本发明专利技术公开一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤：将植物伤流液冷冻干燥，加入SDS，水浴；加入水饱和酚，涡旋，再加入氯仿，涡旋混匀，离心；取上清到新的离心管中，加入水饱和酚，涡旋混匀，再加入氯仿，涡旋混匀，离心；取上清加入水饱和酚，涡旋混匀，再加入氯仿涡旋混匀，离心；取上清加入氯仿，涡旋混匀，离心，取上清加入等体积异丙醇，静置；离心，倒掉上清，80%乙醇洗沉淀，100%乙醇再洗一次，离心，晾干RNA沉淀，加入DEPC水。本发明专利技术的植物伤流液RNA提取方法可以抑制伤流液中RNA降解，提高伤流液中RNA提取效率，本发明专利技术简化RNA提取程序，提高RNA获取数量，伤流液RNA提取量能满足反转录需要。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农业
，具体涉及一种植物伤流液RNA提取方法。
技术介绍
目前，提取植物组织RNA方法非常成熟，但是应用这些方法提取葡萄、黄瓜等植物伤流液中RNA，效果不理想，出现一下问题:1)提不出RNA ;2)伤流液中RNA降解快；3)提出的RNA量不足，不能满足反转录的需要。
技术实现思路
专利技术目的:本专利技术的目的是提供了一种植物伤流液RNA提取方法。技术方案:为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤: O将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/8-1/10，加入1300-1500 μ I的SDS，水浴65 0C 25- 30min ； 2 )加入200-400 μ I的水饱和酚，涡旋，再加入200-400 μ I氯仿，涡旋混匀，4 °C，12000~13000rpm 离心 8~10min ； 3)取1100-1300μ I上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，祸旋混勾，12000~13000rpm离心8~10min ； 4)取上清900-1100μ I加入上清液1/2体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/2体积的氯仿祸旋混勾，12000~13000rpm离心8~10min ； 5)取上清700-900μ I加入等体积氯仿，祸旋混勾，12000~13000rpm离心lOmin，取上清600-800 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上； 6)12000~13000rpm 离心 20min，倒掉上清，80% 乙醇 Iml 洗沉淀，12000~13000rpm,5~8min，100% 乙醇再洗一次，12000~13000rpm 离心 5min，晾干 RNA 沉淀，加入 30 μ I 的 DEPC水。其中，作为优选，步骤I)中的植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/10，加入1400 μ I的 SDS，水浴 65 0C 30min。其中，作为优选，步骤2)中加入300 μ I水饱和酚，涡旋，再加入300ul氯仿，涡旋混勾，4°C，13000rpm 离心 1min0其中，作为优选，步骤3)中取1200 μ I上清到新的离心管中，加入400 μ I水饱和酚，涡旋混匀，再加入400 μ I氯仿，涡旋混匀，13000rmp离心lOmin。其中，作为优选，步骤4)取上清1000 μ I加入500 μ I水饱和酸，涡旋混匀，再加入500ul氯仿祸旋混勾，13000rpm离心lOmin。其中，作为优选，步骤5)取上清800 μ I加入800 μ I氯仿，涡旋混匀，13000rpm离心lOmin，取上清700 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上。其中，作为优选，步骤6) 13000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇Iml洗沉淀，13000rpm, 5min, 100% 乙醇再洗一次，13000rpm 离心 5min，瞭干 RNA 沉淀，加入 30 μ IDEPC水。 有益效果:本专利技术的植物伤流液RNA提取方法可以抑制伤流液中RNA降解，提高伤流液中RNA提取效率，本专利技术简化了 RNA提取程序，提高RNA获取数量，伤流液RNA提取量能满足反转录需要。【附图说明】图1本专利技术实施例1~3提取的RNA凝胶电泳检测图； 图2本专利技术实施例1~3提取的RNA反转录后，cDNA凝胶电泳检测图； 图3对比例提取的RNA凝胶电泳检测图； 图4对比例提取的RNA反转录后，cDNA凝胶电泳检测图。【具体实施方式】下面对本专利技术技术方案进行详细说明，但是本专利技术的保护范围不局限于所述实施例。实施例1: 一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤:1)将5ml植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/10，加入1400μ 1SDS，水浴65°C 30min ； 2)加入300μ I水饱和酚，涡旋，再加入300 μ I氯仿，涡旋混匀，4°C，13000rpm离心1min ； 3)取1200μ I上清到新的离心管中，加入400 μ I水饱和酸，祸旋混勾，再加入400 μ I氯仿，祸旋混勾，13000rmp离心1min ； 4)取上清1000μ I加入500 μ I水饱和酚，涡旋混匀，再加入500 μ I氯仿涡旋混匀，13000rpm 离心 1min ； 5)取上清800μ I加入800 μ I氯仿，祸旋混勾，13000rpm离心1min,取上清700 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上； 6)13000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇Iml洗沉淀，13000rpm, 5min, 100%乙醇再洗一次，13000rpm离心5min，瞭干RNA沉淀，加入30 μ IDEPC水。 实施例2 一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤:1)将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/8，加入1300μ I的SDS，水浴65°C 25min ; 2)加入200μ I的水饱和酚，涡旋，再加入200 μ I氯仿，涡旋混匀，4°C，12000rpm离心8min ； 3)取1100μ I上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，祸旋混勾，12000rpm离心8min ； 4)取上清900μ I加入上清液1/2体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/2体积的氯仿祸旋混勾，12000rpm离心8min ；5)取上清700μ I加入等体积氯仿，祸旋混勾，12000rpm离心lOmin，取上清600 μ I加入等体积异丙醇，_20°C静置5h以上； 6)12000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇Iml洗沉淀，12000rpm, 8min, 100%乙醇再洗一次，12000rpm离心5min，瞭干RNA沉淀，加入30 μ I的DEPC水。 实施例3 一种植物伤流液RNA提取方法，包括以下步骤: 1)将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/9，加入1500μ I的SDS，水浴65°C 30min ; 2)加入400μ I的水饱和酚，涡旋，再加入400 μ I氯仿，涡旋混匀，4°C，12500rpm离心9min ； 3)取1300μ I上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，祸旋混勾当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种植物伤流液RNA提取方法，其特征在于：包括以下步骤：1）将植物伤流液冷冻干燥至原体积的1/8‑1/10，加入1300‑1500μl的SDS，水浴65℃25~ 30min；2）加入200‑400μl的水饱和酚，涡旋，再加入200‑400μl氯仿，涡旋混匀，4℃，12000~13000rpm离心8~10min；3）取1100‑1300μl上清液到新的离心管中，加入1/3体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/3体积的氯仿，涡旋混匀，12000~13000rpm离心8~10min；4）取上清900‑1100μl加入上清液1/2体积的水饱和酚，涡旋混匀，再加入上清液1/2体积的氯仿涡旋混匀，12000~13000rpm离心8~10min；5）取上清700‑900μl加入等体积氯仿，涡旋混匀，12000~13000rpm离心10min，取上清600‑800μl加入等体积异丙醇，‑20℃静置5h以上；6）12000~13000rpm离心20min，倒掉上清，80%乙醇1ml洗沉淀，12000~13000rpm，5~8min，100%乙醇再洗一次，12000~13000rpm离心5min，晾干RNA沉淀，加入30μl的DEPC水。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：解振强，王剑，贾思振，魏跃，冯英娜，刘叶琼，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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