一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法，属于基因检测技术领域，包括用于人全血样本快速处理的样本处理试剂、经预混单人份分装的基因检测试剂，分别包括CYP2C19野生型基因检测试剂、CYP2C19突变型基因检测试剂和CYP2C9+VKORC1野生型基因检测试剂、CYP2C9+VKORC1突变型基因检测试剂，阳性对照品和阴性对照品。本发明专利技术在保证检出特异性和灵敏的基础之上，实现便捷、快速、高效地检测，减少检测操作步骤、缩减检测反应时间的同时减低了生产成本和检测成本，有利于临床检测分析应用。

A Kit and Method for Rapid Detection of Gene Polymorphisms in Individualized Antithrombotic Drugs

The invention discloses a kit and method for rapid detection of gene polymorphism of individualized antithrombotic drugs, belonging to the field of gene detection technology, including sample processing reagent for rapid processing of human whole blood samples, gene detection reagent for pre-mixed single-person packaging, including CYP2C19 wild-type gene detection reagent, CYP2C19 mutant gene detection reagent and CYP2C9+VKORC1 wild-type gene detection reagent, respectively. CYP2C9 + VKORC1 mutant gene detection reagent, positive control and negative control. On the basis of ensuring detection specificity and sensitivity, the invention realizes convenient, fast and efficient detection, reduces detection operation steps, reduces detection reaction time, reduces production cost and detection cost, and is conducive to clinical detection and analysis application.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法
本专利技术涉及一种检测基因多态性的试剂盒及方法，特别是涉及一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法，属于基因检测

技术介绍
细胞色素CYP450酶系是药物在体内的主要代谢酶系，CYP2C19基因编码的S-美芬妥英羟化酶是其重要成员，其遗传多态性影响着氯吡格雷、奥美拉唑、苯妥英钠和地西泮等许多药物的代谢。人类CYP2C19基因定位于10q24.1-24.3，目前，发现CYP2C19存在至少25种等位基因，其中*2型和*3型是中国人群中最常见的两种等位基因型，分别为rs4244285，681G>A；rs4986893，636G>A的点突变，这些点突变引起CYP2C19基因编码的酶活性丧失，代谢底物的能力减弱，使血药浓度增高，在常规治疗剂量时易引起蓄积中毒。在中国人群中，CYP2C19*2出现概率为31.47-35％，CYP2C19*3出现概率为5.17-8％，另外，CYP2C19*17亚型为rs12248560，-806C>T的点突变，该突变能够显著提高CYP2C19酶活，代谢底物的能力增强，因此需要增加药物剂量，CYP2C19*17等位基因在中国人群中出现概率为0.43-3％，在亚裔人群出现的概率约为3-21％。由于CYP2C19基因的多态性所致CYP450酶活不同，从而引起相关药物代谢在个体化之间的差异，导致相关药物对于不同患者的疗效与副作用明显不同。以氯吡格雷为例，和氯吡格雷相关的CYP2C19等位基因中，功能缺失的亚型是常染色体显性遗传的，因为该基因的杂合子中，血小板对氯吡格雷是易感的，这种易感程度介于野生型和功能缺失的亚型之间。因此，确定CYP2C19的等位基因，能够将服用氯吡格雷的人群分成快代谢，中等代谢和缺乏代谢三类，其中缺乏代谢人群在高加索人种和非洲人种中的频率约为2-5％，在亚洲人种中的频率约15％。此外，CYP2C19*17亚型能够增强该基因的转录，从而显著提高CYP2C19酶活，该亚型的频率约为3-21％，携带该基因型的人群被定义成超快代谢型，通过检测患者CYP2C19基因型，判断患者代谢速率类型，合理调整用药剂量，是提高相关疾病治愈率，减少药物毒副作用的有效途径。CYP2C9是表达华法林代谢酶的基因，CYP2C9*3导致CYP2C9酶活性降低，与野生型患者相比，携带突变型的个体在治疗初始阶段需要的维持剂量较低，且到达稳态剂量所需时间更长,同时发生抗凝过量(INR>4.0)危及生命的出血事件的风险显著升高。VKOR是华法林作用的靶点，启动子区域-1639G>A的突变可引起VKORC1mRNA的表达下降，从而使肝脏中酶的生成也相应地减少，此时只需要很少剂量的华法林就能达到抗凝效果，过量的华法林会导致溶血等严重副反应。