用于鼻咽癌筛查的方法和装置制造方法及图纸

公开了用于鼻咽癌筛查的方法和装置。所述方法包括提供来自于受试者的鼻咽样品，从所述样品分离DNA，使用实时PCR由所述DNA扩增并检测至少一个EBV靶序列，其中小于或等于31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述受试者有鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险。用于获得刷拭活检样品的装置包括具有第一端和第二端的纵轴，其中至少两个刷头从所述轴的第二端延伸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案的交叉引用本申请要求保护2013年10月4日提交的美国临时申请第61/886,807号的优先权的权益，其内容通过引用整体并入本文。
本公开涉及用于筛查鼻咽癌的方法、组合物和装置。专利技术背景鼻咽癌症(NPC)是流行地区如太平洋和地中海沿岸国家及亚北极地区中年受试者高度流行的恶性肿瘤。NPC是中国南方因病死亡的主要原因。遗传和环境因素促成肿瘤风险，并且在NPC流行区的高发病率和高人口密度使得NPC成为全球的常见癌症。估计全球的高危人群为13-15亿人。每年在北美约有500个新病例，在香港和台湾有5000个病例并且全世界有100,000个病例(Ung1999)。NPC因为其与人γ疱疹病毒4、爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-BarrVirus)(EBV)密切、接近绝对的关联，所以是不常见的癌症，每个肿瘤细胞隐匿多个拷贝的在早期、侵袭前病变中已经可检测的相同病毒克隆(Pathmanathan1995)。NPC出现在鼻后远侧空间，这里NPC可发展很少症状，并且在转移组织中首次诊出并不罕见，因此预后不良(Skinner1990；Ho1998)。尽管在相关人口中发病率和意识越来越高，但是NPC的现实仍受后期诊断而控制，通常通过鼻咽镜检查，在早期检测到的肿瘤预后良好(Liu1998)。数十年来，EBV和NPC之间的密切关联已经吸引了为改进对NPC风险的临床诊断的尝试。Raab-Traub(1987)证明所有组织学子集的NPC均含EBVDNA。虽然EBV血清学的大型调查描绘了显著关联(例如Zeng1986)，但是几乎所有人类的泛在EBV载体状态妨碍EBV血清学得到临床应用(Ho1998)。血清学高度灵敏但是缺乏特异性。1992年首次证明了通过分子生物学手段检测EBV基因组进行鼻后活检的诊断希望(Feinmesser1992)。虽然生物样品中EBV基因组的分子检测已经成为健全常规程序，但是从小型学术研究(Tune1999)到常规流动式应用的转变因为缺乏专用、一次性活检仪器并且需要快速、局部DNA分离以免DNA降解，所以很困难。两者均提出挑战，尤其是在具有不同技术基础设施水平的流行区。专利技术概述本专利技术人已经开发了一种用于筛查鼻咽癌症的高特异性和高灵敏度方法。因此，本公开提供了一种在测试受试者中检测NPC或发展NPC的风险的方法，其包括(a)提供鼻咽样品，(b)从所述样品分离DNA及(c)使用实时PCR由所述DNA扩增并检测至少一个EBV靶序列，其中小于或等于31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险。在一个实施方案中，28至31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有发展鼻咽癌的风险。在另一个实施方案中，小于或等于28的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有鼻咽癌。循环阈值(Ct)可用于计算爱波斯坦-巴尔病毒检测水平(EDL)。具体而言，Ct值可用于通过使用以对照EBV样品生成的标准曲线测定EBV拷贝数。EBV拷贝数的对数提供了EDL。表15展示了Ct值、EBV拷贝和EDL之间的相关性。在一个实施方案中，大于或等于2.7的EDL表明受试者患有NPC。在另一个实施方案中，小于1.7的EDL表明受试者未患NPC。再一个实施方案中，介于1.7和2.6之间的EDV是不明确的结果并且测试受试者应在合适的间隔，例如6至8周复检。在一个实施方案中，由刷拭活检提供鼻咽样品。在另一个实施方案中，鼻咽样品包含上皮细胞。在另一个实施方案中，由40-60ng，任选约50ng的DNA扩增所述至少一个EBV靶序列。在另一个实施方案中，所述至少一个EBV靶序列在EBNA1基因中。在另一个实施方案中，使用对应于SEQIDNO:1和2的引物扩增所述至少一个EBV靶序列。在另一个实施方案中，使用对应于SEQIDNO:4的探针检测所述至少一个EBV靶序列，其中所述探针在5’-末端标记有报告因子荧光团而在3’-末端标记有猝灭因子荧光团。本专利技术人还已开发了用于获得刷拭活检的改进装置。在一个实施方案中，刷拭活检装置用于获得可以用于本文描述的方法中的鼻咽样品。因此，本公开提供了一种用于获得刷拭活检样品的装置，其包括具有第一端和第二端的纵轴，其中至少两个刷头从所述轴的第二端延伸。在一个实施方案中，所述至少两个刷头包括连接到刷轴上的接触区，所述刷轴从所述轴的第二端延伸。在另一个实施方案中，接触区包括采样表面。在另一个实施方案中，采样表面包括带毛表面、锯齿形表面、蜂巢表面、锯齿表面或多孔表面。在另一个实施方案中，所述至少两个刷头通过颈区连接到所述轴的第二端。在另一个实施方案中，颈区呈0至90度，任选地约65至75度角延伸到所述轴的纵轴线。在另一个实施方案中，刷头从颈区呈0至90度，任选地约65至75度角延伸。