反复自然流产相关微小RNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及反复自然流产相关微小RNA及其应用。具体地，本发明专利技术涉及可用于区分反复自然流产组织及正常组织的8种microRNA标志物。经检验证明，该特异性的microRNA标志物可非常有效地诊断和/或预测反复自然流产。本发明专利技术还涉及8种标志物microRNA的应用及用于检测自然反复流产的试剂盒。

Recurrent spontaneous abortion-related microRNA and its application

The present invention relates to microRNA related to recurrent spontaneous abortion and its application. Specifically, the present invention relates to eight microRNA markers that can be used to distinguish recurrent spontaneous abortion tissues from normal tissues. Tests have shown that this specific microRNA marker can be very effective in the diagnosis and/or prediction of recurrent spontaneous abortion. The invention also relates to the application of eight markers microRNA and a kit for detecting spontaneous recurrent abortion.

【技术实现步骤摘要】
反复自然流产相关微小RNA及其应用
本专利技术涉及生物技术和医学领域。具体地说，本专利技术涉及hsa-miR-146a-3p，hsa-miR-23a-3p，hsa-miR-27a-3p，hsa-miR-486-5p，hsa-miR-100-5p，hsa-miR-126-5p，hsa-miR-127-3p，hsa-miR-29a-3p基因作为生物标志分子在鉴别RM病理妊娠中的应用。
技术介绍
人类正常妊娠的建立和维持需要经历胚胎植入、胎盘形成、胚胎发育等一系列重要环节，受到多层面不同系统的协同调控，其中任一环节障碍均会导致自然流产等不良妊娠结局。2005年，人类生殖和胚胎学协会(ESHRE，EuropeanSocietyofHumanReproductionandEmbryology)将“流产”定义为：(1)尿妊娠试验阳性或者血HCG水平升高，但超声或组织学未能确认妊娠的情况为“生化流失”，一般发生于妊娠6周之前；(2)当超声或组织学能够确认为宫内妊娠时，称之为“临床流产”，又可细分为早期流产(妊娠12周之前)与晚期流产(妊娠12周到22周之间)[1]。据估计，人类妊娠中生化流失率达60％[2]；早期临床妊娠流产率达15％，并且与年龄显著相关，在20-24岁时临床流产率为10％，而40-44岁时，流产率达51％[3]；晚期流产率一般在4％[4]。反复自然流产(recurrentspontaneousmiscarriages，RSM)又称为RM(recurrentmiscarriages)或者是RPL(recurrentpregnancyloss)，是指与同一性伴侣连续发生2次及2次以上的妊娠第20周之前的自然流产，在妊娠期妇女中的发病率约为1～2％[5]。RSM病因复杂，涉及遗传、生殖内分泌、生殖道解剖、感染及女性自身免疫等诸多方面，虽然已有大量研究聚焦于这个领域，但仍有半数以上原因不明[6]。而临床上对于利用什么样的生物标志分子鉴定以及预测RM的发生，仍是空白。miRNA是一类在真核生物体内广泛表达的非编码RNA分子，多由21～25个核苷酸组成，通过与靶基因转录产物mRNA的3′-UTR互补结合，抑制其翻译过程而调控靶基因的表达。目前人类成熟miRNAs的统计量已达2578个(miRBase20.0)，调控着近50％的蛋白编码基因[7]。miRNA的表达具有组织特异性及时序性(即只在特定的组织和发育阶段表达)，这就意味着其在细胞生长和发育过程中起多种调节作用，包括：细胞增殖、凋亡、代谢、维持干细胞多能性及分化等[8]。已有研究发现，miRNA可能参与调控胚胎的发育和选择[9]、子宫内膜容受性的形成[10]、母胎界面的血管重铸[11]和免疫功能调节[12]等，而上述的这些生物过程均与人妊娠的建立有密切关系，虽然其确切的作用机制有待阐明，但miRNA作为鉴别RM的候选分子在临床应用上具有广阔前景逐渐显露出来。对miRNAs的研究之所以引起许多人的关注，一个原因是由于前面说过的miRNAs的生物学功能广泛，另外一个原因，就是其潜在的应用价值，比如疾病的生物学标志分子的筛选。在生物学标志分子的筛选中，最理想的是无创伤性的手段，比如血液。1997年，胎儿DNA首次从母体血液中被发现，基于这个发现，才有了后来的无创新产前诊断技术[13]。在2008年，胎盘来源的miRNA在母体血浆中被检测到[14]。这些研究基础，都为miRNA作为产前诊断以及疾病生物标志分子的开发奠定了基础。综上所述，从现有的研究可以看出，目前人们对RM的鉴别以及预测方法知之甚少。因此，本领域急需能够用于RM鉴别和预测的生物标志分子。
