本发明专利技术涉及从大规模原发组织标本中定量识别相关HLA-结合肽抗原而无需标记的一种方法。该方法不仅可用于开发肽疫苗，而且对分子免疫监测和识别任何免疫治疗策略中的新抗原也有非常高的价值，其中，HLA限制抗原决定簇作为靶标，如：癌症或传染病和自身免疫性疾病中各种亚基疫苗或T-细胞过继转移方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
深入了解人类白细胞抗原(HLA)结合肽在原发恶性组织中的表达水平可大大改进开发癌症免疫疗法以及自身免疫和感染疾病的免疫治疗，从而诱发免疫系统T细胞对抗癌症。该信息特别与肽疫苗相关，也与基于蛋白质、DNA或RNA等分子实体的任何其他类型的T细胞疫苗相关。之前，在“组学”范围内并无这种量化数据，因为迄今为止，常见的定量分析方法大多依赖于差别化化学标记战略，要求所有要比较的样本在单一实验中处理，这严重地限制了此类研究的可能规模。EP1508047B1中披露了一种识别上述避免“反向免疫学”相关问题的肽的方法。如上所述，该方法不能用于所述肽的定量分析。WO 2005/076009中披露了运用标记策略的另一种方法，其中允许进行一些定量分析，但不能在更大的规模上进行。例如，WO 03/025576中披露了其他标记方法，Martin等人在《蛋白质组学》(Proteomics 2003，3，2208-2220) —文中也进行了披露。Fortier 等人披露了另一种方法(The MHC class I peptide repertoire is molded by the transcriptome, JEM, Vol. 205, No. 3, March 17,2008595-610)。该方法的缺点是由于酸洗脱，需要从非MHC结合肽中剥离出MHC结合肽。这通过使用b2m-敲除细胞株来实施。因此，该方法不能用于原发患者肿瘤材料。在该方法中，对原发鼠胸腺细胞与鼠EL4细胞株进行了对比。通过测量MHC-I分子对起始量进行了调整。仅此就大大限制了Fortier等人披露的方法。此外，没有应用不同尺寸和来源的原发组织所需要的正态化。相反，使用均衡的起始原料，让正态化过时。然而，对于原发(患者)材料，正态化是绝对必要的。是否能刺激免疫反应取决于是否存在被宿主免疫系统视为异物的抗原。发现肿瘤相关以及疾病抗原的提呈增加了运用宿主免疫系统干预肿瘤生长的可能性。对于癌症免疫疗法，目前正在探索各种利用免疫系统的体液和细胞免疫作用的机制。细胞免疫反应的特定元素能特异性地识别和破坏肿瘤细胞。从肿瘤浸润细胞群或外周血中分离出的细胞毒性T-细胞(CTL)表明，这些细胞在癌症的天然免疫防御中发挥了重要作用。尤其是识别与主要组织相容性复合体(MHC) I类分子结合的肽的CD8阳性T细胞(T-CDS+)。通常带8至10个氨基酸残基的这些肽源自于蛋白质或位于细胞质的缺损核糖体产物(DRIP)，它们在这种反应中发挥重要作用。人MHC分子也称为人白细胞-抗原(HLA)。MHC分子有两类大部分有细胞核的细胞上都可发现的MHC-I类分子。MHC分子分别由一条α重链和β-2-微球蛋白(MHC-I类受体)或α和β链(MHC-II类受体)组成。其三维构造形成一个结合槽，用于与肽进行非共价相互作用。MHC I类分子提呈主要为内源性的蛋白、DRIPS和较大肽的蛋白裂解产生的肽。MHC II类分子主要发现于专职性抗原提呈细胞(APC)上，并且主要提呈在内吞作用过程中被APC吞噬且随后被加工的外源性或跨膜蛋白的肽。肽和MHC I类分子的复合体由负载相应TCR(T细胞受体)的CD8阳性细胞毒性T淋巴 细胞进行识别，而肽和MHC II类分子的复合体由负载相应TCR的CD4阳性辅助T细胞进行识别。本领域已熟知TCR、肽和MHC由此按I : I : I的化学计算量而存在。对于触发(引发)细胞免疫反应的肽，它必须与MHC分子结合。这一过程依赖于MHC分子的等位基因以及肽氨基酸序列的特异性多态性。