一种猪用疫苗载体制造技术

本发明专利技术公开了一种猪瘟用疫苗载体，属于生物医药领域。本发明专利技术的制备方法采用克隆猪IgG Fc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒，重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Western blot分析和共聚焦显微镜分析；重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验。本发明专利技术制备的表面展示猪IgG Fc重组杆状病毒在猪血清中具有较强的存活能力，可逃逸给血清补体对病毒的清除，从而提高疫苗免疫的有效抗原含量。

A Vaccine Vector for Swine

The invention discloses a vaccine carrier for classical swine fever, which belongs to the field of biomedicine.* The preparation method of the invention is to clone the pig IgG Fc gene and the classical swine fever virus E2 gene, and to connect with the baculovirus surface display vector to obtain the recombinant transfer vector; the recombinant transfer vector obtains the recombinant baculovirus Bacmid vector through the Tn7 transposition; the recombinant Bacmid is transfected into insect cells by liposome method, and the supernatant of the culture supernatant is collected to obtain the recombinant baculovirus, and the recombinant baculovirus is infected with Kunming virus. Insect cells were collected and analyzed by Western blot analysis and confocal microscopy. The efficacy of recombinant baculovirus vector was tested in pigs. The recombinant baculovirus expressed on the surface of pig IgG Fc has strong viability in pig serum, and can escape to the complement of the serum to remove the virus, thereby enhancing the effective antigen content of vaccine immunity.

【技术实现步骤摘要】
一种猪用疫苗载体
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种猪用疫苗载体。
技术介绍
杆状病毒(Baculovirus)是一种以昆虫为唯一宿主的病毒，可用做生物杀虫剂或作为表达载体在昆虫细胞中大量表达外源蛋白，制备疫苗。研究发现，在哺乳动物细胞中携带哺乳动物启动子的重组杆状病毒能启动下游外源基因的表达但病毒不能在哺乳动物细胞中增值，对细胞毒性小，转导成功的细胞可以稳定传代并有效表达外源基因，哺乳动物细胞比昆虫细胞对蛋白质具有更好的翻译后修饰，表达出的蛋白结构更接近天然蛋白。因此，杆状病毒可作为一种新型的哺乳动物细胞基因转移载体，用于表达外源基因及作为一种基因治疗载体，具有巨大潜力，日益受到人们的关注。杆状病毒能够进入哺乳动物体内的某些细胞，但是在这些细胞内不能进行复制。研究人员利用这个特点将其改造为一个携带基因的工具，并进行一定的修饰加工，将其改造成定向携带的载体，携带基因、药物到达指定的部位。但是，杆状病毒对机体来说毕竟是一个异类，机体对它有免疫作用，这不利于病毒进入指定部位，为了解决这个问题，就在杆状病毒基因内部引入了补体抑制分子，补体抑制分子的引入能够抑制机体对重组病毒的免疫应答本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪用疫苗载体，其特征在于：所述载体的制备方法包括以下步骤：1)克隆猪IgG Fc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；2)重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；3)重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒；4)重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Western blot分析和共聚焦显微镜分析；5)重组杆状病毒做补体拮抗活性检测；6)重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验；所述的步骤1)中猪IgG Fc基因序列为序列表中的SEQ ID NO:1；所述的步骤1)中猪瘟病毒E2基因序列为序列表中的SEQ...

【技术特征摘要】
1.一种猪用疫苗载体，其特征在于：所述载体的制备方法包括以下步骤：1)克隆猪IgGFc基因和猪瘟病毒E2基因，与杆状病毒表面展示载体连接，获得重组转移载体；2)重组转移载体通过Tn7转座获得重组杆状病毒Bacmid载体；3)重组Bacmid用脂质体方法转染昆虫细胞，收集培养物上清，获得重组杆状病毒；4)重组杆状病毒感染昆虫细胞，收集细胞做Westernblot分析和共聚焦显微镜分析；5)重组杆状病毒做补体拮抗活性检测；6)重组杆状病毒猪瘟载体在猪体做疫苗效力检验；所述的步骤1)中猪IgGFc基因序列为序列表中的SEQIDNO:1；所述的步骤1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜恩岐，
申请(专利权)人：陕西诺威利华生物科技有限公司，武汉中拓康明生物科技有限公司，陕西溯源农业发展有限公司，黄光东，
类型：发明
国别省市：陕西,61