羊牙齿组织总RNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种羊牙齿组织总RNA的提取方法，它由如下步骤组成：用具及耗材的灭菌处理、样本采集与清洗、低温破碎、液氮研磨、裂解细胞、间歇式匀浆、分离DNA和蛋白质、沉淀RNA、洗涤RNA、RNA再溶解后保存于－80℃。本方法具有简单、快速、无需对牙齿进行脱钙、易操作等优点；提取的牙齿总RNA浓度高，纯度好，无需进行RNA纯化，减少了提取步骤，缩短了提取时间；且可以批量提取，可用于实时荧光定量PCR。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种羊牙齿组织总RNA的提取方法，其特征在于：它由如下步骤组成：A、用具及耗材的灭菌处理：减少外源RNase污染，将所有实验用具及耗材都先用0.1%的DEPC水浸泡24?h；实验耗材再经高压灭菌处理；B、样本采集与清洗：迅速拔取牙齿后，用灭菌手术刀刮净附着的牙龈等软组织及草垢，再以4℃灭菌生理盐水反复冲洗；C、低温破碎：冲洗后的牙齿用灭菌滤纸吸干水分，迅速放入液氮中进行低温冷冻处理，使得牙齿组织脆化而易于破碎，冷冻24～48?h后取出牙齿，用灭菌锡箔纸或纱布包裹牙齿，用灭菌处理过的铁锤，在液氮存在的情况下，迅速砸碎牙齿；D、液氮研磨：收集铁锤砸碎的牙齿碎块到预先盛有液氮的研钵中，进行研磨；研磨...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：韩天龙，李志明，王敏，赵瑞霞，毛冉，张艳明，
申请(专利权)人：赤峰市农牧科学研究院，
类型：发明
国别省市：