一种用于PCR扩增的畜禽粪便总DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于PCR扩增的畜禽粪便总DNA的提取方法，包括如下步骤：(1)采集新鲜畜禽粪便样品或冻存的粪便样品为材料，制备菌体悬浮液；(2)取所述菌体悬浮液，加入异硫氰酸胍裂解液进行初步裂解，然后离心；(3)离心后取上清液，转入SDS提取液中，然后离心取沉淀；(4)将所得沉淀用SDS裂解液再次裂解，裂解后经离心、洗涤即得总DNA。本发明专利技术的方法可快速、简便、经济、低毒、易行的从畜禽粪便中提取总DNA。

【技术实现步骤摘要】
一种用于PCR扩增的畜禽粪便总DNA的提取方法
本专利技术涉及一种从猪粪便样品中提取总DNA的方法，属于微生物学和分子生物学

技术介绍
目前，畜禽粪便污染问题已成为当前农业面源污染的主要污染源之一。作为“人畜共患病”传播载体畜禽粪便，含有大量的致病菌，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、猪流感病毒、禽流感病毒等。因此，有必要对畜禽粪便中的致病菌种类和数量进行检测。例如，公开号为CN108760954A的中国专利技术专利申请公开了一种用于检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法，将样本经β-葡萄糖醛酸酶酶解之后，经乙腈/水溶液(84/16，v/v,含10％NaCl)超声提取、离心、浓缩、复溶后直接在TQS三重四级杆液相色谱串联质谱仪中以甲醇和5mmol/L醋酸铵的水溶液(含0.1％甲酸)作为流动相进行梯度洗脱分析，15种真菌毒素能够达到有效分离。公告号为CN208234910U的中国技术专利公开了一种粪便病菌分离与检测装置，其中：外壳两侧壁之间通过螺栓固定安装有支撑板，支撑板内设有轴孔，离心电机通过安装板固定安装在支撑板的下表面处，转轴的底端与离心电机的输出端固定连接，且转轴的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于PCR扩增的畜禽粪便总DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采集新鲜畜禽粪便样品或冻存的粪便样品为材料，制备菌体悬浮液；(2)取所述菌体悬浮液，加入异硫氰酸胍裂解液进行初步裂解，然后离心；(3)离心后取上清液，转入SDS裂解液中，然后离心取沉淀；(4)将所得沉淀用SDS裂解液再次裂解，裂解后经离心、洗涤即得总DNA。

【技术特征摘要】
1.一种用于PCR扩增的畜禽粪便总DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)采集新鲜畜禽粪便样品或冻存的粪便样品为材料，制备菌体悬浮液；(2)取所述菌体悬浮液，加入异硫氰酸胍裂解液进行初步裂解，然后离心；(3)离心后取上清液，转入SDS裂解液中，然后离心取沉淀；(4)将所得沉淀用SDS裂解液再次裂解，裂解后经离心、洗涤即得总DNA。2.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，所述异硫氰酸胍裂解液为5mol/L异硫氰酸胍裂解液。3.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤(3)和步骤(4)中所述SDS裂解液的配方：45mMTris-氯化钠(pH8.1)，1％SDS，1mM磷酸盐缓冲液，0.02mMβ-甘油磷酸酯，0.01mM邻戊酸钠，0.01mM氟化钠，1mMEDTA，0.01mMβ-巯基乙醇。4.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤(1)中制备菌体悬浮液的方法如下：采集新鲜粪便样品或冻存的粪便样品为材料，称取2g粪便置于0.1mol/L磷酸盐缓冲液30mL中并充分涡旋混匀，500rpm离心5min，离心3次，去除离心管底部固体物，收集上清液；10000rpm离心5min，收集菌体，再用20mL磷酸盐缓冲液洗涤3次；最后，将菌体重悬于5mL磷酸盐缓冲液中于4℃保存，备用。5.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步骤(2)中：取1mL所收集的菌体置于装有2mL异硫氰酸胍裂解液5mL离心管中，振荡混匀，放置5min；然后加入与异硫氰酸胍裂解液等体积的无水乙醇，颠倒反复混匀15s；最后12,000rpm离心1min。6.根据权利要求1所述提取方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：周玉央，李娜，陈婷，沈东升，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33