MHC-I类-结合肽的长度通常为8-12个氨基酸残基，并且在其与MHC分子相应结合沟槽相互作用的序列中通常包含两个保守残基(“锚”)。这样，每个MHC的等位基因都有一个“结合基序”，从而确定哪些肽能与结合沟槽特异性结合。在MHC-I类依赖性免疫反应中，肽不仅能与肿瘤细胞表达的某些MHC-I类分子结合，而且它们还必须能被带有特异性T细胞受体(TCR)的T细胞识别。肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞所识别的抗原，即它们的表位，可以是源自所有蛋白类型的分子，如酶、受体、转录因子等，它们在相应肿瘤的细胞中被表达，并且与同源未变的细胞相比，其表达上调。目前将肿瘤相关抗原或疾病相关抗原分类为以下主要几组癌-睾丸抗原T细胞能够识别的最先确认的TAA属于这一类抗原，由于其成员表达于组织学相异的人肿瘤中，在正常组织中，仅表达于睾丸精母细胞/精原细胞(偶尔于胎盘)中，因此，它最初被称为癌-睾丸(CT)抗原。由于睾丸细胞不表达HLA I类和II类分子，所以，在正常组织中，这些抗原不能被T细胞识别，因此在免疫学上可考虑为具有肿瘤特异性。CT抗原大家熟知的例子是MAGE家族成员或NY-ES0-1。分化抗原肿瘤和正常组织(肿瘤源自该组织)都含有ΤΑΑ，大多数TAA发现于黑色素瘤和正常黑色素细胞中。许多此类黑色素细胞谱系相关蛋白参与黑色素的生物合成，因此这些蛋白不具有肿瘤特异性，但是仍然被广泛用于癌症的免疫治疗。例子包括，但不仅限于，黑色素瘤的酪氨酸酶和Melan-A/MART-Ι或前列腺癌的PSA。过量表达的TAA :在组织学相异的肿瘤中以及许多正常组织中都检测到了基因编码被广泛表达的TAA，一般表达水平较低。有可能许多由正常组织加工和潜在提呈的表位低于T细胞识别的阈值水平，而它们在肿瘤细胞中的过量表达能够通过打破先前确立的耐受性而引发抗癌反应。这类TAA的典型例子为Her-2/neu、生存素、端粒酶或WT1。肿瘤特异性抗原这些独特的TAA产生于正常基因(如β -catenin、⑶K4等)的突变。这些分子变化中有一些与致瘤性转化和/或进展相关。肿瘤特异性抗原一般可在不对正常组织带来自体免疫反应风险的情况下诱导很强的免疫反应。另一方面，这些TAA在多数情况下只与被确认其上有TAA的确切肿瘤相关，并且通常在许多个体肿瘤之间并不共享 ΤΑΑ。由异常翻译后修饰产生的TAA :此类TAA可能由肿瘤中既不具有特异性也不过量表达的蛋白产生，但其仍然具有肿瘤相关性(该相关性由主要在肿瘤具有活性的翻译后加工所致)。此类TAA产生于糖基化模式的改变，导致肿瘤产生针对MUCl的新型表位或在降解过程中导致诸如蛋白拼接的事件，这可能具有也可能不具有肿瘤特异性。肿瘤病毒蛋白这些TTA是病毒蛋白，可在致癌过程中发挥关键作用，并且由于它们是外源蛋白(非人源蛋白)，所以能够激发T细胞反应。这类蛋白的例子有人乳头状瘤16型病毒蛋白、E6和E7，它们在宫颈癌中表达。对于被细胞毒性T淋巴细胞识别为肿瘤特异性或相关性抗原、或疾病特异性或相关性抗原以及用于治疗的蛋白质，必须具备特殊的先决条件。该抗原应主要表达于肿瘤细胞或受感染细胞，而完全不表达于正常健康组织，或表达量相对较少，例如少于因子5、10或更多。在传染病中有两种可能性，第一，受感染细胞表达一种健康细胞不表达的抗 原-与感染直接相关-或受感染细胞过量表达一种健康细胞只有极少量表达的抗原-抗原过量表达通常存在于健康细胞的多肽组中。更为适宜的情况是，该相应抗原不仅出现于一种肿瘤、感染或紧张中，而且浓度(即每个细胞的相应肽拷贝数目)高。肿瘤特异性和相关性抗原以及疾病特异性或相关性抗原往往是源自直接参与本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：托尼·怀申克，延斯·弗里切，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：
国别省市：
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