在另一个实施方案中，所述至少两个刷头通过刷接头区相互连接。在另一个实施方案中，所述两个刷头相互平行。在另一个实施方案中，所述两个刷头之间的距离为0.5cm至5.0cm，任选地约1.0至2.0cm。在另一个实施方案中，所述两个刷头从所述第二端向外延伸形成V形。在另一个实施方案中，所述V形的角度为10至150度，任选地约20至90度。在另一个实施方案中，在V形的最宽处所述两个刷头之间的距离为0.5至5.0cm，任选地1.0至2.0cm。在另一个实施方案中，接触区可从刷轴上拆卸。在另一个实施方案中，所述轴呈叶片或杆状。在另一个实施方案中，所述轴长度为5至30cm或任选地长度为约13至19cm。本公开还提供了一种用于获得刷拭活检样品的装置，其包括具有第一端和第二端的纵轴及从所述轴的第二端延伸的至少一个刷头，其中所述至少一个刷头可在第一未充气位置和第二充气位置之间移动。在一个实施方案中，刷头在第一未充气位置未伸长而在第二充气位置伸长。在另一个实施方案中，刷头为1至10cm，任选地3至7cm，在所述第二伸长位置比在所述第一未伸长位置更长。在另一个实施方案中，刷头包括可充气接触区和刷轴。在另一个实施方案中，刷头的接触区包括用于提供活检样品的采样表面。在另一个实施方案中，采样表面包括少于50％、40％、30％、20％或10％的接触区。在另一个实施方案中，采样表面在第一未充气位置在接触区的内部而在第二充气位置在接触区的外部。在另一个实施方案中，采样表面包括带毛表面、刷面、锯齿形表面、蜂巢表面、锯齿表面或多孔表面。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在测试受试者中检测鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险的方法，其包括：a.提供来自于所述受试者的鼻咽样品，b.从所述样品分离DNA，c.使用实时PCR由所述DNA扩增并检测至少一个EBV靶序列，其中小于或等于31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.04 US 61/886,8071.一种在测试受试者中检测鼻咽癌或发展鼻咽癌的风险的方法，其包括：
a.提供来自于所述受试者的鼻咽样品，
b.从所述样品分离DNA，
c.使用实时PCR由所述DNA扩增并检测至少一个EBV靶序列，
其中小于或等于31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受试者有鼻咽癌或发展鼻
咽癌的风险。
2.根据权利要求1所述的方法，其中28至31.5的实时PCR循环阈值次数表明所述测试受
试者有发展鼻咽癌的风险。
3.根据权利要求1所述的方法，其中小于或等于28的实时PCR循环阈值次数表明所述测
试受试者有鼻咽癌。
4.根据权利要求1所述的方法，其还包括测定爱波斯坦-巴尔病毒检测水平(EDL)，其中
大于或等于2.7的EDL表明所述测试受试者有鼻咽癌。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中由刷拭活检提供所述鼻咽样品。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述鼻咽样品包含上皮细胞。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中由40-60ng，任选约50ng的DNA扩增所述
至少一个EBV靶序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述至少一个EBV靶序列在EBNA1基因
中。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中使用对应于SEQIDNO:1和2的引物扩增
所述至少一个EBV靶序列。
10.根据权利要求7或8所述的方法，其中使用对应于SEQIDNO:4的探针检测所述至少一
个EBV靶序列，其中所述探针在5’-末端标记有报告因子荧光团而在3’-末端标记有猝灭因
子荧光团。
11.一种用于获得刷拭活检样品的装置，其包括具有第一端和第二端的纵轴，其中至少
两个刷头从所述轴的第二端延伸。
12.根据权利要求11所述的装置，其中所述至少两个刷头包括连接到刷轴上的接触区，
所述刷轴从所述轴的第二端延伸。
13.根据权利要求12所述的装置，其中所述接触区包括采样表面。
14.根据权利要求13所述的装置，其中所述采样表面包括带毛表面、锯齿形表面、蜂巢
表面、锯齿表面或多孔表面。
15.根据权利要求11-14中任一项所述的装置，其中所述至少两个刷头通过颈区连接到
所述轴的第二端。
16.根据权利要求15所述的装置，其中所述颈区呈0至90度，任选地约65至75度角延伸
到所述轴的纵轴线。
17.根据权利要求15所述的装置，其中所述刷头从所述颈区呈0至90度，任选地约65至
75度角延伸。
18.根据权利要求11-17中任一项所述的装置，其中所述至少两个刷头通过刷接头区相
互连接。
19.根据权利要求11-18中任一项所述的装置，其中所述两个刷头相互平行。
20.根据权利要求19所述的装置，其中所述两个刷头之间的距离为0.5cm至5.0cm，任选
地约1.0至2.0cm。
21.根据权利要求11-18中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·H·W·黄，
申请(专利权)人：世程发展公司，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA