一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法技术

技术编号:20382430 阅读:35 留言:0更新日期:2019-02-19 23:51
本发明专利技术公开了一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法,属于基因检测技术领域,与临床抗高血压药β1受体阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂药物代谢,试剂盒包括用于人全血样本快速处理的样本处理试剂、经预混单人份分装的基因检测试剂PCR反应液1、PCR反应液2、PCR反应液3,阳性对照品和阴性对照品。本发明专利技术在保证检出特异性和灵敏的基础之上,实现便捷、快速、高效地检测,减少检测操作步骤、缩减检测反应时间的同时减低了生产成本和检测成本,有利于临床检测分析应用。

A Kit and Method for Rapid Detection of Polymorphisms of Individualized Drug Use Genes in Hypertension

The invention discloses a kit and method for rapid detection of gene polymorphism of individualized medication for hypertension, belonging to the field of gene detection technology. The kit includes sample processing reagent for rapid processing of human whole blood samples and drug metabolism of clinical antihypertensive drug beta 1 receptor blocker, angiotensin II receptor 1 antagonist and angiotensin converting enzyme inhibitor. The kit comprises sample processing reagent for rapid processing of human whole blood samples and pre-mixed single person. A sub-package of gene detection reagents: PCR Reagent 1, PCR Reagent 2, PCR Reagent 3, Positive and Negative Controls. On the basis of ensuring detection specificity and sensitivity, the invention realizes convenient, fast and efficient detection, reduces detection operation steps, reduces detection reaction time, reduces production cost and detection cost, and is conducive to clinical detection and analysis application.

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法
本专利技术涉及一种基因检测的试剂盒及方法,特别是涉及一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法,属于基因检测