技术实现思路
本专利技术提供了hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p和hsa-miR-23a-3p与反复自然流产(RM)之间的相关性及其应用。本专利技术第一方面，提供了miRNA或其检测试剂的用途，用于制备判断反复自然流产(recurrentspontaneousmiscarriages，RSM)的试剂盒，所述miRNA选自下组：hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-23a-3p、或其组合。在另一优选例中，所述的试剂盒含有hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-23a-3p、或其组合作为阳性对照。在另一优选例中，所述的判断包括预先判断。在另一优选例中，所述检测试剂盒的检测样本包括血液或组织。在另一优选例中，所述的组织包括绒毛组织或蜕膜组织。在另一优选例中，所述miRNA选自下组：(a)SEQIDNO.:1-8任一所示的序列；(b)与SEQIDNO.:1-8任一所示序列互补的8个互补序列中的任一序列；或(c)来自(a)或(b)的组合，且来自(a)的序列与来自(b)的互补序列互相不为互补。在另一优选例中，所述的检测试剂包括引物、反义核酸、探针或芯片。本专利技术第二方面，提供了一种miRNA芯片，所述的miRNA芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-23a-3p、或其组合。在另一优选例中，所述的寡核苷酸探针含有：互补结合区；和/或与固相载体相连的连接区。本专利技术第三方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-23a-3p或其检测试剂，和说明书，所述的说明书中注明所述的试剂盒用于判断反复自然流产。在另一优选例中，所述的使用说明书注明以下内容：当所测定所述样本中，hsa-miR-27a-3p的表达量Ea与对照基因表达量Ea0之比Ea/Ea0≥1.55，则提示该检测样本为反复自然流产样本。本专利技术第四方面，提供了一种体外非诊断性的判断样本是否为反复自然流产样本的方法，包括步骤：测定所述样本中，hsa-miR-27a-3p的表达量Ea，并将其与对照基因表达量Ea0进行比较，若Ea/Ea0≥1.55，则提示该检测样本为反复自然流产样本。在另一优选例中，包括步骤：测定所述样本中，hsa-miR-127-3p的表达量Eb，并将其与对照基因表达量Eb0进行比较，若Eb/Eb0≥1.98，则提示该检测样本为反复本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miRNA或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备判断反复自然流产(recurrent spontaneous miscarriages，RSM)的试剂盒，所述miRNA选自下组：hsa‑miR‑27a‑3p、hsa‑miR‑127‑3p、hsa‑miR‑29a‑3p、hsa‑miR‑146a‑3p、hsa‑miR‑100‑5p、hsa‑miR‑486‑5p、hsa‑miR‑126‑5p、hsa‑miR‑23a‑3p、或其组合。

【技术特征摘要】
1.miRNA或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备判断反复自然流产(recurrentspontaneousmiscarriages，RSM)的试剂盒，所述miRNA选自下组：hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-23a-3p、或其组合。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述miRNA选自下组：(a)SEQIDNO.:1-8任一所示的序列；(b)与SEQIDNO.:1-8任一所示序列互补的8个互补序列中的任一序列；或(c)来自(a)或(b)的组合，且来自(a)的序列与来自(b)的互补序列互相不为互补。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的检测试剂包括引物、反义核酸、探针或芯片。4.一种miRNA芯片，其特征在于，所述的miRNA芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-23a-3p、或其组合。5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有hsa-miR-27a-3p、hsa-miR-127-3p、hsa-miR-29a-3p、hsa-miR-146a-3p、hsa-miR-100-5p、hsa-miR-486-5p、h...

【专利技术属性】
技术研发人员：张璇，顾艳，石燕，王建梅，施长根，杨倩，王健，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，天津医科大学第二医院，
类型：发明
国别省市：上海,31