一种RNA提取方法技术

本发明专利技术公开了一种RNA提取方法，具体步骤如下：1)先用提取液A保存的组织或细胞；再向提取液A保存的组织或细胞中加入提取液B，混匀获得混合物；2)从组织中提取RNA时，将混合物进行超声破碎；3)从细胞中提取RNA时，直接进行下述步骤5)中的操作；4)将超声破碎后的混合物颠倒混匀；5)在步骤3)从细胞提取RNA的混合物或步骤4)的混合物中，加入氯仿离心，取上层液体；6)在上层液体中加入异丙醇再离心获得沉淀物；7)向沉淀物中加入乙醇溶液，混匀后离心，弃去液体；8)最后加入水溶解。本发明专利技术通的方法速率快，不仅避免了组织破碎不完全、内源性RNA酶的干扰，而且大大缩短提取时间，进一步提高了RNA的提取效率。

【技术实现步骤摘要】
一种RNA提取方法
本专利技术属于生物制剂
，具体涉及一种RNA提取方法。
技术介绍
现代分子生物学实验、临床分子诊断中常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA，而RNA的质量高低常常会影响cDNA库、RT-PCR和NorthernBlot等分子生物学实验的成败。现在常用的方法是先通过组织保护液对组织进行保护，再采用提取液对组织或细胞中的RNA进行提取。常用的保护方式包括液氮保护和保护液保护，所述常用保护液包括RNAlater试剂和RNAsafety试剂。其中，液氮保护方式不仅所需条件苛刻，且成本较高，仅适合临时性的组织保护。而保护液通常也需要在低温下进行贮藏，且其中RNAlater溶液与TRIzol、硅胶柱和磁珠法的化学成分不兼容，RNAlater溶液中含有异硫氰酸铵，当组织块从RNAlater溶液中取出用于提取RNA时，若未将组织块上带有的RNAlater溶液清洗干净，则RNAlater溶液中的异硫氰酸铵会与提取液中的酚、SDS结合或反应生成沉淀，导致提取液成分和浓度改变，裂解不彻底，降低RNA的纯度和收率。因此，采用RNAlater溶液保存的组织或细胞在提取前通常需要进行反复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA提取方法，其特征在于：具体步骤如下：G1.先用提取液A保存的组织或细胞，所述提取液A包括1.2‑2.0mol/L的硫氰酸胍和0.5‑1.5mol/L的盐酸胍，且pH为4；G2.再向提取液A保存的组织或细胞中加入提取液B，颠倒混匀，获得混合物，所述提取液B包括以体积分数计的30‑65vt％的水饱和苯酚和9‑15vt％的甘油，余量为溶剂；提取液B还包括以摩尔浓度计的0.20‑1mol/L的硫氰酸胍、0.4‑0.8mol/L的硫氰酸铵和0.0073‑0.018mol/L的表面活性剂，且pH调节为4；G3.从组织中提取RNA时，将步骤G2得到的混合物进行超声破碎；从细胞中提取RNA时，直...

【技术特征摘要】
1.一种RNA提取方法，其特征在于：具体步骤如下：G1.先用提取液A保存的组织或细胞，所述提取液A包括1.2-2.0mol/L的硫氰酸胍和0.5-1.5mol/L的盐酸胍，且pH为4；G2.再向提取液A保存的组织或细胞中加入提取液B，颠倒混匀，获得混合物，所述提取液B包括以体积分数计的30-65vt％的水饱和苯酚和9-15vt％的甘油，余量为溶剂；提取液B还包括以摩尔浓度计的0.20-1mol/L的硫氰酸胍、0.4-0.8mol/L的硫氰酸铵和0.0073-0.018mol/L的表面活性剂，且pH调节为4；G3.从组织中提取RNA时，将步骤G2得到的混合物进行超声破碎；从细胞中提取RNA时，直接进行下述步骤G5中的操作；G4.将超声破碎后的混合物颠倒混匀；G5.在步骤G3从细胞提取RNA的混合物或步骤G4的混合物中，加入氯仿，混匀后离心，取上层液体；G6.在上层液体中加入异丙醇，混匀后离心，弃去液体，获得沉淀物；G7.向沉淀物中加入乙醇溶液，混匀后离心，弃去液体；G8.待乙醇挥发后加入水溶解。2.根据权利要求1所述的一种RNA提取方法，其特征在于：所述提取液B中的表面活性剂为十二烷基硫酸钠。3.根据权利要求1所述的一种RNA提取方法，其特征在于：所述提取液A采用盐酸调节pH值，所述提取液B采用乙酸调节pH值。4.根据权利要求1-3任一项所述的一种RNA提取方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为6.4mmol/L-19.20mmol/L的β-巯基乙醇。5.根据权利要求1-3任一项所述的一种RNA提取方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.05-0.15mmol/L的柠檬酸钾。6.根据权利要求1-3任一项所述的一种RNA提取方法其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为74.62μmol/L-223.87μmol/L的溴酚...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖东升，邱坤，赵伟，赵仲玖，
申请(专利权)人：成都导胜生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51