技术介绍
CYP2D6在肝脏总CYP中仅占1-2%,但经其催化代谢的药物多达80多种,不同个体CYP2D6的活性最大可相差1000倍,在中国人群中最常见的多态性为CYP2D6*10,约51.6%的中国人携带此遗传变异,该多态性导致CYP2D6的酶活性降低,且极不稳定,从而影响药物代谢。CYP2C9是细胞色素P450家族中的重要成员,占肝微粒体P450总量的20%,该酶催化约12%的临床常用药物,CYP2C9基因存在多态性,主要为CYP2C9*1(Arg144/Ile359)、CYP2C9*2(Cys144/Ile359)、CYP2C9*3(Arg144/Leu359),其中CYP2C9*1为正常酶活性,中国人群中主要存在的遗传变异为CYP2C9*3,导致酶活性降低,影响药物代谢。β1肾上腺素受体属于G蛋白偶联受体超家族,由ADRB1基因编码,该基因存在多态性,研究表明ADRB1基因G1165C多态性与高血压药物治疗相关,使用美托洛尔、卡维地洛等治疗后,C1165纯合子个体有效率更高。血管紧张素Ⅱ是肾素-血管紧张素系统的重要体液因子,其90%以上的效应通过血管紧张素Ⅱ的1型受体(AGTR1)介导,AGTR1基因定位于3q21-q25,全长55kb,编码359个氨基酸残基的受体蛋白,该基因存在多态性,其中A1166C位点在高血压的药物治疗中具有重要意义,研究表明使用洛沙坦治疗后,AA基因型个体的有效率明显高于AC和CC基因型个体。血管紧张素转换酶是肾素-血管紧张素系统的关键酶,由ACE基因编码,该基因定位于17号染色体长臂2区3带,序列长21kb。ACE基因存在多种遗传多态性,其中第16内含子中存在的287bp的Alu插入片段(I)和缺失片段(D)的多态性与高血压药物治疗相关,研究表明DD纯合型个体使用贝那普利和福辛普利的疗效显著,II纯合型个体使用依那普利和咪达普利的疗效显著,ID杂合型个体使用血管紧张素抑制剂类药物治疗,均有效。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术检测CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB11165G>C、AGTR11166A>C、ACEI/D型基因多态性时对样本处理要求高、检测周期长、操作复杂、成本高和特异性不强等不足,提供一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒及方法,涉及抗高血压药β1受体阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂药物代谢,受体敏感性相关CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB11165G>C、AGTR11166A>C、ACEI/D基因多态性检测试剂盒及方法。本专利技术的目的可以通过采用如下技术方案达到:一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,与临床抗高血压药β1受体阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂药物代谢,基因多态性包括受体敏感性相关CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB11165G>C、AGTR11166A>C、ACEI/D基因多态性,试剂盒包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。进一步的,基因检测试剂采用PCR8联管单人份预混分装,包括:PCR反应液1、PCR反应液2和PCR反应液3。进一步的,PCR反应液1包括:检测CYP2D6*10引物对:SEQIDNO.1和SEQIDNO.2;SEQIDNO.1为CYP2D6*10上游引物:5’-AGTGAGGCAGGTATGGGGC-3’;SEQIDNO.2为CYP2D6*10下游引物:5’-GTCCACATGCAGCAGGTTG-3’;检测CYP2D6*10特异性探针:SEQIDNO.3和SEQIDNO.4;SEQIDNO.3为CYP2D6*10野生型荧光探针:5’-荧光基团-GCTACCCACCAGGC-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.4为CYP2D6*10突变型荧光探针:5’-荧光基团-ACGCTACTCACCAT-MGB-NFQ-3’;检测ADRB11165G>C引物对:SEQIDNO.5和SEQIDNO.6;SEQIDNO.5为ADRB11165G>C上游引物:5’-CGCAGCCCCGACTTC-3’;SEQIDNO.6为ADRB11165G>C下游引物:5’-CCGGTCTCCGTGGGT-3’;检测ADRB11165G>C特异性探针:SEQIDNO.7和SEQIDNO.8;SEQIDNO.7为ADRB11165G>C野生型荧光探针:5’-荧光基团-ATTCCAGGGACTGC-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.8为ADRB11165G>C突变型荧光探针:5’-荧光基团-TCCAGCGACTGCT-MGB-NFQ-3’;进一步的,PCR反应液2包括:检测CYP2C9*3引物对:SEQIDNO.9和SEQIDNO.10;SEQIDNO.9为CYP2C9*3上游引物:5’-AGGAAGAGATTGAACGTGTGAT-3’;SEQIDNO.10为CYP2C9*3下游引物:5’-ATGAATTTGGGGACTTCGAA-3’;检测CYP2C9*3特异性探针:SEQIDNO.11和SEQIDNO.12;SEQIDNO.11为CYP2C9*3野生型荧光探针:5’-荧光基团-GAGATACATTGACCTTCA-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.12为CYP2C9*3突变型荧光探针:5’-荧光基团-AGATACCTTGACCTTCA-MGB-NFQ-3’;检测AGTR11166A>C引物对:SEQIDNO.13和SEQIDNO.14;SEQIDNO.13为AGTR11166A>C上游引物:5’-GAGAACATTCCTCTGCAGCA-3’;SEQIDNO.14为AGTR11166A>C下游引物:5’-CGGTTCAGTCCACATAATGC-3’;检测AGTR11166A>C特异性探针:SEQIDNO.15和SEQIDNO.16;SEQIDNO.15为AGTR11166A>C野生型荧光探针:5’-荧光基团-CAAATGAGCATTAGCT-MGB-NFQ-3’SEQIDNO.16为AGTR11166A>C突变型荧光探针:5’-荧光基团-ACATGAGCCTTAGCT-MGB-NFQ-3’。