检测万古霉素的试纸条制造技术

本实用新型专利技术提供了一种检测万古霉素的试纸条，试纸条包括微孔试剂和试纸，试纸由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，微孔试剂上冻干有万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物，反应膜上具有包被有万古霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“|”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“|”。试纸条放置于具塞试剂桶中，12个具塞试剂桶放置于具有12个孔的固定用具的盒体中。本实用新型专利技术试纸条具有便携性好、灵敏度高、检测时间短等特点，可以在万古霉素残留检测中发挥重要作用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及一种检测万古霉素的试纸条，特别是检测牛奶中万古霉素的试纸条。
技术介绍
万古霉素(vancomycin，VCM)，又名凡古霉素、凡可霉素，是一种多肽类抗生素，分子式为C66H75Cl2N9O24,分子量1485. 72。通常以盐酸盐形式存在，为白色至淡棕色粉末，无臭，味苦。在水中易溶，在甲醇中微溶，在丙酮、丁醇或乙醚中不溶，在溶液中能被多种重金属盐类沉淀。万古霉素，作为一种从微生物Streptomyces orientalis分离得到的多肽类抗生素，它对革兰氏阳性菌有很好的抑制作用，但因其不能穿透外部的渗透屏障，它对革兰氏阴性菌没有疗效。·多肽类抗生素是由不同类型的氨基酸缩合而成的小分子肽类，主要用于促进动物生长及治疗畜禽疾病。目前，多肽类抗生素被广泛用于家禽、猪、牛等饲料添加剂和兽药。常用的多肽类抗生素包括粘杆菌素、杆菌肽、维吉尼霉素及万古霉素等。然而，随着多肽类抗生素的广泛使用，滥用及不遵守休药期等现象时有发生。药物将可能通过食物链的传递进入人体，危害人体健康。如果长期暴露，还会增加细菌的抗药性，具有潜在的健康风险和生态风险。多肽类抗生素可分别抗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、绿脓杆菌、真菌、病毒、螺旋体、原虫的感染，特别是对牛乳腺炎等疾病有较好的疗效。目前，欧盟、日本、美国、澳大利亚等均已制定牛奶中多种多肽类抗生素的限量。其中，欧盟对杆菌肽A及粘杆菌素的限量分别为100和50 μ g/kg;日本对杆菌肽A、维吉尼霉素、万古霉素、粘杆菌素的限量分别为400、100、10和10 μ g/kg。而我国也于近年制定了牛奶中杆菌肽A及粘杆菌素的限量，分别为500和50yg/kg。关于多肽类抗生素的检测方法逐渐引起了关注。目前，多肽类抗生素检测方法包括微生物法、免疫分析法、高效液相色谱法(HPLC)、毛细管电泳法等，但这些方法均存在灵敏度低等问题，无法满足检出限要求；而单独检测万古霉素的方法包括高效液相色谱法、分光光度法、荧光偏振免疫分析法、毛细管电泳法、微生物分析法和薄层色谱法，其中。微生物法检测耗时长，缺乏特异性，且所用细菌对不同种类的抗菌药物敏感性存在差异，易导致假阴性和假阳性产生；仪器分析法样品前处理过程复杂，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，仅适用于样品的确证分析，不适合大批量样品的筛选及现场检测。并且关于牛奶中万古霉素检测的研究尚未见报道。因此，在实践中有必要建立一种敏感度高、操作简单、成本低、适合大规模推广的检测方法。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的检测万古霉素的试纸条。本技术的试纸条，包括冻干有万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸，试纸由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，所述反应膜上具有包被有万古霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“ I ”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“ I ”。检测线和质控线平行，检测线位于距离样品吸收垫一侧5-8mm处，质控线位于距离检测线4_7mm处，试纸上粘贴有保护膜，保护膜覆盖在样品吸收垫上，为检测端，上面印有MAX标记线，微孔试剂上具有微孔塞。为了便于运输和使用，试纸条盛装于具有密封盖的试剂桶中，试剂桶放置于具有固定用具的盒体中。本技术试纸条中的试纸底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂桶为塑料试剂桶；固定用具为硬质支撑材料；盒体为硬纸盒。本技术试纸条具有如下有益效果I、灵敏度闻。检测万古霉素的试纸条以I父体金标记闻未和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。其中的万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。