本发明专利技术公开了一种特异性识别人非B细胞来源的免疫球蛋白(non-BIg)重链可变区的单克隆抗体RP215的应用，其特征在于：利用免疫组化技术，通过RP215染色病理评分判定肺癌分化程度、转移情况以及肿瘤患者预后，以及用于制备一种检测肺癌分化，转移及预后的免疫组化试剂盒。本发明专利技术的方案对提高临床和科研工作中对肺癌预后的准确性具有重要的应用价值，为肿瘤个体化诊治方案提供依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学
，涉及特异性识别人非B细胞来源免疫球蛋白分子 重链可变区的单克隆抗体RP215在判定肺癌及其他肿瘤分化程度、转移情况以及预后中的 应用。本专利技术同时涉及一种检测肺癌分化，转移及预后的免疫组化试剂盒。
技术介绍
-，肺癌诊断及预后标志物研究现状 肺癌是世界上死亡率最高的疾病之一，每年大概有100万人死于肺癌。虽然在过去的 数十年中，针对肺癌的研究有了巨大进展，但肺癌病人的五年生存率仍然很低。目前肿瘤结 节转移（TNM)分期系统是国际上广泛认可的，用于对肺癌进行预后分析的方法。但TNM分期 并不能很准确的预测肺癌病人的生存期，这就使得寻找更好，更有效的预后标志物成为必 需。经过多年的研究，目前，人们已经发现了一些肺癌相关的标志分子，例如，生物分子P63， p40和角蛋白5/6 (CK5/6)可作为肺鳞癌的诊断标志物；甲状腺转录因子1 (TTF-1)，和天 门冬氨酸蛋白酶A (Napsin A)可用于肺腺癌的诊断等。但这些标志分子在预测肺癌病人 生存率上准确性仍然很低。因此，寻找更有效的肺癌预后标志物，已成为肺癌治疗的当务之 急。 二，非B细胞免疫球蛋白研究现状 传统的免疫学理论认为免疫球蛋白基因仅在B淋巴细胞发育过程中进行选择性重排， 故免疫球蛋白是B淋巴细胞的特征性产物。但1996年，邱晓彦等通过免疫组化、Western Blot等发现在多种上皮性恶性肿瘤细胞的胞浆中存在与免疫球蛋白抗原性相同且分子结 构相似的蛋白分子，而其它正常上皮细胞均为阴性反应（中国免疫学杂志；1996,5 :296); 随后邱晓彦等又分别从蛋白水平和mRNA水平证实Ig分子在非B细胞来源的肿瘤细胞中 表达；并且发现应用Ig特异的反义寡核苷酸以及抗Ig抗体都可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制其 生长（CANCER RESEARCH 63，6488 - 6495，October 1,2003)。目前，我们课题组对于肿瘤 来源Ig生物学活性的研究已有了很大发展。我们的研究发现，体外利用AS0DN或抗人IgG 抗体来抑制肿瘤来源IgG可增加细胞程序性凋亡，抑制细胞生长。在裸鼠体内实验中，抗人 IgG抗体可以抑制分泌IgG的癌细胞系Hela MR的生长。而且，不只是肿瘤细胞，一些增殖 旺盛的上皮细胞也会表达Ig，增生的乳腺细胞、肝硬化中增殖的肝细胞和癌巢周围的上皮 组织中均有Ig分布。在癌前病变中Ig的表达出现上调，说明肿瘤细胞分泌的Ig可能对 癌症的发生有重要作用，具有促进肿瘤细胞生长和维持其生存的作用。目前上述发现已经 得到国内外几个课题组的证实和认可（Cancer Res, 2006. 66(8): ρ· 3996-4000 ;Cancer Biomark.，2009. 5(4): p. 177-188)。但在过去的10年里，我们课题组及其他的课题组 都应用以循环血Ig分子作为免疫原制备的单克隆或多克隆抗体(商品化)，通过免疫组化、 Western blot等方法发现了 Ig分子、特别是IgG分子在多种非免疫细胞来源的肿瘤组织及 一些正常组织细胞中高表达。但用该类抗体没有发现IgG在正常组织中上皮的基底细胞及 胆管上皮细胞等具有强分裂能力及迁移能力的细胞及肿瘤肝细胞中高水平表达，并参与细 胞迁移及干细胞的功能。 三，RP215来源及研究现状 加拿大英属哥伦比亚大学的Lee课题组早在上个世纪80年代，为了获得特异性识别 卵巢癌的单克隆抗体，曾用卵巢癌细胞系提取的蛋白免疫动物，获得了近3000株杂交瘤细 胞，在筛选的过程中发现，其中有一株杂交瘤细胞，称之为RP215,能够很好地识别卵巢癌 细胞而不识别正常卵巢细胞，但当时不清楚其所识别的抗原是什么，暂取命名为"CA215"。 后来发现，RP215不但能够很好地识别卵巢癌，同时在对其它类型的肿瘤细胞识别中也显示 了良好的特异性，由此将CA215定义为"pan-cancer marker"。2007年，Lee课题组对CA215 进行了鉴定。