进一步的,PCR反应液3包括:检测ACEI/D引物对:SEQIDNO.17和SEQIDNO.18;SEQIDNO.17为ACEI/D上游引物:5’-TGGAGAGCCACTCCCATCCTTTC-3’;SEQIDNO.18为ACEI/D下游引物:5’-CGTGGCCATCACATTCGTCAG-3’;检测ACEI/D特异性探针:SEQIDNO.19和SEQIDNO.20;SEQIDNO.19为ACE插入型荧光探针:5’-荧光基团-GGACCACAGGCGCCGCCACTAC-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.20为ACE缺失型荧光探针:本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,与临床抗高血压药β1受体阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂药物代谢,其特征在于,基因多态性包括受体敏感性相关CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB1 1165G>C、AGTR1 1166A>C、ACE I/D基因多态性,试剂盒包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,与临床抗高血压药β1受体阻滞剂、血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂药物代谢,其特征在于,基因多态性包括受体敏感性相关CYP2D6*10、CYP2C9*3、ADRB11165G>C、AGTR11166A>C、ACEI/D基因多态性,试剂盒包括样本处理试剂、基因检测试剂、阳性对照品和阴性对照品。2.如权利要求1所述的一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,其特征在于,基因检测试剂采用PCR8联管单人份预混分装,包括:PCR反应液1、PCR反应液2和PCR反应液3。3.如权利要求2所述的一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,其特征在于,PCR反应液1包括:检测CYP2D6*10引物对:SEQIDNO.1和SEQIDNO.2;SEQIDNO.1为CYP2D6*10上游引物:5’-AGTGAGGCAGGTATGGGGC-3’;SEQIDNO.2为CYP2D6*10下游引物:5’-GTCCACATGCAGCAGGTTG-3’;检测CYP2D6*10特异性探针:SEQIDNO.3和SEQIDNO.4;SEQIDNO.3为CYP2D6*10野生型荧光探针:5’-荧光基团-GCTACCCACCAGGC-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.4为CYP2D6*10突变型荧光探针:5’-荧光基团-ACGCTACTCACCAT-MGB-NFQ-3’;检测ADRB11165G>C引物对:SEQIDNO.5和SEQIDNO.6;SEQIDNO.5为ADRB11165G>C上游引物:5’-CGCAGCCCCGACTTC-3’;SEQIDNO.6为ADRB11165G>C下游引物:5’-CCGGTCTCCGTGGGT-3’;检测ADRB11165G>C特异性探针:SEQIDNO.7和SEQIDNO.8;SEQIDNO.7为ADRB11165G>C野生型荧光探针:5’-荧光基团-ATTCCAGGGACTGC-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.8为ADRB11165G>C突变型荧光探针:5’-荧光基团-TCCAGCGACTGCT-MGB-NFQ-3’。4.如权利要求2所述的一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,其特征在于,PCR反应液2包括:检测CYP2C9*3引物对:SEQIDNO.9和SEQIDNO.10;SEQIDNO.9为CYP2C9*3上游引物:5’-AGGAAGAGATTGAACGTGTGAT-3’;SEQIDNO.10为CYP2C9*3下游引物:5’-ATGAATTTGGGGACTTCGAA-3’;检测CYP2C9*3特异性探针:SEQIDNO.11和SEQIDNO.12;SEQIDNO.11为CYP2C9*3野生型荧光探针:5’-荧光基团-GAGATACATTGACCTTCA-MGB-NFQ-3’;SEQIDNO.12为CYP2C9*3突变型荧光探针:5’-荧光基团-AGATACCTTGACCTTCA-MGB-NFQ-3’;检测AGTR11166A>C引物对:SEQIDNO.13和SEQIDNO.14;SEQIDNO.13为AGTR11166A>C上游引物:5’-GAGAACATTCCTCTGCAGCA-3’;SEQIDNO.14为AGTR11166A>C下游引物:5’-CGGTTCAGTCCACATAATGC-3’;检测AGTR11166A>C特异性探针:SEQIDNO.15和SEQIDNO.16;SEQIDNO.15为AGTR11166A>C野生型荧光探针:5’-荧光基团-CAAATGAGCATTAGCT-MGB-NFQ-3’SEQIDNO.16为AGTR11166A>C突变型荧光探针:5’-荧光基团-ACATGAGCCTTAGCT-MGB-NFQ-3’。5.如权利要求2所述的一种快速检测高血压个体化用药基因多态性的试剂盒,其特征在于,PCR...

【专利技术属性】
技术研发人员:王家亮何顺清
申请(专利权)人:江苏美因康生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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