞的胞浆中和胞膜上均有表达，胞浆中表达量更丰富；免疫组化结果表明单抗NJ001与非小细胞肺癌组织有强阳性反应，而与小细胞肺癌、其他组织类型的肿瘤及正常肺组织呈弱阳性或阴性反应，因此证明了 SP70在非小细胞肺癌诊断中的特异性。通过双抗体夹心ELISA方法，对临床血清样本中的SP70抗原进行检测，证明该抗原在非小细胞肺癌的诊断中有重要的临床价值。Fuhrman C (Fuhrman C，Duche JC, Chouaid C，AbdAlsamad I，Atassi K，Monnet I，Tillement JPj Housset B. Useof tumor markers fordifferential diagnosis of mesothelioma and secondary pleuralmalignancies. ClinBiochem，2000，33(5) :405-410.)对肺癌患者血清和胸水样本中的(某些)肿瘤标志物(CEA，CYFRA 21-1，组织多肽抗原，透明质酸)同时进行检测和比较分析，结果显示胸水中的含量明显高于血清中的含量，因此，可以认为检测胸水中的肿瘤标志物是一种较好的鉴别良恶性胸水的方法。但是血清肿瘤标志物不一定能作为胸水肿瘤标志物，有文献报道(宋志军，吴广平.CA724和CA199在肺癌患者临床诊断意义.中国医药指南，2011，9 (19):18-19),CA72-4在肺癌患者血清中含量明显升高，然而，CA72-4在肺癌患者胸水中的诊断价值远远小于血清中的诊断价值。SP70作为一种组织特异性强的新肿瘤标志物，它在非小细胞肺癌患者所致胸水中是否表达尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供SP70作为非小细胞肺癌胸水肿瘤标志物的应用。本专利技术的另一目的是提供SP70的单克隆抗体的应用。本专利技术的又一目的是提供一种非小细胞肺癌胸水脱落细胞的直接免疫荧光检测试剂盒。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现SP70作为非小细胞肺癌胸水肿瘤标志物在制备非小细胞肺癌胸水和/或胸水脱落细胞诊断试剂中的应用。SP70的单克隆抗体在制备非小细胞肺癌所致胸水和/或胸水脱落细胞诊断试剂中的应用。其中，所述的SP70的单克隆抗体优选保藏号为CCTCC NO C201172的杂交瘤细胞株分泌的抗人非小细胞肺癌的单克隆抗体NJ001-1。所述的单克隆抗体NJ001-1在制备检测非小细胞肺癌所致胸水的双抗体夹心ELISA检测试剂中的应用。一种非小细胞肺癌胸水本文档来自技高网...
【技术保护点】
SP70作为非小细胞肺癌胸水肿瘤标志物在制备非小细胞肺癌胸水和/或胸水脱落细胞诊断试剂中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：潘世扬，王芳，黄珮珺，徐建，杨瑞霞，孙瑞红，黄蕾，
申请(专利权)人：潘世扬，
类型：发明
国别省市：
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