利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法技术

本发明专利技术公开利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，1)先用提取液A保存的组织或细胞；再向提取液A保存的组织或细胞中加入提取液B，混匀获得混合物；2)从组织中提取RNA时，将混合物进行超声破碎；3)从细胞中提取RNA时，直接进行下述步骤5)中的操作；4)将超声破碎后的混合物颠倒混匀；5)在步骤3)从细胞提取RNA的混合物或步骤4)的混合物中，加入氯仿离心，取上层液体；6)在上层液体中加入异丙醇再离心获得沉淀物；7)向沉淀物中加入乙醇溶液，混匀后离心，弃去液体；8)最后加入水溶解。本发明专利技术采用组织消融仪消融组织，速率快，避免了组织破碎不完全、内源性RNA酶的干扰，而且缩短提取时间，提高了RNA的提取效率。

【技术实现步骤摘要】
利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法
本专利技术属于生物制剂
，具体涉及利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法。
技术介绍
现代分子生物学实验、临床分子诊断中常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA，而RNA的质量高低常常会影响cDNA库、RT-PCR和NorthernBlot等分子生物学实验的成败。现在常用的方法是先通过组织保护液对组织进行保护，再采用提取液对组织或细胞中的RNA进行提取。常用的保护方式包括液氮保护和保护液保护，所述常用保护液包括RNAlater试剂和RNAsafety试剂。其中，液氮保护方式不仅所需条件苛刻，且成本较高，仅适合临时性的组织保护。而保护液通常也需要在低温下进行贮藏，且其中RNAlater溶液与TRIzol、硅胶柱和磁珠法的化学成分不兼容，RNAlater溶液中含有异硫氰酸铵，当组织块从RNAlater溶液中取出用于提取RNA时，若未将组织块上带有的RNAlater溶液清洗干净，则RNAlater溶液中的异硫氰酸铵会与提取液中的酚、SDS结合或反应生成沉淀，导致提取液成分和浓度改变，裂解不彻底，降低RNA的纯度和收率本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：包括步骤：G1.先用提取液A保存组织或细胞，所述提取液A包括1.2‑2.0mol/L的硫氰酸胍和0.5‑1.5mol/L的盐酸胍，且pH为4；G2.再向提取液A保存的组织或细胞中加入提取液B，颠倒混匀，获得混合物，所述提取液B包括以体积分数计的30‑65vt％的水饱和苯酚和9‑15vt％的甘油，余量为溶剂；提取液B还包括以摩尔浓度计的0.20‑1mol/L的硫氰酸胍、0.4‑0.8mol/L的硫氰酸铵和0.0073‑0.018mol/L的表面活性剂，且pH调节为4；G3.从组织中提取RNA时，将步骤G2得到的混合物利用基于...

【技术特征摘要】
1.利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：包括步骤：G1.先用提取液A保存组织或细胞，所述提取液A包括1.2-2.0mol/L的硫氰酸胍和0.5-1.5mol/L的盐酸胍，且pH为4；G2.再向提取液A保存的组织或细胞中加入提取液B，颠倒混匀，获得混合物，所述提取液B包括以体积分数计的30-65vt％的水饱和苯酚和9-15vt％的甘油，余量为溶剂；提取液B还包括以摩尔浓度计的0.20-1mol/L的硫氰酸胍、0.4-0.8mol/L的硫氰酸铵和0.0073-0.018mol/L的表面活性剂，且pH调节为4；G3.从组织中提取RNA时，将步骤G2得到的混合物利用基于超声原理的动植物组织消融仪进行超声破碎；从细胞中提取RNA时，直接进行下述步骤G5中的操作；G4.将超声破碎后的混合物颠倒混匀；G5.在步骤G3从细胞提取RNA的混合物或步骤G4的混合物中，加入氯仿，混匀后离心，取上层液体；G6.在上层液体中加入异丙醇，混匀后离心，弃去液体，获得沉淀物；G7.向沉淀物中加入乙醇溶液，混匀后离心，弃去液体；G8.待乙醇挥发后加入水溶解；所述基于超声原理的动植物组织消融仪，包括：电源、DCDC转换单元、主控单元、DCDC功率调节单元、驱动单元、变压单元、谐振单元、超声换能器和采样单元；所述电源，通过DCDC转换单元和DCDC功率调节单元转换电压后给动植物组织消融仪使用；主控单元，输出第一PWM信号控制DCDC功率调节单元输出可调电压，并通过采集变压单元的输出端回路电压和电流的采样单元的反馈，输出两路占空比互补的第二PWM信号至驱动单元并经过变压单元变压，然后通过设于变压单元的输出端回路中的谐振单元调节谐振点到超声振子的共振点，使得设于变压单元的输出端回路中的超声振子工作在谐振状态。2.根据权利要求1所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中的表面活性剂为十二烷基硫酸钠。3.根据权利要求1所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液A采用盐酸调节pH值，所述提取液B采用乙酸调节pH值。4.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为6.4mmol/L-19.20mmol/L的β-巯基乙醇。5.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.05-0.15mmol/L的柠檬酸钾。6.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为74.62μmol/L-223.87μmol/L的溴酚蓝。7.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于，所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.01-2mol/L的乙酸钠。8.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括体积分数为5-25％的异丙醇。9.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.689mmol/L-68.9mmol/L的8-羟基喹啉。10.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.5-1000mmol/L的DTT。11.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.5-5mol/L的尿素。12.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.1-500mmol/L的EDTA。13.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液B中还包括摩尔浓度为0.01-10mmol/L的乙酸铵。14.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述步骤G8中的水为双蒸水、去离子水或超纯水。15.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述提取液A和提取液B的总质量为组织或细胞质量的100-150倍。16.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述步骤G3中，超声功率为0.5-1000W，超声时间为0.5-30s。17.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述步骤G5中，氯仿的体积为混合物体积的0.1-0.4倍。18.根据权利要求1-3任意一项所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述步骤G6中，异丙醇与上层液体的体积比为1：1。19.根据权利要求1所述的利用基于超声原理的动植物组织消融仪快速提取RNA的方法，其特征在于：所述动植物组织消融仪的DCDC功率调节单元包括：开关控制信号接收端连接主控单元接收开关控制信号的开关控制信号接收电路；第一P...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵仲玖，廖东升，邱坤，赵伟，
申请(专利权)人：成都导胜生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51