以CYP2C9和VKORC1基因多态性为导向的华法林给药方案可以提高药物的安全性，弥补了常规用药中通过出现不良反应再调整剂量的不足，因此，病人在首次服用华法林之前，检测CYP2C9和VKORC1基因多态性，这对患者的疗效获益及避免出血等不良事件的发生有重要的指导意义。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是为了提供一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒及方法，涉及与抗血栓个体化用药氯吡格雷与华法林相关基因CYP2C19、CYP2C9、VKORC1基因多态性的试剂盒及方法。本专利技术的目的可以通过采用如下技术方案达到：一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒，基因多态性包括CYP2C19*2(681G＞A)、*3(636G＞A)、17(-806＞T)、与CYP2C9*2(430C＞T)*3(1075A＞C)及VKORC1-1639G＞A型基因多态性，试剂盒包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。进一步的，基因检测试剂采用PCR8联管单人份预混分装，基因检测试剂包括：CYP2C19野生型基因检测试剂、CYP2C19突变型基因检测试剂、CYP2C9+VKORC1野生型基因检测试剂和CYP2C9+VKORC1突变型基因检测试剂。进一步的，CYP2C19野生型基因检测试剂包括：检测CYP2C19681G>A引物对：SEQIDNO.1-SEQIDNO.2；SEQIDNO.1为CYP2C19681G>A上游引物：5’-GCAATAATTTTCCCACTATCATTC-3’；SEQIDNO.2为CYP2C19681G>A下游引物：5’-CAAAATATCACTTTCCATAAAAG-3’；检测CYP2C19681G特异性探针SEQIDNO.3；SEQIDNO.3为CYP2C19681G荧光探针：5’-荧光基团-TATTTCCCGgGAACCT-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19636G>A引物对：SEQIDNO.5-SEQIDNO.6；SEQIDNO.5为CYP2C19636G>A上游引物：5’-GATCAGCAATTTCTTAACTTGATGGAA-3’；SEQIDNO.6为CYP2C19636G>A下游引物：5’-AAGACTGTAAGTGGTTTCTCAGG-3’；检测CYP2C19636G特异性探针SEQIDNO.7；SEQIDNO.7为CYP2C19636G荧光探针：5’-荧光基团-ACCCCCTGgATC-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19-806C>T引物对：SEQIDNO.9-SEQIDNO.10；SEQIDNO.9为CYP2C19-806C>T上游引物：5’-AGTGGTTCTATTTAATGTGAAGC-3’；SEQIDNO.10为CYP2C19-806C>T下游引物：5’-ATCGTGGCGCATTATCTCT-3’；检测CYP2C19-806C特异性探针SEQIDNO.11；SEQIDNO.11为CYP2C19-806C荧光探针：5’-荧光基团-ATCAGAGATgCTTTGAC-MGB-NFQ-3’；CYP2C19突变型基因检测试剂包括：检测CYP2C19681G>A引物对：SEQIDNO.1-SEQIDNO.2；SEQIDNO.1为CYP2C19681G>A上游引物：5’-GCAATAATTTTCCCACTATCATTC-3’；SEQIDNO.2为CYP2C19681G>A下游引物：5’-CAAAATATCACTTTCCATAAAAG-3’；检测CYP2C19681A特异性探针SEQIDNO.4；SEQIDNO.4为CYP2C19681A荧光探针：5’-荧光基团-TTCCCaGGAACCCATA-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19636G>A引物对：SEQIDNO.5-SEQIDNO.6；SEQIDNO.5为CYP2C19636G>A上游引物：5’-GATCAGCAATTTCTTAACTTGATGGAA-3’；SEQIDNO.6为CYP2C19636G>A下游引物：5’-AAGACTGTAAGTGGTTTCTCAGG-3’；检测CYP2C19636A特异性探针SEQIDNO.8；SEQIDNO.8为CYP2C19636A荧光探本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，基因多态性包括CYP2C19*2(681G＞A)、*3(636G＞A)、17(‑806＞T)、与CYP2C9*2(430C＞T)*3(1075A＞C)及VKORC1‑1639G＞A型基因多态性，试剂盒包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，基因多态性包括CYP2C19*2(681G＞A)、*3(636G＞A)、17(-806＞T)、与CYP2C9*2(430C＞T)*3(1075A＞C)及VKORC1-1639G＞A型基因多态性，试剂盒包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。2.