因此，本技术试纸条具有较高的特异性和灵敏度。本试纸条对万古霉素的检测灵敏度为50μ g/L。2、操作简便快速。使用试纸条检测时无需任何其它试剂，只要将待检样品溶液滴加于微孔试剂中，混匀后，室温(20-250C )孵育5min，将试纸标有MAX标记线的一端向下，插入孵育后的微孔试剂中，室温(20-25°C)孵育5min，观察结果。3、显示检测结果形象、直观、准确。检测试纸以显示红色线“ I ”及“ Il ”印迹作为阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显示一条红线“ I ”印迹表示被检测样本液中万古霉素的含量高于或等于试纸条对万古霉素的最低检测限，两条红线“ Il ”印迹表示被检测样本中万古霉素的含量低于试纸条对万古霉素的最低检测限，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。4、成本低，投资少。使用本技术试纸条，不需另配仪器设备及其它试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。5、易于大范围推广应用。试纸条操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、食品企业等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。附图说明图I为本技术试纸结构示意图；图2为本技术试纸俯视图；图3为本技术微孔试剂图；图4为本技术试纸条检测结果判定图；图5为本技术试剂桶结构示意图；图6为本技术固定用具俯视图；图7为本技术盒体与固定用具侧视图。具体实施方式一、检测万古霉素试纸条的组装制备( I)试纸样品吸收垫I、反应膜2、吸水垫3和保护膜7依次按顺序粘贴在所述底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐，试纸粘贴有保护膜，保护膜7覆盖在样品吸收垫上,为检测端,上面印有MAX标记线,检测线4包被有万古霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控线5包被有羊抗鼠抗抗体。底板为PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水 纸，保护膜为PE材质保护膜。(2)微孔试剂微孔试剂8具有微孔塞9，微孔试剂中冻干有万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物。(3)将(I)试纸和(2)微孔试剂装入具有密封盖的塑料试剂桶10，将塑料试剂桶放置于盒体12内的固定用具11中。二、试纸条的使用滴加待检牛奶样品溶液200 μ I到微孔试剂中，混匀后，室温(20_25°C )孵育5min，将试纸标有MAX标记线的一端向下插入孵育后的微孔试剂中，室温(20-25 0C )孵育5min，观察结果。三、检测结果分析万古霉素在样本中的含量高于或等于试纸条对其的最低检测限时，万古霉素单克隆抗体-胶体金标记物与万古霉素结合，金标抗体上的抗原结合位点被封闭，从而在检测线上因为竞争反应，不会与万古霉素半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。阴性样本在检测过程中由于缺少抗原抗体竞争反应，将会在检测线和质控线上出现红色条带。如图4所示。阳性当质控线(C)显示一条红色条带，而检测线(T)不显色，试纸以显示红色线“I”，判为阳性，如图4.a所示。阴性当质控线(C)显示一条红色条带本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测万古霉素的试纸条，其特征在于包括微孔试剂和试纸，试纸由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。

【技术特征摘要】
1.一种检测万古霉素的试纸条，其特征在于包括微孔试剂和试纸，试纸由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成。2.如权利要求I所述的试纸条，其特征在于所述反应膜上具有包被有万古霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线印迹“ I ”和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线印迹“ I ”。3.如权利要求2所述的试纸条，其特征在于所述检测线和质控线平行，均呈与试纸的长相垂直的条带状。4.如权利要求1、2或3所述的试纸条，其特征在于所述检测线位于距离样品吸收垫一侧5-8mm处，所述质控线位于距离检测线4_7mm处。5.如权利要求I所述的试纸条，其特征在于所述试纸上贴有保护膜，保护膜覆盖在样品吸收垫...

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，万宇平，冯才伟，付军权，赵正苗，李勇，杨秀贤，崔廷婷，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：