一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，本发明专利技术通过设计HSL基因特异性引物对，内参引物GAPDH的qPCR扩增，以及对qPCR结果的相对定量分析，准确、快速地分析了HSL基因在牛肌肉中的表达情况。本发明专利技术所建立的检测HSL基因表达水平的qPCR检测方法，可用于精确检测不同品种牛肌肉HSL基因的表达水平。该发明专利技术所述方法可用于检测不同品种牛肌肉HSL基因的表达水平，对深入研究牛HSL基因功能提供参考，方法简便，易操作。

【技术实现步骤摘要】
一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法
本专利技术涉及基因工程领域，特别指一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法。
技术介绍
激素敏感性酯酶(Hormone-sensitiveLipase，HSL)是动物脂肪代谢过程中的关键酶，在HSL的作用下，甘油三酯，甘油二酯、甘油一酯和胆固醇酯等脂质及其他水溶性底物可以被水解成甘油和脂肪酸，从而满足动物体的需要。HSL的活性因在机体的不同位置而具有不同的调节机制，肌肉中HSL的活性主要通过儿茶酚胺(去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺)及肌肉收缩调节，在儿茶酚胺的作用下β肾上腺素受体以及cAMP刺激HSL的活性；肌肉收缩可引起肾上腺素大量增加，同时ERK的磷酸化也增加，从而引起HSL活性的增加，但在此过程中HSL的表达并未受到影响。另外，HSL的活性及其作用机制受到复杂的级联反应机制调控，机体不同生理状态下的不同激素平衡状态会使得HSL的活性及其作用机制发生相应的变化。胰高血糖素、去甲肾上腺素和肾上腺素等可以快速促进脂肪分解代谢，它们作用于脂肪细胞质膜表面特异性受体，从而激活腺昔酸环化酶，活化无活性的HSL，进而发挥促进脂肪分解作用。生长激素、糖皮质激素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：1)从待检测的牛肉组织中提取总RNA，再通过反转录反应制备cDNA样品；2)将制备的cDNA样品进行荧光定量实时PCR检测，内参基因GAPDH的qPCR扩增反应体系为：

【技术特征摘要】
1.一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：1)从待检测的牛肉组织中提取总RNA，再通过反转录反应制备cDNA样品；2)将制备的cDNA样品进行荧光定量实时PCR检测，内参基因GAPDH的qPCR扩增反应体系为：RremixExTaqTMII10.0μL，ddH2O8μL，G-F0.5μL，G-R0.5μL，牛的肌肉组织cDNA1.0μL；牛HSL基因的qPCR扩增反应体系为：RremixExTaqTMII10.0μL，ddH2O8μL，H-F0.5μL，H-R0.5μL，牛肌肉组织cDNA1.0μL；3)在定量PCR仪上进行检测，荧光信号在每个循环结束时检测，每个样品3个重复，计算牛HSL基因的表达量。2.根据权利要求1所述的一种检测牛肌肉HSL基因表达量的方法，其特征在于：所述引物对G-F和G-R的序列为...

【专利技术属性】
技术研发人员：敖日格乐，斯木吉德，王纯洁，
申请(专利权)人：内蒙古农业大学，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15