如权利要求1所述的一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，基因检测试剂采用PCR8联管单人份预混分装，基因检测试剂包括：CYP2C19野生型基因检测试剂、CYP2C19突变型基因检测试剂、CYP2C9+VKORC1野生型基因检测试剂和CYP2C9+VKORC1突变型基因检测试剂。3.如权利要求2所述的一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，CYP2C19野生型基因检测试剂包括：检测CYP2C19681G>A引物对：SEQIDNO.1-SEQIDNO.2；SEQIDNO.1为CYP2C19681G>A上游引物：5’-GCAATAATTTTCCCACTATCATTC-3’；SEQIDNO.2为CYP2C19681G>A下游引物：5’-CAAAATATCACTTTCCATAAAAG-3’；检测CYP2C19681G特异性探针SEQIDNO.3；SEQIDNO.3为CYP2C19681G荧光探针：5’-荧光基团-TATTTCCCGgGAACCT-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19636G>A引物对：SEQIDNO.5-SEQIDNO.6；SEQIDNO.5为CYP2C19636G>A上游引物：5’-GATCAGCAATTTCTTAACTTGATGGAA-3’；SEQIDNO.6为CYP2C19636G>A下游引物：5’-AAGACTGTAAGTGGTTTCTCAGG-3’；检测CYP2C19636G特异性探针SEQIDNO.7；SEQIDNO.7为CYP2C19636G荧光探针：5’-荧光基团-ACCCCCTGgATC-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19-806C>T引物对：SEQIDNO.9-SEQIDNO.10；SEQIDNO.9为CYP2C19-806C>T上游引物：5’-AGTGGTTCTATTTAATGTGAAGC-3’；SEQIDNO.10为CYP2C19-806C>T下游引物：5’-ATCGTGGCGCATTATCTCT-3’；检测CYP2C19-806C特异性探针SEQIDNO.11；SEQIDNO.11为CYP2C19-806C荧光探针：5’-荧光基团-ATCAGAGATgCTTTGAC-MGB-NFQ-3’；CYP2C19突变型基因检测试剂包括：检测CYP2C19681G>A引物对：SEQIDNO.1-SEQIDNO.2；SEQIDNO.1为CYP2C19681G>A上游引物：5’-GCAATAATTTTCCCACTATCATTC-3’；SEQIDNO.2为CYP2C19681G>A下游引物：5’-CAAAATATCACTTTCCATAAAAG-3’；检测CYP2C19681A特异性探针SEQIDNO.4；SEQIDNO.4为CYP2C19681A荧光探针：5’-荧光基团-TTCCCaGGAACCCATA-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19636G>A引物对：SEQIDNO.5-SEQIDNO.6；SEQIDNO.5为CYP2C19636G>A上游引物：5’-GATCAGCAATTTCTTAACTTGATGGAA-3’；SEQIDNO.6为CYP2C19636G>A下游引物：5’-AAGACTGTAAGTGGTTTCTCAGG-3’；检测CYP2C19636A特异性探针SEQIDNO.8；SEQIDNO.8为CYP2C19636A荧光探针：5’-荧光基团-ACTCCCTGaATC-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C19-806C>T引物对：SEQIDNO.9-SEQIDNO.10；SEQIDNO.9为CYP2C19-806C>T上游引物：5’-AGTGGTTCTATTTAATGTGAAGC-3’；SEQIDNO.10为CYP2C19-806C>T下游引物：5’-ATCGTGGCGCATTATCTCT-3’；检测CYP2C19-806C特异性探针SEQIDNO.12；SEQIDNO.12为CYP2C19-806T荧光探针：5’-荧光基团-ATCAGAGATaCTTTGAT-MGB-NFQ-3’。4.如权利要求2所述的一种快速检测抗血栓个体化用药基因多态性的试剂盒，其特征在于，CYP2C9+VKORC1野生型基因检测试剂包括：检测CYP2C9430C>T引物对：SEQIDNO.13-SEQIDNO.14；SEQIDNO.13为CYP2C9430C>T上游引物：5’-TCATGACGCTGCGGAATT-3’；SEQIDNO.14为CYP2C9430C>T下游引物：5’-ACCCACCCTTGGTTTTTCTCA-3’；检测CYP2C9430C特异性探针SEQIDNO.15；SEQIDNO.15为CYP2C9430C荧光探针：5’-荧光基团-TGAACACGGTCCTCA-MGB-NFQ-3’；检测CYP2C91075A>C引物对：SEQIDNO.17-SEQIDNO.18；SEQIDNO.17为CYP2C91075A>C上游引物：5’-GGAAGAGATTGAACGTGTGA-3’；SEQIDNO.18为CYP2C91075A>C下游引物：5’-TATGAATTTGGGGACTTCGAA-3’；检测CYP2C91075A特异性探针SEQIDNO.19；SEQIDNO.19为CYP2C91075A荧光探针：5’-荧光基团...

【专利技术属性】
技术研发人员：王家亮，何顺清，王翔，
申请(专利权)人：江苏美因康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32