他们用亲和层析的方法，从卵巢癌细胞系培养上清中获得了大量的"CA215"， 质谱鉴定所提供的32条肽段均为IgG的重链，为了进一步确认这一结果，他们又用纯化 的"CA215"作为抗原制备了 5株特异性单抗，实验结果证实，所有5个单抗都识别IgG分 子（Cancer Biol Ther, 2008. 7(12): ρ· 2007-14·)。至此，证明了 CA215 就是癌胞表达 的IgG (Cancer Biol Ther.，2009. 8(2): ρ· 161-6)。随后的结果证实，癌细胞表达的 IgG在糖基化修饰与循环中IgG有明显差异。RP215所识别的表位正是这类IgG重链可变 区特有的糖基类相关表位。尽管已有报道RP215可用于临床肿瘤病人的血清检测（Cancer Biomark.，2009. 5(4): p. 177-88.)，但这种抗体在判定肺癌肿瘤分化程度、转移情况 以及病人预后中的应用还没有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种特异性识别人非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可 变区的单克隆抗体RP215的应用，利用免疫组化技术，通过RP215染色评分评估肺癌肿瘤分 化程度，转移情况以及预测肿瘤患者预后，本专利技术也提供一种检测肺癌分化，转移及预后的 试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有识别非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可变区的 抗体RP215。 本专利技术的第一方面，提供一种特异性识别人非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可 变区的单克隆抗体RP215的应用，用于评估肺癌肿瘤的分化程度高低。 本专利技术的第二方面，提供一种特异性识别人非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可 变区的单克隆抗体RP215的应用，用于评估肺癌肿瘤的转移性高低。 本专利技术的第三方面，提供一种特异性识别人非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可 变区的单克隆抗体RP215的应用，用于预测肺癌的预后情况。 本专利技术的第四方面，提供一种检测肺癌分化，转移及预后的试剂盒，所述试剂盒中 包括： 1，人非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可变区的单克隆抗体RP215,纯化自经RP215杂 交瘤免疫的小鼠腹水。 2，30 %过氧化氢（H202)溶液。 3,封闭液：正常羊血清工作液。 4,抗原修复液：Tris-EDTA(pH 9.0)缓冲液（EDTA 0.555g，Tris 1.875g，加水定 容至1. 5L，pH用盐酸调节为9. 0)。 5,免疫组化二抗显色试剂(购自DAK0公司）。 本专利技术可以以以下形式实现：提供一种识别非B细胞来源免疫球蛋白分子重链 可变区的抗体RP215试剂盒用于肿瘤分化程度的评估，所述肿瘤为肺癌，前列腺癌，膀胱 癌，乳腺癌。提供一种识别非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可变区的抗体RP215试剂盒 用于评估肿瘤转移情况的评估，所述肿瘤为肺癌，前列腺癌，膀胱癌，乳腺癌。提供一种识 别非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可变区的抗体RP215试剂盒，用于评估肿瘤预后的评 估，所述肿瘤为肺癌，前列腺癌，膀胱癌，乳腺癌。 本专利技术的方案在提高临床上对肺腺癌分化程度，转移情况及预后的准确性具有重 要的应用价值。本专利技术的方案除了可以应用于肿瘤鉴定，还可以应用于其他科研工作本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种识别非B细胞来源免疫球蛋白分子重链可变区的抗体RP215的应用，其特征在于：通过RP215染色评分评估肺癌肿瘤分化程度，用于肺癌中的低分化肿瘤与中、高分化肿瘤的区分与鉴别。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：邱晓彦，刘洋，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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