用于检测CPT2 F532C突变的引物、试剂盒及筛选重症EV71易感患儿的系统技术方案

本发明专利技术公开了一种用于检测CPT2 F532C突变的引物、试剂盒及筛选重症EV71易感患儿的系统，属于生物医学领域。该技术方案包括特异性上下游引物的设计，用于筛选重症EV71易感患儿的系统，包括模块1，模块1用于分析对待测者离体样本进行EV71 RNA检测得到的检测结果；模块2，模块2用于在所述模块1的分析结果为阳性时，进一步分析利用包含特异性引物的试剂盒对离体样本进行CPT2 F532C检测得到的检测结果；模块3，模块3用于在模块2的分析结果为阳性时，初步筛选待测者为或候选为重症EV71易感患儿。本发明专利技术及时而快捷地发现CPT2 F352C突变，进而确定重症EV71感染患儿，有助于在早期给予重症EV71感染患儿积极有效的预防治疗。

Detection of CPT2 F532C mutation by primers, kits and screening system for children susceptible to severe EV71

The invention discloses a primer, a kit for detecting CPT2 F532C mutation and a system for screening susceptible children of severe EV71, belonging to the field of biomedicine. The technical scheme includes the design of specific upstream and downstream primers, which can be used to screen the system for severe EV71 susceptible children, including module 1, which is used to analyze the results of EV71 RNA detection on the in vitro samples of the subjects, and module 2, which is used to further analyze the in vitro samples when the analysis results of module 1 are positive by using the kit containing specific primers. The results of CPT2 F532C test were obtained. Module 3 and Module 3 were used to preliminarily screen those who were susceptible to severe EV71 when the results of Module 2 were positive. The invention discovers the mutation of CPT2 F352C in time and quickly, and then determines the children with severe EV71 infection, which is helpful to give active and effective prevention and treatment to the children with severe EV71 infection in the early stage.

