二肽肽酶I体外微量快速检测方法技术

二肽肽酶I(dipeptidyl peptidase,DPPI)是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶，高表达于免疫系统的颗粒细胞包括肥大细胞、中性粒细胞、粘膜T淋巴细胞。二肽肽酶I的释放和颗粒细胞的激活有关，而颗粒细胞的激活和一些炎症、自身免疫性疾病的发生有关。本发明专利技术是基于二肽肽酶I与其专属性底物相互作用后释放自由三氟甲基香豆素的原理，建立了一个二肽肽酶I活性检测的纸层析系统，纸层析结果表明二肽肽酶I的浓度和荧光强度正相关(图A)，可以作为一个体外微量快速检测的便携式新方法(图B)。本发明专利技术适用于人、大鼠和颗粒细胞的研究，特点是微量，无需血清制备，分析耗时短，易操作。

【技术实现步骤摘要】
二肽肽酶I体外微量快速检测方法
本专利技术涉及到血液二肽肽酶I活性表达的体外快速检测方法
技术介绍
二肽肽酶I(dipeptidylpeptidase,DPPI)是溶酶体内一种半胱氨酸蛋白酶，又称组织蛋白酶C)，具有肽链外切酶的活性，高表达于人体免疫系统颗粒免疫细胞，包括肥大细胞、中性粒细胞和粘膜T细胞，是丝氨酸炎症蛋白酶原的专属激活酶。在炎症、细胞外基质重构和组织微环境的稳态维持起到重要作用。DPPI血液中的表达和活性和一些特定的病理生理状态相关，所以DPPI检测方法的建立，无论是实验室还是医院临床都有着重要意义。现有的测定DPPI的方法为ELISA法或者WESTENBLOTTING法，耗时长且耗资高，而结果只能说明样品中有或无DPPI蛋白质的存在但无法表明DPPI酶活性功能的存在和变化。我们前期专利技术的荧光仪高通量方法检测血清中DPPI的活性已经能够表明样品中DPPI酶活性的存在和变化，但问题一是制备血清过程长，病人血的用量大；二是实验仪器昂贵，属于大型分析仪器，保养维护昂贵复杂；三是单个样品检测成本较高，不能实现现场检测。所以，建立简单易行耗时耗资少的DPPI活性表达的检测的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种涉及到血液二肽肽酶I活性表达的体外快速检测方法，特征在于用于纸层析法进行检测，步骤如下：A.准备工作：底物XYZ1601的制备：以7‑氨基‑4‑三氟甲基香豆素与BOC‑苯丙氨酸通过生成酰胺的方法获得BOC‑苯丙氨酸‑三氟甲基香豆，在三氟乙酸的条件下脱去BOC保护，再与BOC‑甘氨酸反应，生成BOC‑甘氨酸‑苯丙氨酸‑三氟甲基香豆素，最后脱去BOC得到XYZ1601的方法；缓冲液的准备：XYZ1601‑‑DPPI专属底物0.5mM溶于缓冲液(25mM柠檬酸,10mM氯化钠，pH 6.0)；样液的准备：rhDPPI溶液、人鲜血和CIA大鼠眼眶取新鲜血液1μL，加入1.65μL的XYZ1601，...

【技术特征摘要】
1.一种涉及到血液二肽肽酶I活性表达的体外快速检测方法，特征在于用于纸层析法进行检测，步骤如下：A.准备工作：底物XYZ1601的制备：以7-氨基-4-三氟甲基香豆素与BOC-苯丙氨酸通过生成酰胺的方法获得BOC-苯丙氨酸-三氟甲基香豆，在三氟乙酸的条件下脱去BOC保护，再与BOC-甘氨酸反应，生成BOC-甘氨酸-苯丙氨酸-三氟甲基香豆素，最后脱去BOC得到XYZ1601的方法；缓冲液的准备：XYZ1601--DPPI专属底物0.5mM溶于缓冲液(25mM柠檬酸,10mM氯化钠，pH6.0)；样液的准备：rhDPPI溶液、人鲜血和CIA大鼠眼眶取新鲜血液1μL，加入1.65μL的XYZ1601，37℃孵育10-20分钟；展开剂准备：石油醚和二氯甲烷，比例为2:1配制成展开液；B.点样和层析...

【专利技术属性】
技术研发人员：周晓鹰，王晶晶，储奕，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32