一种消融液、试剂盒、消融方法、提取线粒体的方法及其应用技术

本申请公开了一种消融液、试剂盒、消融方法、提取线粒体的方法及其应用，本发明专利技术提供的组织消融方法旨在获得能够保持细胞原有功能和活性的单细胞；同时进一步提供了针对单细胞进行线粒体的提取方法，旨在获得具有与活体细胞中的线粒体相当或者相同包括转录水平、功能和活性在内的主要功能的线粒体，从而使得针对线粒体异质性方面的后续研究具有多一种获取途径。本发明专利技术提供的消融方法获取的单细胞能够完整的保留细胞及其细胞器的功能，尤其是在线粒体的膜通透性和基因转录方面保留完好。粒体的膜通透性和基因转录方面保留完好。粒体的膜通透性和基因转录方面保留完好。

【技术实现步骤摘要】
一种消融液、试剂盒、消融方法、提取线粒体的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及化学试剂及处理方法
，尤其涉及生物组织、细胞及细胞器的消融、提取
，具体涉及一种消融液、试剂盒、消融方法及提取线粒体的方法。

技术介绍

[0002]单细胞化是诸多生物实验中的基础，涉及到生物组织的实验，几乎都需要制备单细胞悬液用于后续研究和试验。现有的单细胞悬液的制备常用方式中可分为两种：一种是最为传统的物理制备方式，就是用研磨器进行手工研磨，手工研磨的弊端在较多，譬如耗时长，单细胞悬液质量差，受污染相对严重等。另一种方式就是通过酶消化法，譬如胰蛋白酶是可以使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。但是实际处理过程中，单纯的将组织块置入胰蛋白酶中并不能直接获取到单细胞悬液，且对于胰蛋白酶的浓度、消化处理时间对于组织的裂解影响是非常大，直接影响着单细胞的数量、完整度、以及存活率。而没有高存活率的单细胞往往将失去后续试验的意义。
[0003]进一步地，细胞的线粒体是维持基本的细胞功能，如能量生产，钙稳态，和调节细胞程序性死亡主要细胞器。大多数真核细胞拥有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种消融液，其特征在于：由0.3
‑
0.4mM/L的KH2PO4，0.14M/L的NaCl，5.2
‑
5.8mM/L的NaHCO3，4
‑
4.5mM/L的KCl，浓度为0.4％的BSA，0.1
‑
0.12g的Na2HPO4·
H2O，3mM/L的CaCl2，3mM/L的MgCl2和5
‑
10ug/mL溴化乙锭组成。2.根据权利要求1所述的一种消融液，其特征在于：由0.3mM/L的KH2PO4，0.14M/L的NaCl，5.2mM/L的NaHCO3，4mM/L的KCl，浓度为0.4％的BSA，0.1g的Na2HPO4·
H2O，3mM/L的CaCl2，3mM/L的MgCl2和9.2ug/mL溴化乙锭组成。3.一种试剂盒，其特征在于：由松解液、细胞保护液和权利要求1或2中所述的消融液组成；所述细胞保护液由PBS，10％FBS和浓度为0.1％的NaN3组成。4.根据权利要求3所述的一种试剂盒，其特征在于：所述松解液由下述组分及含量组成：DispaseI I：20mg/mL；Col lagenase：1000U/mL；kana：20mg/mL；KH2PO4:0.45mM/L；Nacl:0.14M/L；NaHCO3:4.2mM/L；KCl5.4mM/L；葡萄糖1.0g；Na2HPO4
·
H2O0.06g；CaCl2：3mM/L；MgCl 2：3mM/L。5.一种消融方法，其特征在于：通过权利要求4所述的试剂盒处理后的组织，配合超声消融装置进行消融获得细胞内线粒体转录水平、功能和活性不受损伤的高存活化单细胞，具体通过以下步骤实现：步骤ST100，在无菌条件下将获取待消融组织；步骤ST200，将步骤ST100获取的组织转移至含有已经进行预冷处理的消融液的平...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伟，余嘉莹，廖东升，
申请(专利权)人：成都导胜生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：