【技术实现步骤摘要】
用于检测CPT2F532C突变的引物、试剂盒及筛选重症EV71易感患儿的系统
本专利技术属于生物医学领域，尤其涉及用于检测CPT2F532C突变的引物、试剂盒及筛选重症EV71易感患儿的系统。
技术介绍
肠道病毒71型(enterovirus71，EV71)属于肠道病毒A组的单股正链小RNA病毒，是引起儿童手足口病的最主要的病原体。EV71具有高度的嗜神经性，可引起脑膜炎、脑炎、脑干脑炎及神经源性肺水肿等严重中枢神经系统损害，重症病例病情进展迅速，病死率、致残率高，给国家、社会及家庭施以庞大的压力和负担，已然成为重要的公共卫生问题，引起全球各国的关注和警惕。前期研究发现肉毒碱棕榈酰基转移酶2(carnitinepalmitoyltransferase2，CPT2)编码基因的第4外显子c.1055T>G/p.F352C(F352C)突变增加了罹患重症EV71感染的风险。细胞内CPT2表达以及酶活性的正常是线粒体进行β-氧化为机体各器官代谢提供能量的重要因素。CPT2F352C突变后CPT2酶的功能缺陷，长链脂肪酸不能被有效转运并参与氧化磷酸化，ATP产生减少，外周血中的酰基肉碱浓度明显增高，从而导致一系列的能量及代谢紊乱。CPT2F352C突变的重症EV71脑炎患儿高热期CPT2活性和ATP水平明显低于恢复期，即CPT2F352突变是EV71感染后脑损伤的重要风险因素，因其具有热不稳定性，感染并高热导致CPT2突变体酶活性降低、ATP降低，及其导致的细胞因子风暴、氧化应激等加重了宿主血脑屏障的损伤，血脑屏障内皮细胞的损伤，又能进一步刺激细胞因子的产生及炎性细胞的聚集，从而加重脑损伤。然而，目前临床上尚不能及时发现重症EV71感染患儿，以便采取有效的措施在早期给予积极的预防治疗。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足之处，本专利技术所要解决的技术问题是及时而快捷地发现CPT2F352C突变，进而确定重症EV71感染患儿，有助于在早期给予重症EV71感染患儿积极有效的预防治疗，提出用于检测CPT2F532C突变的引物、试剂盒及筛选重症EV71易感患儿的系统。为解决所述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：用于检测CPT2F532C突变的特异性引物，根据CPT2F532C设计特异性上下游引物，具体包括：本专利技术还提供了包含如上述技术方案所述的用于检测CPT2F532C突变的特异性引物的试剂盒。本专利技术还提供了用于筛选重症EV71易感患儿的系统，包括下述数据处理模块：模块1，所述模块1用于分析对待测者离体样本进行EV71RNA检测得到的检测结果；模块2，所述模块2用于在所述模块1的分析结果为阳性时，进一步分析利用如上述实施例所述的试剂盒对离体样本进行CPT2F532C检测得到的检测结果；模块3，所述模块3用于在所述模块2的分析结果为阳性时，初步筛选待测者为或候选为重症EV71易感患儿。优选的，所述模块1包括：模块a1，所述模块a1用于分析对待测者离体样本进行EV71RNA定性检测得到的检测结果；和/或模块b1，所述模块b1用于分析对待测者离体样本进行EV71RNA病毒载量定量检测得到的检测结果。优选的，所述模块2包括：模块a2，所述模块a2用于在所述模块1的分析结果为阳性时，进一步分析利用如上述实施例所述的试剂盒对离体样本进行是否存在CPT2F532C突变的检测得到的检测结果；和/或模块b2，所述模块b2用于在所述模块1的分析结果为阳性时，进一步分析利用如上述实施例所述的试剂盒对离体样本在41℃高热条件下进行CPT2表达量的检测得到的检测结果。优选的，所述模块3包括：模块a3，所述模块a3用于在所述模块2的分析结果为阳性时，初步筛选待测者为或候选为重症EV71易感患儿；和/或模块b3，所述模块b3用于在所述模块b2的分析结果为存在CPT2F532C突变的CPT2的表达量相对于无对应突变的离体样本的CPT2的表达量下调时，初步筛选待测者为或候选为重症EV71易感患儿。优选的，所述离体样本为细胞、组织、脏器、血液、淋巴液、消化液、咳痰、肺胞支气管清洗液、尿或粪便中的任意一种。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：1、及时而快捷地发现CPT2F352C突变，通过控制其突变者高热的发生来减少重症脑炎和脑病的发生，降低其致残率和死亡率；2、为揭示重症EV71感染的发病机制，易感人群的早期识别以及治疗提供新的研究视点，使疾病得到更加准确化、个体化的诊断和治疗。附图说明图1为本专利技术实施例所提供的CPT2F352C点突变星形胶质细胞模型建立流程图；图2为本专利技术实施例所提供的EV71和41℃高温刺激后CPT2基因qRT-PCR曲线和CPT2基因含量趋势图；图3为本专利技术实施例所提供的给予EV71感染和41℃高热刺激的CPT2F352C小鼠状态图，其中，A为未给予EV71感染和41℃高热刺激的CPT2F352C小鼠，B为EV71感染和41℃高热刺激1d后的CPT2F352C小鼠，C为EV71感染和41℃高热刺激3d后的CPT2F352C小鼠，D为EV71感染和41℃高热刺激5d后的CPT2F352C小鼠，E为EV71感染和41℃高热刺激7d后的CPT2F352C小鼠；图4为本专利技术实施例所提供的脑组织的ATP水平和CPT2剩余酶活性表达结果示意图，其中，A为CPT2F352C小鼠EV71感染和41℃高热刺激后脑干组织ATP水平示意图，B为不同温度条件下，EV71感染和41℃高热刺激后CPT2F352C小鼠脑干组织内CPT2酶活性示意图，C为不同温度条件下，EV71感染和41℃高热刺激后野生型小鼠脑干组织内CPT2酶活性示意图；图5为本专利技术实施例所提供的不同时间点电镜下小鼠脑组织线粒体超微结构的改变示意图，其中，A为无EV71感染的野生型小鼠，a为无EV71感染的CPT2F352C小鼠，B1为EV71感染且41℃高热处理3d后的野生型小鼠，B2为EV71感染且41℃高热处理5d后的野生型小鼠，B3为EV71感染且41℃高热处理9d后的野生型小鼠，a为无EV71感染的CPT2F352C小鼠，b1为EV71感染且41℃高热处理3d后的CPT2F352C小鼠，b2为EV71感染且41℃高热处理5d后的CPT2F352C小鼠，b3为EV71感染且41℃高热处理9d后的CPT2F352C小鼠；图6为本专利技术实施例所提供的不同时间点电镜下小鼠血脑屏障改变情况示意图，其中，A为无EV71感染的野生型小鼠，a为无EV71感染的CPT2F352C小鼠，B1为EV71感染且41℃高热处理3d后的野生型小鼠，B2为EV71感染且41℃高热处理5d后的野生型小鼠，B3为EV71感染且41℃高热处理9d后的野生型小鼠，a为无EV71感染的CPT2F352C小鼠，b1为EV71感染且41℃高热处理3d后的CPT2F352C小鼠，b2为EV71感染且41℃高热处理5d后的CPT2F352C小鼠，b3为EV71感染且41℃高热处理9d后的CPT2F352C小鼠。具体实施方式下面将对本专利技术具体实施例中的技术方案进行详细、完整的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术总的技术方案的部分具体实施方式，而非全部的实施方式。基于本专利技术的总的构思，本领域普通技术人员所获得的所有其他实本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测CPT2F532C突变的特异性引物，其特征在于，根据CPT2F532C设计特异性上下游引物，具体包括：

【技术特征摘要】
2018.11.26 CN 20181141727451.用于检测CPT2F532C突变的特异性引物，其特征在于，根据CPT2F532C设计特异性上下游引物，具体包括：2.包含如权利要求1所述的用于检测CPT2F532C突变的特异性引物的试剂盒。3.用于筛选重症EV71易感患儿的系统，其特征在于，包括下述数据处理模块：模块1，所述模块1用于分析对待测者离体样本进行EV71RNA检测得到的检测结果；模块2，所述模块2用于在所述模块1的分析结果为阳性时，进一步分析利用如权利要求2所述的试剂盒对离体样本进行CPT2F532C检测得到的检测结果；模块3，所述模块3用于在所述模块2的分析结果为阳性时，初步筛选待测者为或候选为重症EV71易感患儿。4.根据权利要求3所述的系统，其特征在于，所述模块1包括：模块a1，所述模块a1用于分析对待测者离体样本进行EV71RNA定性检测得到的检测结果；和/或模块b1，所述模块b1用于分析对待测者离体样本进行EV71RNA病毒载...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宗波，刘叶丹，宋杰，刘培培，李菲，郭娅，赵娜，胡静飞，辛丹丹，王媛媛，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东,37